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第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会

作者：王秀荣石锐李冬梅刘丽玲孙凯孔宪刚包红梅陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室

用AIV、NDV、IBDV和IBV质粒和引物扩增得到8个PCR产物,处理后作为捕捉DNA点在氨基包被的载玻片上,作为待检芯片。待检样品为四种病原的鸡胚培养物,提取病毒RNA后,利用一步法多重RT-PCR,在反应体系中加入8对特异性引物和荧光素Cy5-dUTP,... 详细信息

用AIV、NDV、IBDV和IBV质粒和引物扩增得到8个PCR产物,处理后作为捕捉DNA点在氨基包被的载玻片上,作为待检芯片。待检样品为四种病原的鸡胚培养物,提取病毒RNA后,利用一步法多重RT-PCR,在反应体系中加入8对特异性引物和荧光素Cy5-dUTP,获得荧光标记的混合PCR产物,处理后与制备好的检测芯片杂交,扫描待检样品与芯片上捕捉探针的结合位点,杂交信号与预期设想一致。结果显示,通过一次杂交可确定待检样品中是否含有AIV、IBDV、IBV、NDV。

关键词： AIV NDV IBDV IBV DNA芯片同步检测多重RT-PCR

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禽流感发生的流行病

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中国禽业导刊 2005年第22期22卷 4-7页

今年以来,国外高致病性禽流感疫情呈明显扩大态势,特别是进入秋冬季以后,候鸟向南迁徙,家禽调运频繁,极易造成疫情传人和爆发.禽流感虽然没有像2003年的SARS疫情那样明显地影响和改变我们的生活,但接连由动物引发的威胁到人类健康甚至... 详细信息

今年以来,国外高致病性禽流感疫情呈明显扩大态势,特别是进入秋冬季以后,候鸟向南迁徙,家禽调运频繁,极易造成疫情传人和爆发.禽流感虽然没有像2003年的SARS疫情那样明显地影响和改变我们的生活,但接连由动物引发的威胁到人类健康甚至生存的疫情,还是让人产生很多的联想和思索.微生物远在人类出现之前就存在于这个星球上了,也将伴随着人类生命的进化而进化,或许它在人类生命消失之后还会存在于这个星球.而由于微生物对环境的适应力极强,它不会像动物或者植物那样出现某个种类的灭绝,科学的发展,也只能是尽力控制病毒.流感病毒也是如此.禽流感的发生和流行有其必然的因素.今年导致禽流感流行传染的原因除了周边国家发生禽流感以外,主要如下:对禽粪检疫力度不够或缺少主动监测;候鸟迂徙导致疫情蔓延;人畜禽间保持密切接触等.农业部对全国部分地区发生的禽流感疫情高度重视,特别派国家动物流行病学研究中心专家赴疫区,协助开展流行病学调查和疫情追踪工作.总结禽流感的发生与流行,希望能对禽流感的防制提供参考.

关键词：高致病性禽流感疫情动物流行病学人类健康 SARS疫情流行病学调查流感病毒周边国家主动监测部分地区研究中心

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real-time RT-PCR检测禽流感病毒的初步探讨

real-time RT-PCR检测禽流感病毒的初步探讨

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第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会

作者：刘丽玲王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室

用4个不同亚型的禽流感病毒(AIV)感染Madin-Darby canine kidney(MDCK)细胞,收集感染后6h,12h,24h,48h,72h的病毒,提取总RNA,利用Rotor Gene3000实时定量PCR仪对AIV型特异性基因-基质蛋白(M)基因的表达进行检测,试图建立快速检测A型流... 详细信息

用4个不同亚型的禽流感病毒(AIV)感染Madin-Darby canine kidney(MDCK)细胞,收集感染后6h,12h,24h,48h,72h的病毒,提取总RNA,利用Rotor Gene3000实时定量PCR仪对AIV型特异性基因-基质蛋白(M)基因的表达进行检测,试图建立快速检测A型流感病毒的real-time RT-PCR方法。结果表明:病毒感染MDCK细胞后6h,12h,24h表达水平很低,而48h和72h表达水平较高;我们建立的M基因的RRT-PCR方法能检测到感染MDCK细胞后6h的这4种流感病毒,比常规RT-PCR方法(只能检测到24h后)更灵敏,而且更廉价。

