检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2004年第5期35卷 546-549页

作者：王云峰智海东王玫孙永科张晶仇华吉周艳君田志军张绍杰童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

为了检测抗鸡痘病毒母源抗体对喉气管炎重组鸡痘疫苗的影响,孵化一批来自禽痘病毒高免母鸡的雏鸡,采用ELISA方法检测鸡痘疫苗免疫鸡后代的血清抗体。检测结果表明,雏鸡自孵出2d开始,血清鸡痘病毒抗体水平就开始缓慢下降,到15日龄时下降... 详细信息

为了检测抗鸡痘病毒母源抗体对喉气管炎重组鸡痘疫苗的影响,孵化一批来自禽痘病毒高免母鸡的雏鸡,采用ELISA方法检测鸡痘疫苗免疫鸡后代的血清抗体。检测结果表明,雏鸡自孵出2d开始,血清鸡痘病毒抗体水平就开始缓慢下降,到15日龄时下降至临界值,已有部分鸡开始出现抗体阴性反应;到21日龄时,全部被检血清抗体水平均转为阴性。分别于不同日龄对试验雏鸡免疫接种重组鸡痘疫苗,结果只有当鸡体内的鸡痘病毒母源抗体全部为阴性(21日龄)后免疫时才能产生可靠的保护作用,保护率达到80%以上。这说明鸡痘病毒母源抗体对重组鸡痘疫苗的效果有一定的影响,因此重组疫苗合理的首免时间应选择在3周龄以后。

关键词：鸡鸡痘母源抗体重组鸡痘疫苗免疫效力 ELISA 传染性喉气管炎

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抗鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗同居感染试验

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中国预防兽医学报 2004年第1期26卷 51-54页

作者：王云峰智海东王玫孙永科仇华吉周艳君田志军张绍杰童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

疫苗的接触传播是疫苗免疫接种需要考虑的重要因素,为了检测重组鸡痘病毒载体疫苗水平传播的能力,对隔离条件下饲养的SPF鸡用重组鸡痘病毒基因工程疫苗接种,同时设立非免疫对照鸡,饲养期间特意延长清粪时间以增加感染的机会,1个月之后... 详细信息

疫苗的接触传播是疫苗免疫接种需要考虑的重要因素,为了检测重组鸡痘病毒载体疫苗水平传播的能力,对隔离条件下饲养的SPF鸡用重组鸡痘病毒基因工程疫苗接种,同时设立非免疫对照鸡,饲养期间特意延长清粪时间以增加感染的机会,1个月之后攻击传染性喉气管炎WG株强毒和鸡痘102株强毒,疫苗免疫鸡全部获得保护,而非免疫鸡则全部发病。在试验动物饲养场的自然条件下,将免疫鸡和试验对照两组鸡饲养在同一个鸡舍内,让疫苗毒的传播更接近自然条件。在每个月的攻毒试验中,对照鸡都没有获得对鸡痘和传染性喉气管炎强毒的保护。在疫苗免疫期间进行连续5个月的跟踪检测,同居未免疫鸡没有检测到抗传染性喉气管炎病毒gB抗体。这些实验结果表明抗鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗不能通过接触传播。

关键词：传染性喉气管炎病毒鸡痘病毒抗鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗同居感染试验免疫接种

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猪II型圆环病毒全基因组序列分析及其ORF1和ORF2基因的克隆与表达

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中国预防兽医学报 2004年第1期26卷 10-13页

作者：韩凌霞陈艳崔尚金王云峰仇华吉童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

猪II型圆环病毒(PCV＿2)的2个主要开放阅读框ORF1和ORF2分别编码病毒的复制酶Rep和结构蛋白Cap。本试验将分离株L株病毒感染PK15细胞系,提取总DNA并以其为模板,通过PCR分别扩增了全病毒基因组、完整的Rep和Cap基因,并克隆到pMD18T载体中... 详细信息

