检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业科学 2005年第8期38卷 1675-1685页

作者：仇华吉童光志沈荣显中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

猪瘟是一种严重危害养猪业的毁灭性传染病。20世纪50年代中国首创了举世闻名的猪瘟兔化弱毒疫苗(即C株),随后创制了不同的疫苗制造工艺,如细胞培养苗、乳兔组织苗和牛体反应组织苗等。C株是一株非常安全的弱毒疫苗,对各种年龄和品种的... 详细信息

猪瘟是一种严重危害养猪业的毁灭性传染病。20世纪50年代中国首创了举世闻名的猪瘟兔化弱毒疫苗(即C株),随后创制了不同的疫苗制造工艺,如细胞培养苗、乳兔组织苗和牛体反应组织苗等。C株是一株非常安全的弱毒疫苗,对各种年龄和品种的猪都没有副作用,并且有良好的免疫效力,它能同时诱导体液免疫和细胞免疫应答,对不同基因型的猪瘟病毒株均能提供有效的免疫保护。免疫母猪通过母乳可对仔猪提供被动免疫保护,但过高水平的母源抗体会影响仔猪对C株疫苗的主动免疫应答。目前已经完成了包括C株及其亲本株在内的几十株猪瘟病毒的全基因组序列测定和注释,建立了猪瘟病毒的反向遗传操作系统,初步解析了猪瘟病毒主要基因的结构与功能,并构建了不同的反向遗传操作标记疫苗,赋予了C株疫苗新的生命和内涵。C株疫苗可以用于猪瘟的控制和根除,借助于C株疫苗密集接种和综合控制措施,有关国家有效地控制了猪瘟,甚至消灭了猪瘟。尽管如此,要在全球范围内根除猪瘟,今后依然有漫长的路要走,这可能有赖于对C株进行进一步改造和利用。

关键词：猪瘟猪瘟病毒猪瘟兔化弱毒疫苗

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SARS-CoV单克隆抗体的制备及抗原表位的初步鉴定

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生物工程学报 2005年第2期21卷 211-215页

作者：周艳君华荣虹王云峰安同庆刘金霞杨金雨华玉卓童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

参照已发表的SARS冠状病毒BJ0 1株基因序列 ,利用计算机软件预测并选取该病毒S、M、N三种主要结构蛋白部分抗原性优势区域 ,以编码Gly- Pro- Gly序列相连接合成两段嵌合基因A和B。并分别克隆于pGEX -6p- 1载体上用IPTG进行诱导表达 ,以... 详细信息

参照已发表的SARS冠状病毒BJ0 1株基因序列 ,利用计算机软件预测并选取该病毒S、M、N三种主要结构蛋白部分抗原性优势区域 ,以编码Gly- Pro- Gly序列相连接合成两段嵌合基因A和B。并分别克隆于pGEX -6p- 1载体上用IPTG进行诱导表达 ,以纯化的嵌合蛋白A和B为抗原 ,分别免疫BALB c小鼠制备单克隆抗体。利用单克隆抗体亚型检测试剂盒和SARS CoV商品化ELISA检测试剂盒对其进行亚型和特异性鉴定。结果表明融合表达两段嵌合基因产物 ,其大小分别为 34kD和35kD ,Westernblot分析证实两种表达产物都能被SARS病人康复期血清所识别。获得了 6株能稳定分泌特异性抗体的阳性细胞克隆株。亚型鉴定结果除D3C5为IgG2a外其他单抗均为IgG1,而且所有单抗的轻链均为κ链。特异性鉴定发现除D3D1外 ,其余的 5株单抗均能与SARS CoV商品化ELISA检测试剂盒发生特异性反应。将D3D1与灭活后经超声波裂解的SARS CoV进行Westernblot分析 ,发现它能特异性识别 180kD的蛋白带。分别融合表达了 6个S蛋白的寡肽 (S1- S6 ) ,并对筛选出的单克隆抗体相对应的抗原表位进行了初步鉴定。结果发现单克隆抗体D3D1特异性识别S2基因表达产物 (S蛋白的 4 4 7 4 5 8aa) ,D3C5特异性识别S5基因表达产物 (S蛋白的 789 799aa)。

