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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会

作者：姜永萍张洪波李呈军步志高邓国华陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室

对HA基因密码子及表达载体优化的H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5的免疫效果进行了研究。pCAGGoptiHA5分别以100μg和10μg剂量一次或加强免疫3周龄SPF鸡,单次免疫后4周以同样剂量和途径加强免疫,单次免疫后4周、加强免疫后2周后分别用... 详细信息

对HA基因密码子及表达载体优化的H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5的免疫效果进行了研究。pCAGGoptiHA5分别以100μg和10μg剂量一次或加强免疫3周龄SPF鸡,单次免疫后4周以同样剂量和途径加强免疫,单次免疫后4周、加强免疫后2周后分别用100LD50的HPAIV A/Goose/GuangDong,1/96(H5N1)[Gs/GD/1/96(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况,分别于攻毒后第3、5、7 d采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血清HI抗体、NT抗体以及AGP抗体的动态变化。结果,100μg pCAGGop-tiHA5单次免疫、100μg pCAGGoptiHA5加强免疫以及10μgpCAGGoptiHA5加强免疫均可对免疫鸡形成100%完全保护(不发病、不致死、不排毒),10μg剂量pCAGGoptiHA5单次免疫可对免疫鸡形成100%的保护(不发病、不致死),结果表明,pCAGGoptiHA5作为免疫效果良好、成本低廉的优化DNA疫苗,有望成为预防H5亚型高致病力禽流感的高效、安全新型基因工程疫苗。

关键词：禽流感 H5亚型 DNA疫苗 pCAGGoptiHA5 完全保护

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不同致病力禽流感病毒的细胞生长特性

不同致病力禽流感病毒的细胞生长特性

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会

作者：刘丽玲王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室

本研究用2个不同亚型的AIV感染Madin-Darby canine kidney(MDCK)细胞,通过观察细胞病变、红细胞凝集实验、间接免疫荧光等探讨不同致病力禽流感病毒(AIV)在MDCK细胞上的生长特性;同时取这2株不同浓度(10-2-10-7)AIV在MDCK上培养72 h的... 详细信息

本研究用2个不同亚型的AIV感染Madin-Darby canine kidney(MDCK)细胞,通过观察细胞病变、红细胞凝集实验、间接免疫荧光等探讨不同致病力禽流感病毒(AIV)在MDCK细胞上的生长特性;同时取这2株不同浓度(10-2-10-7)AIV在MDCK上培养72 h的细胞培养上清0.1 mL接种于9-11日龄鸡胚尿囊腔,37℃孵育48h-72h,无菌收获尿囊液,再做红细胞凝集实验。结果显示:这2个亚型AIV感染MDCK细胞后,血凝价(HA)最高为27,表现为较低的红细胞凝集活性,高致病力禽流感病毒(HPAIV)红细胞凝集活性较低致病力禽流感病毒(LPAIV)出现的要早一些;上述2个亚型AIV的MDCK培养上清接种鸡胚48-72h后,HA较高,在25.5-210之间,而且HPAIV-A/Goose/Guang-dong/1/96高于LPAIV-A/Turkey/England/N28/73 。这2株AIV均可致MDCK细胞发生病变,但病变程度和病变出现的时间不同,A/Goose/Guangdong1/96[H5N1]憾染MDCK细胞后3d可见明显病变,A/Turkey/England/N28/73[H5N2]感染MDCK细胞后4-5d可见明显病变;2个亚型不同浓度(10-2-10-7)AIV的间接免疫荧光结果均为阳性。以上结果表明HPAIV和LPAIV可致MDCK细胞病变,但红细胞凝集活性较低,接种鸡胚后红细胞凝集活性显著提高。

关键词：禽流感病毒 MDCK细胞红细胞凝集活性间接免疫荧光

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具有HI活性的抗H7亚型流感病毒特异性单克隆抗体的研制

具有HI活性的抗H7亚型流感病毒特异性单克隆抗体的研制

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会

作者：邓国华张立春李雁冰王桂芹曲站红于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生生物技术国家重点实验室中国畜牧兽医总站中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生生物技术国家重点实验室