猪II型圆环病毒(PCV＿2)的2个主要开放阅读框ORF1和ORF2分别编码病毒的复制酶Rep和结构蛋白Cap。本试验将分离株L株病毒感染PK15细胞系,提取总DNA并以其为模板,通过PCR分别扩增了全病毒基因组、完整的Rep和Cap基因,并克隆到pMD18T载体中,进行了序列测定。将Rep和Cap基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pPROEXTMHT中,以融合蛋白的形式表达了这两种蛋白。根据文献报道,致病性的PCV＿2与无致病性的PCV1的型特异性抗原决定簇主要位于Cap基因的羧基端部分,本实验利用原核表达载体pGEX＿6p＿1融合表达了Cap基因羧基端423bp的片段。通过薄层扫描各重组菌诱导表达产物的SDS＿PAGE结果,重组质粒pPRO＿Cap和pPRO＿Rep以及pGEX＿ΔCap的外源基因表达量分别占总菌体总蛋白的15.1%、30.4%和19.6%。将表达的三种蛋白作为抗原,通过酶联免疫吸附试验分别与PCV＿2阳性猪血清和SPF猪血清进行了反应,pGEX＿ΔCap表达的蛋白(Cap蛋白的羧基端部分)抗原反应性最强,这表明截短的Cap蛋白羧基端部分将是一个良好的诊断PCV＿2感染用候选抗原。

关键词： PCV-2 诊断抗原猪II型圆环病毒全基因组序列分析 ORFl基因 ORF2基因基因克隆基因表达

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猪流感病毒核蛋白基因的原核表达及其在诊断中的初步应用

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中国预防兽医学报 2004年第1期26卷 18-21页

作者：倪建强张春玲李海燕崔尚金仇华吉王云峰田志军童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

根据GenBank中A/Swine/HongKong/126/82(H3N2)株猪流感病毒(SIV)NP基因核苷酸序列设计合成一对引物,经RT＿PCR扩增了我国SIV分离株A/Swine/Heilongjiang/3/2000(H3N2)的核蛋白(NP)基因。将扩增所得NP基因克隆于pMD18＿T载体,酶切鉴定后对其序列分析表明NP基因与香港分离株同源性高达93.8%,然后定向亚克隆NP基因于原核表达载体pET30(a)的多克隆位点中,经酶切鉴定后,将含有NP基因的重组质粒命名为pET＿NP。用pET＿NP转化受体菌BL21,用诱导剂IPTG以不同浓度进行诱导,并在不同诱导时间收集样品。经SDS＿PAGE电泳分析证实NP基因获得了表达,并在终浓度为1mM的IPTG诱导下,6h其表达量达到高峰,经Westernblot分析证实表达的重组核蛋白具有反应活性,大小约为60kD。用表达产物作琼脂扩散试验,结果表明表达产物与SIV抗血清可形成清晰的反应沉淀线,而与其它9种猪病原阳性血清不发生反应。正常菌体蛋白与SIV阳性血清也不发生反应。通过对40份送检血清样品的检测结果显示其与HI试验的相符率高达95%以上。试验证明利用原核表达系统制备的重组核蛋白作为诊断用抗原,不仅制备过程简单而且所建立的琼扩诊断方法特异、快速、简便,其灵敏度也能满足现地的使用要求。目前正在进行现地的中试试验。

关键词： SIV 琼脂扩散试验猪流感病毒核蛋白基因表达疾病诊断

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表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒疫苗免疫持续期试验

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中国预防兽医学报 2004年第2期26卷 131-135页

作者：王云峰智海东王玫彭金美仇华吉周艳君田志军张绍杰童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

将200003批疫苗免疫4周龄SPF鸡,免疫后的7、14、21、30、60、90、120、150、180和225d分别采血,分离血清,采用ELISA方法检测血清抗FPV抗体,结果表明重组疫苗免疫后14d,免疫鸡血清抗体已经全部阳转,免疫后的21d血清抗FPV的抗体出现峰值,... 详细信息