关键词： SARS-CoY 单克隆抗体抗原表位

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表达H3N2亚型猪流感病毒HA基因重组伪狂犬病病毒的构建

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畜牧兽医学报 2005年第10期36卷 1043-1048页

作者：周国辉倪健强田志军仇华吉李海燕童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

将SV40启动子控制下的LacZ基因表达盒和CMV启动子控制下的H3N2亚型猪流感病毒(SIV H3N2)的HA基因插入到伪狂犬病病毒(PRV)通用转移载体pBdTK-Uni中,获得转移载体pLTK-HA。将该载体与PRV Bartha-K61株基因组DNA通过脂质体法共转染Vero细... 详细信息

将SV40启动子控制下的LacZ基因表达盒和CMV启动子控制下的H3N2亚型猪流感病毒(SIV H3N2)的HA基因插入到伪狂犬病病毒(PRV)通用转移载体pBdTK-Uni中,获得转移载体pLTK-HA。将该载体与PRV Bartha-K61株基因组DNA通过脂质体法共转染Vero细胞,经过10代蓝斑筛选、纯化和PCR鉴定获得了一株插入SIV HA基因的重组伪狂犬病病毒,命名为rPRV-HA。Western blotting和间接免疫荧光试验证实HA基因在重组病毒感染的细胞中获得了表达。用不同的细胞(PK-15I、BRS-2、Vero和鸡胚成纤维细胞)对该重组病毒与亲本病毒的增殖滴度和致细胞病变进行比较,未见显著差异,对第30代重组病毒的HA基因进行序列分析,表明该重组病毒遗传性状稳定。

关键词：伪狂犬病病毒猪流感病毒重组病毒 HA

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基于SemlikiForest病毒RNA复制子的猪瘟RNA疫苗的初步研究

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中国生物工程杂志 2005年第1期25卷 53-58页

作者：李娜仇华吉李国新朱庆虎罗玉子贾洪林童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

将猪瘟病毒E2基因克隆于我们此前构建的衍生于Semliki Forest病毒(semliki forest virus,SFV)RNA复制子的新型真核表达载体pSFV1CS中,获得重组质粒pSFV1CS-E2。用纯化的pSFV1CS-E2分别转染BHK-21细胞和293T细胞,经间接免疫荧光试验检测... 详细信息

将猪瘟病毒E2基因克隆于我们此前构建的衍生于Semliki Forest病毒(semliki forest virus,SFV)RNA复制子的新型真核表达载体pSFV1CS中,获得重组质粒pSFV1CS-E2。用纯化的pSFV1CS-E2分别转染BHK-21细胞和293T细胞,经间接免疫荧光试验检测显示,CSFV E2基因在转染细胞中得到表达。小鼠接种试验结果表明,10μg或100μg pSFV1CS-E2可诱导小鼠产生猪瘟特异性抗体。

关键词： Semliki Forest病毒 RNA复制子猪瘟 RNA疫苗猪瘟病毒真核表达载体

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猪瘟E^(rns)基因在大肠杆菌中的高效表达

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中国预防兽医学报 2005年第3期27卷 161-163页

作者：贾洪林仇华吉李娜朱庆虎罗玉子童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

提取猪瘟病毒石门系强毒株的基因组RNA,用RT_PCR扩增其Erns基因的cDNA,将其克隆到原核表达载体pPROEXTMHTc中,然后转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导,Erns基因获得高效表达。SDS_PAGE分析显示,表达的重组融合蛋白表现分子量约为31ku。Wester... 详细信息

提取猪瘟病毒石门系强毒株的基因组RNA,用RT_PCR扩增其Erns基因的cDNA,将其克隆到原核表达载体pPROEXTMHTc中,然后转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导,Erns基因获得高效表达。SDS_PAGE分析显示,表达的重组融合蛋白表现分子量约为31ku。Westernblot分析表明,重组蛋白具有良好的免疫原性。重组蛋白可用于制备诊断抗原,用于标记疫苗接种和野毒感染的鉴别诊断。

