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56 篇 鉴定

机构

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112 篇 中国农业科学院哈...
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96 篇 中国农业科学院哈...
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53 篇 中国农业科学院哈...
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作者

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202 篇 刘胜旺
192 篇 王云峰
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140 篇 祁小乐
139 篇 田志军
126 篇 于康震
126 篇 冯力
118 篇 刘明

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增强猪传染性胸膜肺炎灭活苗对小鼠的保护力及其机制研究

增强猪传染性胸膜肺炎灭活苗对小鼠的保护力及其机制研究

引用

中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：王勇李广兴刘思国王春来邵美丽刘建东宫强迟磊赵昆郭设平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001 东北农业大学哈尔滨150030 东北农业大学哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001

为了提高猪传染性胸膜肺炎灭活苗的保护力,本研究利用基因重组技术表达的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌6种主要致病因子蛋白:rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ、rApxⅣ、rApfa和rOMP.设立试验Ⅰ组(灭活苗),试验Ⅱ组(灭活苗、rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和... 详细信息

为了提高猪传染性胸膜肺炎灭活苗的保护力,本研究利用基因重组技术表达的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌6种主要致病因子蛋白:rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ、rApxⅣ、rApfa和rOMP.设立试验Ⅰ组(灭活苗),试验Ⅱ组(灭活苗、rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和rOMP),试验Ⅲ组(灭活苗、rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和rApxⅣ),试验Ⅳ组(灭活苗、rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和rApfa)和空白对照组(PBS),每组26只BALB/c小鼠,分3次免疫,每次间隔2周,每周检测血清抗体水平,在免疫后第2周、第4周和第5周,MTT法检测脾脏T细胞增殖水平及ELISA法测定IFN-γ分泌水平.在第3次免疫后的第7天,将每组剩余20只小鼠平均分成2组,分别以APP1型菌(5×109 cfu)和APP7型菌(1011cfu)进行攻毒保护试验.结果表明,向灭活苗中添加重组亚单位成分可以提高机体的细胞免疫和体液免疫水平,并能提高灭活苗的交叉保护率;试验Ⅱ组的ApxI和OMP抗体水平以及细胞免疫水平均显著高于其它各组(p＜0.05),对于APP1和APP7型菌的攻毒也提供了明显优于其它各组的保护结果,试验Ⅲ、Ⅳ组的细胞、体液免疫水平及保护率较试验Ⅰ组也有所提高.结果显示出ApxⅠ、OMP抗体水平和细胞免疫水平与攻毒保护率之间存在着正相关性,向灭活苗中加入重组蛋白成分可以提高疫苗的交叉保护,试验Ⅱ组通过激活体液免疫和细胞免疫,对两个血清型APP的攻击提供了很好的保护作用,从而为猪传染性胸膜肺炎新型疫苗的研制提供参考.

关键词：猪胸膜肺炎重组亚单位菌苗保护力细胞增殖 IEN-γ 灭活疫苗

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鸡传染性支气管重组鸡痘病毒基因工程疫苗对异源LHB株病毒攻击的免疫保护

鸡传染性支气管重组鸡痘病毒基因工程疫苗对异源LHB株病毒攻击的...

引用

中国农业生物技术学会动物生物技术分会第二届全国动物生物技术学术研讨会

作者：石星明王云峰王玫刘胜旺童光志徐灵龙贺笋中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

rFPV-IFNγS1是一株共表达传染性支气管炎病毒S1基因和鸡干扰素-γ基因的重组鸡痘病毒,将其接种SPF鸡3周后,用传染性支气管管炎病毒异源毒株攻击,考察重组疫苗对异源毒株攻击的保护作用.结果显示,疫苗接种后,免疫鸡血清中抗体很快产生,... 详细信息

rFPV-IFNγS1是一株共表达传染性支气管炎病毒S1基因和鸡干扰素-γ基因的重组鸡痘病毒,将其接种SPF鸡3周后,用传染性支气管管炎病毒异源毒株攻击,考察重组疫苗对异源毒株攻击的保护作用.结果显示,疫苗接种后,免疫鸡血清中抗体很快产生,外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞与非免疫对照组相比都有显著差异.用LHB株IB病毒攻击后,免疫鸡的病理损伤明显轻于非免疫对照组,并且其排毒时间明显缩短,排毒量明显减少,攻毒后免疫组的发病率为30﹪(3/10),死亡率为10﹪(1/10),非免疫对照组的发病率为100﹪(10/10),死亡率为40﹪(4/10).体重分析结果表明,攻毒前后免疫组与对照组相比,体重均没有显著变化,但攻毒后免疫组鸡体重增长的幅度要高于非免疫对照组.从以上结果可以说明,重组疫苗能在动物体内很好表达,对试验动物产生较好的保护作用,同时也减轻了重组疫苗对体重增长的抑制作用.