将200003批疫苗免疫4周龄SPF鸡,免疫后的7、14、21、30、60、90、120、150、180和225d分别采血,分离血清,采用ELISA方法检测血清抗FPV抗体,结果表明重组疫苗免疫后14d,免疫鸡血清抗体已经全部阳转,免疫后的21d血清抗FPV的抗体出现峰值,此后便开始下降,到免疫后的6个月抗体水平已经接近阴性对照的水平。用ILTVWG株和FPV102株强毒进行的攻毒保护试验与血清检测的结果基本一致,在免疫后的5个月内可以使免疫鸡获得100%(10/10)保护,免疫后的6个月对ILT和FP的免疫保护分别为1/7和2/10,此时需要对鸡群实施二次免疫。其他5批疫苗(200001、200002、200101、200102和200103)免疫SPF鸡后5个月用ILTVWG株和FPV102株攻击也获得了完全保护。

关键词：传染性喉气管炎鸡痘重组鸡痘病毒免疫持续期

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伪狂犬病病毒gE/TK基因缺失突变株的构建

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中国预防兽医学报 2004年第3期26卷 181-185页

作者：田志军仇华吉倪健强周艳君王云峰童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

在伪狂犬病病毒转移载体pBdTK＿Uni的多克隆位点中插入由SV40启动子控制下的LacZ基因表达盒,同时在右侧同源臂下游插入一个1 7kb的KpnI片段,构建成一个新的转移载体pUni＿LacZ。用该载体与Bartha＿K61株基因组通过脂质体法共转染Vero细... 详细信息

在伪狂犬病病毒转移载体pBdTK＿Uni的多克隆位点中插入由SV40启动子控制下的LacZ基因表达盒,同时在右侧同源臂下游插入一个1 7kb的KpnI片段,构建成一个新的转移载体pUni＿LacZ。用该载体与Bartha＿K61株基因组通过脂质体法共转染Vero细胞,经过10代蓝斑筛选纯化和PCR鉴定获得了一株稳定表达LacZ基因的伪狂犬病病毒gE/TK基因缺失突变株,命名为rPrV＿LacZ。在不同的细胞(PK＿15、IBRS＿2、Vero和CEF)上,对该重组病毒与亲本病毒的增殖滴度和细胞病变进行比较,未见显著差异。结果表明转移载体pBdTK＿Uni具有实用性,可用于构建伪狂犬病病毒基因工程活载体疫苗。

关键词：伪狂犬病病毒重组病毒转移载体 LacZ基因

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重组伪狂犬病病毒(rPRV-GP5)对绵羊的安全和效力试验

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中国预防兽医学报 2004年第4期26卷 287-289页

作者：田志军仇华吉孔令达李娜周艳君王云峰童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了验证表达猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)GP5蛋白的重组伪狂犬病病毒 (rPRV_GP5 )的安全性和免疫原性 ,将 10只 5～ 6月龄健康绵羊分成三组 ,安检组 (3只 )肌注 10 8 0 PFU/只、效检组 (4只 )肌注 10 6 0 PFU/只 ,3只作为不接种对... 详细信息

为了验证表达猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)GP5蛋白的重组伪狂犬病病毒 (rPRV_GP5 )的安全性和免疫原性 ,将 10只 5～ 6月龄健康绵羊分成三组 ,安检组 (3只 )肌注 10 8 0 PFU/只、效检组 (4只 )肌注 10 6 0 PFU/只 ,3只作为不接种对照组。接种后 14d ,效检组与对照组每只臀部肌注伪狂犬病病毒“双城系”猪源强毒S株 10 3 LD50 ,结果效检组全部保护 ,对照组全部死亡 ,安检组未见异常。结果表明。

关键词：重组伪狂犬病病毒安全试验效力试验

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镉致鸡脾淋巴细胞凋亡及对p53mRNA表达的影响

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中国环境科学 2004年第4期24卷 456-459页

作者：李金龙徐世文熊永忠李术王秀荣东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

应用吖啶橙/溴化乙锭荧光染色(AO/EB)法、DNA琼脂糖凝胶电泳及半定量RT-PCR法检测了氯化镉在浓度0～30μmol/L范围内对体外培养的鸡脾脏淋巴细胞凋亡及对p53mRNA表达的影响.结果表明,浓度为0～30μmol/L的镉能引起鸡脾脏淋巴细胞凋亡及... 详细信息