关键词：猪瘟病毒 RT-PCR 原核表达 E^rns基因大肠杆菌鉴别诊断

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伪狂犬病病毒Bartha-K61株UL49基因的克隆和序列分析

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中国预防兽医学报 2005年第4期27卷 269-272页

作者：刘建华李娜仇华吉田志军童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

根据已经发表的伪狂犬病病毒(PRV)国内Ea株UL49基因序列,设计并合成了1对引物,通过PCR方法扩增到了PRVBartha-K61株UL49基因的编码区,并克隆到pMD18_T载体中。重组质粒pMD_UL49经XhoI酶切和PCR鉴定后,进行了序列测定和分析。结果表明,... 详细信息

根据已经发表的伪狂犬病病毒(PRV)国内Ea株UL49基因序列,设计并合成了1对引物,通过PCR方法扩增到了PRVBartha-K61株UL49基因的编码区,并克隆到pMD18_T载体中。重组质粒pMD_UL49经XhoI酶切和PCR鉴定后,进行了序列测定和分析。结果表明,重组质粒pMD_UL49含有PRVBartha_K61株UL49基因的编码区。同源性分析显示,PRVBartha_K61株UL49基因序列与国外Kaplan株、国内Ea株相应基因的核苷酸同源性分别为98.9%和94.1%,推导的氨基酸序列同源性分别为96.7%和87.2%。

关键词：伪狂犬病病毒 UL49基因克隆序列分析

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基于重组E^(rns)蛋白的猪瘟E^(rns)-ELISA的建立和优化

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畜牧兽医学报 2005年第10期36卷 1028-1032页

作者：贾洪林仇华吉朱庆虎李国新李娜罗玉子刘永刚李艳童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

将大肠杆菌表达的猪瘟病毒重组Erns蛋白经纯化后作为包被抗原,建立了检测猪瘟抗体的Erns-ELISA方法。经优化试验,确定了最适抗原包被量为0.15μg;血清最适稀释度为1∶100。经阻断试验、交叉反应试验和重复性试验证明,建立的Erns-ELISA... 详细信息

将大肠杆菌表达的猪瘟病毒重组Erns蛋白经纯化后作为包被抗原,建立了检测猪瘟抗体的Erns-ELISA方法。经优化试验,确定了最适抗原包被量为0.15μg;血清最适稀释度为1∶100。经阻断试验、交叉反应试验和重复性试验证明,建立的Erns-ELISA简便、特异、稳定,与基于重组E2蛋白的E2-ELISA的符合率高达96.7%,与基于全病毒抗原的Dot-ELISA符合率为77.5%。可以用于猪瘟抗体的血清学监测以及用作基于E2蛋白的标记疫苗配套的鉴别诊断。

关键词：猪瘟 E^rns-ELISA 鉴别诊断

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传染性喉气管炎新城疫鸡痘重组病毒免疫效力的研究

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畜牧兽医学报 2005年第8期36卷 807-811页

作者：智海东王云峰张晶王玫王凤雪童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

在表达鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白gB基因和新城疫病毒(NDV)F基因的重组鸡痘病毒(rF-PV-gB-F)安全性检验合格后,以5.0×101～5.0×104PFU不同含量按0.1 mL/鸡的剂量免疫100只30日龄SPF鸡,30 d后分组分别用ILTVWG株和NDVF4... 详细信息

在表达鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白gB基因和新城疫病毒(NDV)F基因的重组鸡痘病毒(rF-PV-gB-F)安全性检验合格后,以5.0×101～5.0×104PFU不同含量按0.1 mL/鸡的剂量免疫100只30日龄SPF鸡,30 d后分组分别用ILTVWG株和NDVF48E9株强毒进行攻击.免疫鸡抗鸡痘病毒抗体都转为阳性,痘反应和接种剂量有关,重组疫苗的最小反应剂量为50PFU.重组疫苗可以诱发对新城疫和传染性喉气管炎的保护,0.1mL/鸡的接种量在500～5 000PFU浓度范围内的免疫效果最好,对于ILTV攻击的发病保护率在70%以上,对NDV强毒攻击的抗死亡保护率可以达到80%,这为进一步考察疫苗的免疫效力试验以及进行田间试验奠定了基础.