关键词：禽流感病毒 RT-PCR检测特异性基因基质蛋白基因 MDCK细胞

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应用层次分析法进行高致病性禽流感免疫预防风险评估

应用层次分析法进行高致病性禽流感免疫预防风险评估

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第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会

作者：吴春艳王靖飞赵丽丹李静吉增涛杨艳涛李曦符芳崔尚金王笑梅童光志兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病诊断与流行病学中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

为对高致病性禽流感免疫预防带来的风险进行评估,本文利用头脑风暴法与实际相结合确定风险因素,利用层次分析法(Analytic Hierarchy Process,AHP)建立高致病性禽流感免疫预防风险分析模型,对各相关风险因素进行分析,结果表明:在层次单... 详细信息

为对高致病性禽流感免疫预防带来的风险进行评估,本文利用头脑风暴法与实际相结合确定风险因素,利用层次分析法(Analytic Hierarchy Process,AHP)建立高致病性禽流感免疫预防风险分析模型,对各相关风险因素进行分析,结果表明:在层次单排序中,饲养管理方面风险和免疫技术方面风险尤为重要,其中滥用疫苗、管理不良、接种操作不规范、免疫抑制病等方面处于各单层次风险的首位。在层次总排序中,管理不良、接种操作不规范、实验室监测等是我国免疫预防的高风险因素,如得不到切实的改善和提高,我国养禽业在免疫预防高致病性禽流感方面将很难达到预期良好的效果。

关键词：层次分析法判断矩阵高致病性禽流感免疫预防风险评估模型

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禽流感病毒HA基因DNA疫苗诱导SPF鸡 CD8+T淋巴细胞的动态变化

禽流感病毒HA基因DNA疫苗诱导SPF鸡 CD8+T淋巴细胞的动态变化

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中国畜牧兽医学会生物制品学分会第十次学术研讨会

作者：张洪波姜永萍王全英赵有淑张平静左青山陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

用表达禽流感血凝素HA抗原的重组质粒pCAGGoptiHA5100μg免疫SPF鸡,用流式细胞仪检测鸡体内CD8+T细胞的动态变化.在一次免疫后,免疫组外周血中CD8+T淋巴细胞的数目逐渐上升,并于第三周达到峰值,CD8+T淋巴细胞的数量在攻毒后第三天迅速上... 详细信息

用表达禽流感血凝素HA抗原的重组质粒pCAGGoptiHA5100μg免疫SPF鸡,用流式细胞仪检测鸡体内CD8+T细胞的动态变化.在一次免疫后,免疫组外周血中CD8+T淋巴细胞的数目逐渐上升,并于第三周达到峰值,CD8+T淋巴细胞的数量在攻毒后第三天迅速上升,在攻毒后的一周内维持在一个较高的水平,并于第二周下降到一个较低的水平.在两次免疫后,SPF鸡体内CD8+T细胞数量上升速率明显高于初免时上升速率并于第二次免疫后两周达到一个峰值,攻毒后,两次免疫的SPF鸡外周血中CD8+T淋巴细胞数量略有上升,但上升幅度不大,两周时检测发现其下降幅度明显低于一次免疫组.而阴性对照组SPF鸡外周血中CD8+T淋巴细胞的数目则无明显变化,但在攻毒后其外周血中CD8+T淋巴细胞数量也呈上升趋势,但未达到免疫组的水平,并且在一周内全部死亡.结果表明,pCAGGoptiHA5DNA疫苗质粒可诱导有效的细胞免疫应答.