以H7N2亚型禽流感病毒分离株A/Chicken/Hebei/01/03(H7N2)(HB103)作为免疫原,浓缩纯化后免疫BALB/C小鼠,三次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,融合阳性细胞用血凝抑制(HI)方法进行检测,阳性细胞株经三代克隆纯化后,获得2株能稳... 详细信息

以H7N2亚型禽流感病毒分离株A/Chicken/Hebei/01/03(H7N2)(HB103)作为免疫原,浓缩纯化后免疫BALB/C小鼠,三次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,融合阳性细胞用血凝抑制(HI)方法进行检测,阳性细胞株经三代克隆纯化后,获得2株能稳定分泌抗血凝素特异性Hl单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为4CB、BBA。两株杂交瘤细胞株产生的小鼠腹水和细胞培养液上清的HI滴度分别是213、211和27、28。与其他具有血凝活性的禽类病毒以及其他14个HA亚型的禽流感病毒的交叉HI试验表明:这两三株单抗具有良好的禽流感病毒亚型特异性;与其他H7亚型流感病毒分离株的HI试验和中和试验证实这三株单抗具有良好的交叉性和中和活性。该亚型特异性单克隆抗体的研制成功为H7亚型禽流感病毒的疫情病原学快速诊断提供了物质基础。

关键词：禽流感 HI 单克隆抗体

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鸡传染性法氏囊病病毒Gt株全基因组分子标签的引入

鸡传染性法氏囊病病毒Gt株全基因组分子标签的引入

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中国畜牧兽医学会禽病学分会禽流感及免疫抑制病论坛

作者：祁小乐高宏雷王笑梅余力高玉龙中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院研究生院北京100081 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院研究生院北京100081

传染性法氏囊病(IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的危害世界养禽业的主要传染病之一.本研究设计了一套高效、快捷的突变方法,仅需设计一对引物,做一次PCR,既可引入感兴趣的突变,可单点突变,也可多点突变,对基因功能的研究十分有用... 详细信息

传染性法氏囊病(IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的危害世界养禽业的主要传染病之一.本研究设计了一套高效、快捷的突变方法,仅需设计一对引物,做一次PCR,既可引入感兴趣的突变,可单点突变,也可多点突变,对基因功能的研究十分有用.本研究仅通过突变一个核苷酸(沉默突变),分别在IBDVGt株A节段基因中引入原本不存在的EcoRV酶切位点,在B节段基因中引入原本不存在的PstⅠ酶切位点,作为IBDVGt株全基因组的分子标签.经过酶切鉴定和测序分析,证明在IBDVGt株A节段中成功引入了EcoRV酶切位点;在B节段中引入了PstⅠ酶切位点.这为IBDV反向遗传研究以及分子标记疫苗的开发奠定了基础.

关键词：传染性法氏囊病病毒 Gt株沉默突变分子标签

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断乳仔猪多系统衰竭综合征的病原学调查

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养猪 2005年第4期 25-27页

作者：李曦符芳王靖飞崔尚金童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所诊断与流行病学中心兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

此试验针对临床具有断乳仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)症状的猪只进行病原调查。2002年3月至2005年3月,在黑龙江省大庆、靠河寨和吉林省公主岭3个地区1～25周龄的猪群中,选择临床出现生长迟缓、停滞,呼吸困难、皮肤苍白和曾经具有此类症... 详细信息

此试验针对临床具有断乳仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)症状的猪只进行病原调查。2002年3月至2005年3月,在黑龙江省大庆、靠河寨和吉林省公主岭3个地区1～25周龄的猪群中,选择临床出现生长迟缓、停滞,呼吸困难、皮肤苍白和曾经具有此类症状并已死亡的猪只,采集病料共194份,通过聚合酶链反应(PCR)扩增Ⅱ型猪圆环病毒(PCV2)基因组的特异序列片断,扩增产物长度为900bp/470bp,检测病毒。结果发现,PCV2的总阳性率为21.1%(41/194),不同地区的检测结果不同,2002年,大庆某猪场发病猪中PCV2检测阳性率为5.1%(4/78),靠河寨某猪场发病猪中PCV2检测的阳性率为11.5%(9/78),2004年,公主岭某猪场发病猪中PCV2检测的阳性率为73.7%(28/38)。结果表明,临床发生PMWS症状的猪只,应用PCR法检测PCV2阳性率差别较大。病原学调查显示,在我国PMWS发生与多种因素相关,不仅仅是PCV2感染,PCV2感染与PMWS密切相关,但并不是出现PMWS症状的猪都发生PCV2感染,在未检测到PCV2的情况下,仍有PMWS发生。