关键词：传染性喉气管炎新城疫重组鸡痘病毒最佳免疫剂量安全性

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CELO病毒载体在人类和动物疾病控制上的应用

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中国生物工程杂志 2005年第1期25卷 14-17页

作者：王凤雪王云峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

CELO病毒的DNA长43.8kb,具有末端倒转重复序列(ITR),基因结构与人腺病毒的比较,无可识别的E1、E3和E4区,但存在可替代的新读码框。2个fiber基因是病毒毒力基因,表达2个不同的蛋白,在病毒复制扩散中起作用,缺失fiber1导致柯萨奇病毒和腺... 详细信息

CELO病毒的DNA长43.8kb,具有末端倒转重复序列(ITR),基因结构与人腺病毒的比较,无可识别的E1、E3和E4区,但存在可替代的新读码框。2个fiber基因是病毒毒力基因,表达2个不同的蛋白,在病毒复制扩散中起作用,缺失fiber1导致柯萨奇病毒和腺病毒受体(CAR)的特异性转导作用消失,使CELO病毒只能感染禽类细胞,不能感染哺乳类动物细胞。在基因组的某些区段可以删除并插入外源基因不影响病毒复制。CELO病毒及其载体可在廉价的鸡胚中得到大量复制。CELO病毒的这些特性为其发展成新型基因工程栽体提供了条件。插入表达外源基因制备疫苗成为可能,新型的无病毒基因的载体也可以应用ITR及一些调控元件、包装信号共同构建形成。CELO病毒与人腺病毒属于同一属,CELO病毒作为基因工程载体有同样的特性,并且具有种属特异性和安全性,在动物基因工程疫苗的研制方面有特殊而广阔的研究和应用前景。

关键词： CELO病毒基因工程载体疾病控制禽腺病毒基因组结构基因治疗

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猪生殖与呼吸综合征病毒CH-1a株GP5蛋白基因的表达及其单克隆抗体的制备

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中国兽医科技 2005年第11期35卷 859-864页

作者：周艳君安同庆薛强仇华吉童光志刘金霞田志军王云峰彭金美中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

将猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1a株GP5蛋白基因信号肽部分删除后克隆于pGEX-6p-1载体上,并在大肠埃希氏菌中进行表达。经SDS-PAGE电泳分析发现,融合表达的rtGP5蛋白约42 ku,将融合蛋白rtGP5用PRRSV阳性血清进行Western-blotting分... 详细信息

将猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1a株GP5蛋白基因信号肽部分删除后克隆于pGEX-6p-1载体上,并在大肠埃希氏菌中进行表达。经SDS-PAGE电泳分析发现,融合表达的rtGP5蛋白约42 ku,将融合蛋白rtGP5用PRRSV阳性血清进行Western-blotting分析,证实所表达的融合蛋白能被其特异性识别。收获融合表达产物rtGP5,按50μg/只的剂量与等量弗氏佐剂乳化,经腹腔免疫BALB/c小鼠3次后,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,分别以融合蛋白rtGP5和GST蛋白为抗原,通过间接ELISA方法对融合细胞的上清液进行检测,筛选阳性克隆,结果得到了15株能稳定分泌抗rtGP5蛋白抗体的阳性细胞克隆株。经间接免疫荧光检测发现,获得的15株单克隆抗体都能与PRRSV感染细胞产生特异性荧光。15株单克隆抗体亚型鉴定结果显示均为IgG1型,且轻链均为κ链。

关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒 GP5蛋白单克隆抗体

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