关键词：血凝素HA抗原 DNA疫苗 T淋巴细胞禽流感病毒免疫接种动态变化

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禽流感发生的流行病学分析与应对措施

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中国禽业导刊 2005年第22期22卷 4-7页

作者：崔尚金李曦符芳王靖飞吴春燕童光志孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物疫病诊断与流行病学研究中心哈尔滨150001

文章详细阐述了禽流感病毒的特性以及禽流感流行的主客观规律,作者认为对禽类缺少检疫和监测,人、畜、禽间密切接触,候鸟迁徙等因素会造成禽流感爆发流行,并对如何有效防控禽流感提出了具体措施,指出对禽流感建立主动监测和预警系统是... 详细信息

文章详细阐述了禽流感病毒的特性以及禽流感流行的主客观规律,作者认为对禽类缺少检疫和监测,人、畜、禽间密切接触,候鸟迁徙等因素会造成禽流感爆发流行,并对如何有效防控禽流感提出了具体措施,指出对禽流感建立主动监测和预警系统是十分必要的。

关键词：高致病性禽流感疫情动物流行病学人类健康 SARS疫情流行病学调查流感病毒周边国家主动监测部分地区研究中心

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检测和鉴别猪瘟强弱毒的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)的建立

检测和鉴别猪瘟强弱毒的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会

作者：李艳仇华吉王秀荣张守发朱庆虎李娜李国新童光志延边大学农学院吉林龙井133400 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 延边大学农学院吉林龙井133400 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

GenBank上登录的所有猪瘟病毒(classicalswinefever,CSFV)基因组全序列,选择高度保守区设计了一对通用引物P1和P4,并在该对引物跨越区域的内部设计了猪瘟兔化弱毒疫苗特异性引物P2及猪瘟强毒特异性引物P3,用引物P1/P4进行RT-PCR,然后用... 详细信息

GenBank上登录的所有猪瘟病毒(classicalswinefever,CSFV)基因组全序列,选择高度保守区设计了一对通用引物P1和P4,并在该对引物跨越区域的内部设计了猪瘟兔化弱毒疫苗特异性引物P2及猪瘟强毒特异性引物P3,用引物P1/P4进行RT-PCR,然后用引物P2/P3/P4进行复合套式PCR,建立了一种能区分猪瘟强弱毒的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)的鉴别诊断方法.应用该方法从猪瘟兔化弱毒株和猪瘟强毒石门株基因组中扩增出了大小分别为447bp和343bp的一条特异性片段,从两种病毒基因组混合物中扩增出了大小为447bp和343bp的两条特异性片段,但对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(RV)、乙型脑炎病毒(JEV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)的细胞培养物以及正常细胞基因组进行复合RT-nPCR扩增时均为阴性.该方法可以检测出0.04pg的病毒RNA.对从黑龙江省采集的15份疑似猪瘟病料进行了检测,结果表明,有14份类似猪瘟强毒,1份类似猪瘟弱毒.用限制性片段长度多态性(RFLP)对15份病料、猪瘟兔化弱毒株和石门株的RT-nPCR产物进行分析,发现石门株和14份黑龙江省强毒样品的扩增产物中均能被ApaⅠ切开,而猪瘟兔化弱毒株和1份黑龙江省弱毒样品无此识别位点,但有1个BanⅡ识别位点.从14份样品中抽检7份,对NS5B基因进行种系发生分析表明,它们均接近于石门株.本研究建立的复合RT-nPCR可以有效检测猪瘟病毒感染并把强毒和弱毒区分开,有助于减少未感染的免疫猪被误杀的可能,降低经济损失.

关键词：猪瘟病毒聚合酶链式反应限制性片段长度多态性基因组序列鉴别诊断

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2004年黑龙江省新城疫病毒分子流行病学分析

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动物医学进展 2005年第7期26卷 91-97页

作者：连宏军刘培欣闫丽辉曹殿军孙建宏梁宏志韩正博冉多良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学哈尔滨市兽医卫生防疫站黑龙江哈尔滨15004

2004年从黑龙江省部分鸡场疑似新城疫(ND)病死鸡和鸽体内分离到9株NDV。对这9株NDV生物学特性进行测定,并对其F基因包括裂解位点在内的540bp片段进行了克隆、测序和同源性分析。结果表明,9株NDV鸡胚平均死亡时间(MDT)和1日龄雏鸡脑内接... 详细信息