应用吖啶橙/溴化乙锭荧光染色(AO/EB)法、DNA琼脂糖凝胶电泳及半定量RT-PCR法检测了氯化镉在浓度0～30μmol/L范围内对体外培养的鸡脾脏淋巴细胞凋亡及对p53mRNA表达的影响.结果表明,浓度为0～30μmol/L的镉能引起鸡脾脏淋巴细胞凋亡及干扰p53mRNA的表达,低浓度镉引起的细胞凋亡与p53mRNA的表达密切相关,而高浓度的镉能够导致鸡脾脏淋巴细胞坏死.

关键词：镉鸡脾脏淋巴细胞凋亡坏死 p53mRNA

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表达H5亚型禽流感病毒HA基因的DNA疫苗免疫保护效力研究

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中国农业科学 2004年第7期37卷 1071-1075页

作者：姜永萍于康震邓国华田国斌乔传玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

表达高致病力禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1) [GD/1/96(H5N1)]HA基因的DNA疫苗质粒pCIHA5具有良好的免疫保护性,为了将其开发并应用于实际,对其免疫保护效力进行了进一步的研究。结果表明,用10、40、70、100和150g pCIHA... 详细信息

表达高致病力禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1) [GD/1/96(H5N1)]HA基因的DNA疫苗质粒pCIHA5具有良好的免疫保护性,为了将其开发并应用于实际,对其免疫保护效力进行了进一步的研究。结果表明,用10、40、70、100和150g pCIHA5和油苗1次免疫后,其免疫保护率分别为12.5%(1/8)、58.3%(7/12)、72.7%(8/11)、50.0%(6/12)、66.7%(8/12)和100%(12/12),其中70和100g剂量组的病毒分离结果为1/8和2/6;用剂量为5、20、35和50g pCIHA5分别免疫2次,免疫保护率分别为45.5%(5/11)、58.3%(7/12)、58.3%(7/12)和91.7%(11/12),5g的病毒分离结果为1/5,其余组未分离出病毒;pCIHA5免疫后AGP抗体均未检出,油苗免疫后其HI抗体虽高,但AGP抗体也呈阳性。结果显示,加强免疫应为DNA疫苗质粒pCIHA5的安全免疫方式,DNA疫苗质粒pCIHA5虽具有较为稳定的免疫原性和免疫保护性,但有必要进一步提高其在肌肉组织中的有效表达水平和抗体反应水平。

关键词：禽流感病毒血凝素基因 DNA疫苗免疫保护效力

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共表达禽流感病毒HA和NA基因的重组禽痘病毒在SPF鸡的免疫效力试验

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中国农业科学 2004年第4期37卷 605-608页

作者：乔传玲姜永萍于康震田国斌陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

将禽流感病毒A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)毒株的HA和NA2个基因同源重组到禽痘病毒基因组中,获得了能同时高效表达这2种蛋白的重组禽痘病毒(rFPV-HA-NA)。将rFPV-HA-NA经翅膀刺种途径接种8周龄SPF鸡,免疫后4周分别用10LD50的高致病力... 详细信息

将禽流感病毒A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)毒株的HA和NA2个基因同源重组到禽痘病毒基因组中,获得了能同时高效表达这2种蛋白的重组禽痘病毒(rFPV-HA-NA)。将rFPV-HA-NA经翅膀刺种途径接种8周龄SPF鸡,免疫后4周分别用10LD50的高致病力禽流感病毒(HPAIV)A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)和A/FPV/Rostock/34(H7N1)毒株进行攻击。结果重组禽痘病毒免疫鸡群诱导产生了高水平的抗体,能够完全抵抗H5N1和H7N1亚型病毒的致死性攻击;并可有效阻止病毒在泄殖腔的排出。而禽痘病毒免疫组和非免疫对照组在攻毒后全部发病并死亡。

关键词：禽流感病毒 HA NA 重组禽痘病毒免疫效力

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