关键词：断乳仔猪多系统衰竭综合征聚合酶链反立 Ⅱ型猪圆环病毒

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应用层次分析法进行高致病性禽流感免疫预防风险评估

应用层次分析法进行高致病性禽流感免疫预防风险评估

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会

作者：吴春艳王靖飞赵丽丹李静吉增涛杨艳涛李曦符芳崔尚金王笑梅童光志动物疫病诊断与流行病学中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

为对高致病性禽流感免疫预防带来的风险进行评估,本文利用头脑风暴法与实际相结合确定风险因素,利用层次分析法(Analytic Hierarchy Process,AHP)建立高致病性禽流感免疫预防风险分析模型,对各相关风险因素进行分析,结果表明:在层次单... 详细信息

为对高致病性禽流感免疫预防带来的风险进行评估,本文利用头脑风暴法与实际相结合确定风险因素,利用层次分析法(Analytic Hierarchy Process,AHP)建立高致病性禽流感免疫预防风险分析模型,对各相关风险因素进行分析,结果表明:在层次单排序中,饲养管理方面风险和免疫技术方面风险尤为重要,其中滥用疫苗、管理不良、接种操作不规范、免疫抑制病等方面处于各单层次风险的首位。在层次总排序中,管理不良、接种操作不规范、实验室监测等是我国免疫预防的高风险因素,如得不到切实的改善和提高,我国养禽业在免疫预防高致病性禽流感方面将很难达到预期良好的效果。

关键词：层次分析法判断矩阵高致病性禽流感免疫预防风险评估模型

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N3亚型禽流感病毒NA基因在昆虫细胞中的高效表达

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动物医学进展 2005年第10期26卷 50-54页

作者：刘明刘春国张云杨涛中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 沈阳农业大学辽宁沈阳110161

通过反向遗传操作技术开发出了防制H5N1亚型高致病力禽流感并能区分疫苗免疫和自然感染个体的重组H5N3 DIVA疫苗;为了建立配套诊断方法,通过杆状病毒表达系统表达了N3亚型禽流感病毒的NA蛋白。Western blotting和ELISA分析表明,表达的N... 详细信息

通过反向遗传操作技术开发出了防制H5N1亚型高致病力禽流感并能区分疫苗免疫和自然感染个体的重组H5N3 DIVA疫苗;为了建立配套诊断方法,通过杆状病毒表达系统表达了N3亚型禽流感病毒的NA蛋白。Western blotting和ELISA分析表明,表达的NA蛋白具有良好的抗原活性及特异性。NA蛋白的成功表达为重组H5N3 DI-VA疫苗的配套鉴别诊断试剂盒的研制以及该疫苗的推广与应用奠定了基础。

关键词：禽流感病毒 N3 杆状病毒表达 DIVA疫苗

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高致病性禽流感时空分布规律研究——传播的风险评估框架的初步建立

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中国禽业导刊 2005年第20期22卷 18-19页

作者：崔尚金王靖飞吴春燕李曦符芳童光志孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物疫病诊断与流行病学中心哈尔滨150001

高致病性禽流感的防控措施主要包括迅速确诊技术;疫区隔离封锁,扑杀病禽;对高风险、可能被传染的区域实施强制免疫等。在该病的防控工作中尚未运用风险评估方法,也无风险评估指标体系,难以正确识别其风险程度,无法进行风险跟踪与控制。... 详细信息