关键词：传染性支气管炎病毒重组鸡痘病毒 γ干扰素 S1蛋白基因工程疫苗

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传染性喉气管炎病毒WG株gE蛋白主要抗原性片段在大肠杆菌中的表达

传染性喉气管炎病毒WG株gE蛋白主要抗原性片段在大肠杆菌中的表达

引用

中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会

作者：何来王云峰童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

传染性喉气管炎病毒(Infectious Laryngotracheitis Virus,ILTV),属于疱疹病毒科的a-疱疹病毒亚科,在分类学上被确定为Gallid herpesvirus ***能引起感染鸡的死亡和产蛋下降而造成严重的经济损失,具有重要的兽医公共卫生意义.已有的研... 详细信息

传染性喉气管炎病毒(Infectious Laryngotracheitis Virus,ILTV),属于疱疹病毒科的a-疱疹病毒亚科,在分类学上被确定为Gallid herpesvirus ***能引起感染鸡的死亡和产蛋下降而造成严重的经济损失,具有重要的兽医公共卫生意义.已有的研究证明ILTV是非常有潜力的禽呼吸道病毒疫苗载体,且gE基因又是疱疹病毒重要的毒力相关基因,将gE蛋白的主要抗原性片段表达于大肠杆菌中,为进一步研究gE基因缺失标记疫苗和病毒感染的监测奠定基础.

关键词：传染性喉气管炎病毒 gE基因抗原性片段大肠杆菌

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鸡传染性支气管重组鸡痘病毒基因工程疫苗对异源LSC株病毒攻击的免疫保护

鸡传染性支气管重组鸡痘病毒基因工程疫苗对异源LSC株病毒攻击的...

引用

中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：王云峰石星明王玫刘胜旺童光志徐灵龙木古丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

rFPV-IFNγS1是一株共表达传染性支气管炎病毒S1基因和鸡干扰素-γ基因的重组鸡痘病毒,将其接种SPF鸡3周后,用传染性支气管炎病毒异源病毒LSC株攻击,考察重组疫苗对异源病毒攻击的保护作用.结果显示,疫苗接种后,免疫鸡血清中抗体很快产... 详细信息

rFPV-IFNγS1是一株共表达传染性支气管炎病毒S1基因和鸡干扰素-γ基因的重组鸡痘病毒,将其接种SPF鸡3周后,用传染性支气管炎病毒异源病毒LSC株攻击,考察重组疫苗对异源病毒攻击的保护作用.结果显示,疫苗接种后,免疫鸡血清中抗体很快产生,但攻毒后保护率结果说明,该疫苗不能对异源病毒提供坚强保护,攻毒后免疫组的发病率为50％(5/10),死亡率为20％(2/10),非免疫对照组的发病率为100％(10/10),死亡率为50％(5/10).疫苗接种之后外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞的百分含量略高于非免疫对照组,但这种差异并不显著.用LSC株IB病毒攻击后,虽然免疫鸡的病理损伤程度没有非免疫对照组严重,但二者差异不十分明显,在排毒时间和排毒量上也没有明显变化;体重分析结果显示,攻毒前后免疫组与对照组相比,体重均没有显著变化,但攻毒后免疫组试验鸡体重增长的幅度要高于非免疫对照组.从以上结果可以说明,重组疫苗虽然能在动物体内很好表达,但不能对试验动物产生较好的保护作用,而鸡干扰素-γ基因能在动物体内表达并发挥其免疫调节作用,减轻了重组疫苗对体重增长的抑制作用.

关键词：重组鸡痘病毒 γ干扰素 S1蛋白支气管炎病毒

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鸡法氏囊B淋巴细胞三框cDNA文库的构建

鸡法氏囊B淋巴细胞三框cDNA文库的构建

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十三次学术研讨会

作者：高玉龙刘伟高宏雷邓小芸李铁强王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室东北农业大学

传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是由鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)引起的危害雏鸡的一种急性、高度接触性病毒性传染病。该病主要引起3～8周龄的鸡发病,导致死亡和引起免疫抑制,并可诱...