2004年从黑龙江省部分鸡场疑似新城疫(ND)病死鸡和鸽体内分离到9株NDV。对这9株NDV生物学特性进行测定,并对其F基因包括裂解位点在内的540bp片段进行了克隆、测序和同源性分析。结果表明,9株NDV鸡胚平均死亡时间(MDT)和1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)分别在47.8h～78.4h和1.51～2.00之间;8个分离株在F蛋白裂解位点氨基酸顺序为112RRQKRF117,1个分离株F蛋白裂解位点氨基酸顺序为112RRQRRF117,表明了它们全为ND中、强毒株。同源性分析显示,9株NDV分离株之间核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为79.7%～99.7%和79.8%～100%;系统发生树分析表明,6株分离株与台湾株(TW98、TW99和TW2000等)遗传距离较近,可能有共同的起源,为基因Ⅶe型NDV,2株为鸽源NDV基因Ⅵ型,1株与我国特有的F48E9遗传距离最近,为基因Ⅸ型NDV。

关键词： 2004年黑龙江省流行病学分析新城疫病毒分子同源性分析裂解位点氨基酸同源性遗传距离 NDV 生物学特性系统发生树分离株死亡时间 F蛋白病死鸡 F基因强毒株核苷酸分析表顺序鸡场接种日龄鸡胚鸽源

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检测猪圆环病毒DNA的竞争定量PCR方法的建立及初步应用

检测猪圆环病毒DNA的竞争定量PCR方法的建立及初步应用

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第二届全国现代免疫诊断技术学术研讨会

作者：蔡阳崔尚金童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所疫病诊断与流行病学中心哈尔滨150001 兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

本研究建立了定量检测猪圆环病毒DNA的竞争PCR方法.应用PCR扩增PCV-20RF2上490bp片段P3P4,隆到pMD18-T载体获得目标模板.构建含692bp的C-P3P4DNA片段的竞争模板,其携带与目标DNA和靶DNA相同的引物结合区.以定量的竞争模板同一系列稀释... 详细信息

本研究建立了定量检测猪圆环病毒DNA的竞争PCR方法.应用PCR扩增PCV-20RF2上490bp片段P3P4,隆到pMD18-T载体获得目标模板.构建含692bp的C-P3P4DNA片段的竞争模板,其携带与目标DNA和靶DNA相同的引物结合区.以定量的竞争模板同一系列稀释的竞争模板进行竞争PCR扩增,以产物的荧光强度(IOD)绘制标准曲线,结果当反应体系中起始模板的量为1.0×107Cop/ul,循环次数小于或等于30时,原始模板数以指数增长.由此确定目标摸板和竞争模板的最适工作浓度并用该方法检测感染细胞内的PCV-2基因组的拷贝数和临床样品中的PCV-2DNA含量,结果发现临床样品中的PCV-2DNA含量达到一定程度(肺中1.0145×108Copies/ml,血中0.8×107copies/ml,淋巴中9.698×108copies/ml),猪表现临床症状,而病毒在感染细胞内的复制在80h基因组的拷贝数达到最高,这为今后的研究奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒DNA检测竞争定量PCR扩增临床症状猪系统衰竭综合征免疫荧光试验核酸探针

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禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗(H5亚型)研究与应用

禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗(H5亚型)研究与应用

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会

作者：乔传玲于康震姜永萍李呈军田国彬王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室全国畜牧兽医总站

本研究利用DNA重组技术,以我国H5N1亚型禽流感病毒早期分离株的HA和NA基因为抗原基因供体,以高度成熟安全的鸡痘病毒疫苗株S-FPV-017为载体,构建了一株可共表达HA和NA基因的重组鸡痘病毒疫苗株。经细胞连续传代确证了重组病毒良好的遗... 详细信息

本研究利用DNA重组技术,以我国H5N1亚型禽流感病毒早期分离株的HA和NA基因为抗原基因供体,以高度成熟安全的鸡痘病毒疫苗株S-FPV-017为载体,构建了一株可共表达HA和NA基因的重组鸡痘病毒疫苗株。经细胞连续传代确证了重组病毒良好的遗传稳定性,经鸡体内连续传代证实了其毒力稳定性。大量的实验室研究与现地应用结果表明,该疫苗免疫后对鸡十分安全、无任何不良反应;免疫后1周可诱导免疫效力产生,免疫持续期可达10个月。

关键词：禽流感重组鸡痘病毒疫苗

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