高致病性禽流感的防控措施主要包括迅速确诊技术;疫区隔离封锁,扑杀病禽;对高风险、可能被传染的区域实施强制免疫等。在该病的防控工作中尚未运用风险评估方法,也无风险评估指标体系,难以正确识别其风险程度,无法进行风险跟踪与控制。风险评估是指为了决策的需要,以科学为基础对具有不确定性的事件或结果进行逻辑判断的一种过程,是将专家经验知识和现代数学方法相结合,建立风险评估指标体系,确定指标值和权重,建立综合评价模型,最后用合适的阈值来确定风险程度或根据风险因素的权重采取相应防控措施。风险评估在工程学、生态学、信息学、项目投资、环境保护、生物防治、动植物检疫、生物多样性研究等诸多领域广泛应用。在动物医学领域中,如口蹄疫、蓝舌病、牛海绵状脑病等流行病的监测中都运用风险分析方法。联合国粮农组织呼吁在区域一级建立能够满足局部区域以及国际社会需要的高致病性禽流感风险预警的兽医监视框架,风险评估框架对科学防控高致病性禽流感有重要决策意义。

关键词：高致病性禽流感风险评估方法框架规律研究时空分布评估指标体系防控措施传播综合评价模型风险分析方法

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禽流感病毒抗体胶体金检测方法与试剂的研制

禽流感病毒抗体胶体金检测方法与试剂的研制

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第二届全国现代免疫诊断技术学术研讨会

作者：崔尚金姜建宏童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨150001 兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨150001 东北农业大学哈尔滨150001

本研究建立一种快速、简易的胶体金免疫层析法(GICA),用于动物血清中流感病毒抗体的监测.本实验利用原核表达方法制备出流感NP核蛋白表达抗原,并用该抗原包被胶体金,依次将鸡流感多克隆抗体、流感NP核蛋白表达抗原固定在硝酸纤维素(NC)... 详细信息

本研究建立一种快速、简易的胶体金免疫层析法(GICA),用于动物血清中流感病毒抗体的监测.本实验利用原核表达方法制备出流感NP核蛋白表达抗原,并用该抗原包被胶体金,依次将鸡流感多克隆抗体、流感NP核蛋白表达抗原固定在硝酸纤维素(NC)膜上,制备成免疫胶体金检测板.检测时血清中流感抗体与金标抗原结合,沿着NC膜层析移动,当与NC膜上相应的配体结合后形成肉眼可见的紫红色斑点.经特异性交叉试验和敏感性测试表明本方法特异性好、灵敏度高.流感免疫胶体金抗体诊断技术的建立为监测动物血清中的流感病毒抗体提供了一种快速、简便的方法。

关键词：禽流感病毒禽流感病毒抗体流感NP蛋白胶体金免疫层析法 ELISA法

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猪繁殖与呼吸综合征胶体金抗体检测技术的建立和初步应用

猪繁殖与呼吸综合征胶体金抗体检测技术的建立和初步应用

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第二届全国现代免疫诊断技术学术研讨会

作者：崔尚金姜建宏周艳君仇华吉童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨150001 兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨150001 东北农业大学哈尔滨150001

用胶体金标记纯化后的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因工程表达抗原,建立一种以微孔滤膜为固相载体,以红色胶体金为标记物的检测PRRSV抗体的胶体金免疫层析法(GICA).特异性交叉试验证明GICA检测PRRSV抗体有较高的特异性.与其他方法... 详细信息

用胶体金标记纯化后的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因工程表达抗原,建立一种以微孔滤膜为固相载体,以红色胶体金为标记物的检测PRRSV抗体的胶体金免疫层析法(GICA).特异性交叉试验证明GICA检测PRRSV抗体有较高的特异性.与其他方法对比检测证实了其敏感性.生产了一批免疫胶体金试纸条,检测36份临床样本,其中30份经免疫胶体金试纸条及ELISA、免疫荧光检测均为阳性.猪繁殖与呼吸综合征免疫胶体金抗体检测技术的建立为检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体提供了一种快速简便的方法。

关键词：猪繁殖呼吸综合征胶体金免疫层析法 ELISA法表达抗原 PRRSV抗体检测

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