传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是由鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)引起的危害雏鸡的一种急性、高度接触性病毒性传染病。该病主要引起3～8周龄的鸡发病,导致死亡和引起免疫抑制,并可诱发多种鸡病或使多种疫苗免疫失败。此外,由于近年来变异株和超强毒株的流行,常使IBD免疫鸡群发病,病死率升高达80%以上,严重威胁着养鸡业的发展。

关键词：

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牛分枝杆菌新型DNA疫苗对BALB/c小鼠的免疫效果研究

牛分枝杆菌新型DNA疫苗对BALB/c小鼠的免疫效果研究

引用

中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：宫强刘思国郭设平王春来王勇刘建东赵昆迟磊孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

利用PCR技术从牛分枝杆菌ValleeⅢ菌株中扩增出esat-6、mpb70和mpb83基因,通过重叠延伸剪接技术(SOE)合成mpb70-mpb83融合基因,连接真核表达载体pCDNA3.1(+),构建重组质粒pCDNA-esat-6(简称为pCE6)和pCDNA-mpb70-mpb83-esat-6(简称为pC70-83-E6).体外转染SP2/0细胞,间接免疫荧光检测目的基因的表达情况.然后进行动物免疫,实验动物分四组即:pCE6组、pC70-83-E6组、pCDNA3.1(+)组和PBS组,每组10只BALB/c小鼠,pCE6组、pC70-83-E6组和pCDNA3.1(+)组以100μg/只的剂量(胫前肌)免疫,PBS组每只小鼠胫前肌免疫100μl 1 ×PBS,各组均进行了三次免疫,每次间隔两周.间接ELISA检测免疫后小鼠血清特异性抗体水平,MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况和IFN～γ分泌情况.结果表明,两种重组质粒免疫后小鼠血清抗体水平持续上升,而pCDNA3.1(+)组和PBS组的血清抗体始终维持在较低水平,且pC70-83-E6组抗体水平高于pCE6.经PPD(5 μg/ml)刺激后,pCE6组和pC70-83-E6组的刺激值(SI值)与pCDNA3.1(+)组及PBS免疫组相比均差异显著(P＜0.05),而两重组质粒免疫组差异不显著(P＞0.05);PPD刺激后两重组质粒免疫的小鼠脾细胞产生的IFN～γ均显著高于两对照组产生的IFN～γ(P＜0.05),且pC70-83-E6组明显高于其他三组(P＜0.05),pCE6组只分泌很低的IFN～γ,而两对照组则未检测到IFN～γ的产生.本试验成功构建了牛分枝杆菌esat-6基因和mpb70-mpb83-esat-6融合基因DNA疫苗,从而为牛结核病新型疫苗的研制提供了理论依据.

关键词：牛分枝杆菌 esat-6基因 mpb70基因 mpb83基因 DNA疫苗免疫应答

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鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因在杆状病毒表达系统中的表达及免疫原性研究

鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因在杆状病毒表达系统中的表达及免疫...

引用

中国畜牧兽医学会禽病学分会第十三次学术研讨会

作者：高玉龙高宏雷王晓艳李俊山邓小芸刘伟王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室东北农业大学动物医学院

鸡传染性法氏囊病（IBD）是由鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）引起鸡的一种急性、高度接触性传染病。IBDV属于双股RNA病毒科禽双股RNA病毒属。其基因组由两个双股RNA片段组成,分别为A片段和B片段。VP2和VP3为病毒的主要结构蛋白。VP2含量...

鸡传染性法氏囊病（IBD）是由鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）引起鸡的一种急性、高度接触性传染病。IBDV属于双股RNA病毒科禽双股RNA病毒属。其基因组由两个双股RNA片段组成,分别为A片段和B片段。VP2和VP3为病毒的主要结构蛋白。VP2含量最高,其具有一个构象依赖性（不连续）的中和抗原决定簇,其诱导的中和抗体能被动地保护宿主不受IBDV感染,是IBDV的宿主保护性抗原。

关键词：

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H1N1亚型猪流感病毒HA基因的序列测定及原核表达

H1N1亚型猪流感病毒HA基因的序列测定及原核表达

引用

中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：丁选亚乔传玲韩庆功杨焕良陈艳辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

利用RT-PCR方法扩增出猪流感病毒A/Swine/Henan/11/2005(H1N1)HA基因,然后克隆到PMD18-T载体上,并进行测序和构建其系统进化树.根据测出的HA序列设计出带酶切位点的一对引物,并以PMD18-HA为模板进行PCR,扩增出HA的开放阅读框(ORF),克隆... 详细信息

利用RT-PCR方法扩增出猪流感病毒A/Swine/Henan/11/2005(H1N1)HA基因,然后克隆到PMD18-T载体上,并进行测序和构建其系统进化树.根据测出的HA序列设计出带酶切位点的一对引物,并以PMD18-HA为模板进行PCR,扩增出HA的开放阅读框(ORF),克隆到表达载体pET32a中,经双酶切和测序及PCR鉴定得到阳性重组表达质粒pET-HA,将质粒转化到表达宿主菌BL21(DE3)中,经终浓度为1mM的IPTG诱导,SDS-PAGE结果显示,HA蛋白获得了高效表达,经Western-blot检测证实表达产物具有良好的抗原反应活性,为以重组HA蛋白作为抗原建立检测H1N1亚型猪流感病毒血清学抗体水平奠定了基础.

关键词：猪流感病毒 HA基因原核表达基因序列

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猪γ干扰素基因真核重组表达质粒的构建及活性测定

猪γ干扰素基因真核重组表达质粒的构建及活性测定

引用

2006年全国博士生学术论坛——林业及生态建设领域相关学科

作者：张立娜刘培欣曹殿军闫丽辉贾竞波危艳武东北林业大学野生动物资源学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室东北林业大学野生动物资源学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室传染病研究室

以含有全长猪γ干扰素基因的质粒为模板，通过PCR方法扩增猪γ干扰素并引入酶切位点，酶切后与PCI真核表达载体连接在一起，测序后，经比较，所扩增序列同Genebank报道的IFN-γ序列同源性为99.8％。将重组质粒转染PK细胞，检测所转染的p... 详细信息

以含有全长猪γ干扰素基因的质粒为模板，通过PCR方法扩增猪γ干扰素并引入酶切位点，酶切后与PCI真核表达载体连接在一起，测序后，经比较，所扩增序列同Genebank报道的IFN-γ序列同源性为99.8％。将重组质粒转染PK细胞，检测所转染的pIFN-γ的抗病毒活性。试验结果表明，转染pIFN-γ试验组与正常细胞接毒对照组比较有显著差异，说明所构建的重组质粒转染后具有抗病毒作用。

关键词：猪γ干扰素基因真核表达重组质粒转染抗病毒活性测定 PCR方法

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马传染性贫血发病过程中细胞毒性T细胞的作用及其表位研究

马传染性贫血发病过程中细胞毒性T细胞的作用及其表位研究

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会暨第六届代表大会

作者：马建孔宪刚沈荣显周建华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨黑龙江150001 东北林业大学野生动物资源学院哈尔滨黑龙江150040 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨黑龙江150001

马传染性贫血(EquineInfectiousAnemia,EIA)是马属动物感染的一种主要经由虫媒传播的传染性疾病.该病的临床表征为反复发热、贫血、出血、水肿以及消瘦等,病理生理变化以血小板减少为主.EIA的致病原为马传染性贫血病毒(EquineInfectious... 详细信息

马传染性贫血(EquineInfectiousAnemia,EIA)是马属动物感染的一种主要经由虫媒传播的传染性疾病.该病的临床表征为反复发热、贫血、出血、水肿以及消瘦等,病理生理变化以血小板减少为主.EIA的致病原为马传染性贫血病毒(EquineInfectiousAnemiaVirus,EIAV),该病毒与人类免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiencyVirus,HIV),猴免疫缺陷病毒(SimianImmunodeficiencyVirus,SIV)等同属反转录病毒科,慢病毒属[2].EIA与HIV引起的人艾滋病和SIV引起的猴艾滋病在疾病特征上具有一定的相似性.然而,感染EIAV的多数马往往在经过一年左右的反复发热和与之相关联的病毒血症之后,最终能够控制住病毒在体内的复制(而非清除),转归为无明显临床症状的EIAV隐性携带马[3],这与人在感染艾滋病8-10年后几乎100％转轨死亡是有明显差别的.也正是由于这一差别,研究马与EIAV之间相互作用的机理,可作为研究艾滋病等慢病毒致病机理和防治策略的良好动物模型.因此,人们对EIA发病及控制机理有了更多的关注和研究.其中,细胞毒性T细胞(CytotoxicTlymphocyte,CTL)在病毒感染控制过程中起主要作用这一观点,随着相关研究的逐步深入,越来越得到人们的认同.

关键词：马传染性贫血发病过程细胞毒性T细胞动物感染

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