检索结果-内蒙古大学图书馆

中国科协第五届青年学术年会

作者：智海东王云峰张晶童光志刘娣中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省农业科学院

鸡痘病毒(FPV)是痘病毒科的主要成员,可容纳至少25kb的外源基因,安全性好,是构建载体疫苗的理想载体。FPV是一种具备宿主特异性的病毒,不容易发生散毒现象,对人类及其他哺

关键词：重组禽痘病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

SARS冠状病毒S蛋白抗原表位的分析研究

SARS冠状病毒S蛋白抗原表位的分析研究

引用

中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：华荣虹周艳君王云峰华玉卓童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨)

SARS-CoV的纤突蛋白(Spike protein)是病毒粒子的一种主要结构蛋白.它在介导病毒粒子与宿主细胞受体的结合以及诱导中和抗体中起重要作用.在本实验中我们通过生物信息学分析并预测了6个纤突蛋白B细胞表位(S1 S2 S3 S4 S5 S6).利用6个预... 详细信息

SARS-CoV的纤突蛋白(Spike protein)是病毒粒子的一种主要结构蛋白.它在介导病毒粒子与宿主细胞受体的结合以及诱导中和抗体中起重要作用.在本实验中我们通过生物信息学分析并预测了6个纤突蛋白B细胞表位(S1 S2 S3 S4 S5 S6).利用6个预测的表位我们首先构建了一个多表位嵌合基因,多表位嵌合基因合成后插入原核表达质粒pGEX-6p-1的多克隆位点BamHI与XhoI之间,构建成GST融合表达质粒.重组质粒转化宿主菌BL21后经IPTG诱导后得到了高效表达.Western blot分析结果表明重组融合蛋白可与SARS病人康复血清反应.用重组融合蛋白为抗原制备了一系列单克隆抗体.将6个预测表位分别与GST融合表达.在这6个融合蛋白中GST-S5可以和单克隆抗体D3C5反应,GST-S2可以和单抗D3D1反应.Western blot分析表明两个单抗所识别的表位均为线性表位.两个表位分别位于SARS-CoV纤突蛋白的第447至458氨基酸残基和789至799氨基酸残基.D3D1表位(447-458)正位于S蛋白与受体结合的结构域中.该研究可以为进一步分析SARS-CoV纤突蛋白功能以及防治SARS的研究提供基础.

关键词：严重急性呼吸系统综合征纤突蛋白单克隆抗体冠状病毒抗原表位 SARS

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

马传染性贫血强/弱毒嵌合病毒的体外构建

马传染性贫血强/弱毒嵌合病毒的体外构建

引用

中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：涂亚斌王柳仇华吉温建新谷守林童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨)

马传染性贫血病毒(equine infectious anemia virus,EIAV)引起马传染性贫血(简称马传贫),导致马持续性感染和反复病毒血症.为了探讨LTR在EIAV病毒复制和转录过程中的作用,并进一步研究EIAV的致病和免疫机制,本文用EIAV强毒L株LTR置换了... 详细信息

马传染性贫血病毒(equine infectious anemia virus,EIAV)引起马传染性贫血(简称马传贫),导致马持续性感染和反复病毒血症.为了探讨LTR在EIAV病毒复制和转录过程中的作用,并进一步研究EIAV的致病和免疫机制,本文用EIAV强毒L株LTR置换了以前构建的EIAV DLA(弱毒)感染性分子克隆中的LTR,构建了马传贫强/弱毒嵌合分子克隆,并获得了具有感染性的强/弱毒嵌合病毒.

关键词：嵌合病毒体外构建马传染性贫血病毒分子克隆感染性致病性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒疫苗的遗传稳定性评价

表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒疫苗的遗传稳定性评价

引用

中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：王云峰智海东王玫仇华吉周艳君田志军张绍杰童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨)

为了检测表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-ILTVgB)的稳定性,我们对重组病毒第6代和16代进行克隆纯化,对纯化后的病毒通过转瓶连续培养传代20代.结果发现第6代纯化病毒(rFPV-ILTVgB-C6)在传代过程中有白斑出现... 详细信息

为了检测表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-ILTVgB)的稳定性,我们对重组病毒第6代和16代进行克隆纯化,对纯化后的病毒通过转瓶连续培养传代20代.结果发现第6代纯化病毒(rFPV-ILTVgB-C6)在传代过程中有白斑出现,说明病毒纯度不够;经过16代纯化的病毒(rFPV-ILTVgB-C16)对细胞的嗜性加强,病毒的效价进一步升高,20代传代后蓝斑率仍然为100﹪,PCR的检测进一步证明插入的外源基因能在病毒的长期传代过程中稳定地遗传.抽取病毒细胞传代过程中的5,10,15,20代次的病毒翅膀内侧无血管处皮下接种2周龄SPF鸡,20天后分为两组,分别用传染性喉气管炎病毒WG株和鸡痘病毒102株攻击,结果不同代次的重组病毒均可以使免疫鸡抗传染性喉气管炎病毒和鸡痘病毒强毒的攻击.鸡体内病毒传代试验表明,重组病毒在接种部位仅存在6天,之后就检测不到病毒,重组病毒通过SPF鸡连续传代,不存在病毒返祖的可能.由此可以得出一个结论,rFPV-ILTVg在结构上和免疫原性上是稳定的,无论是在体外传代,还是在体内均可以稳定遗传,不存在因为接种重组疫苗而给免疫鸡群带来安全威胁的可能,完全可以作为疫苗毒株进行商品化开发.

关键词：鸡痘重组鸡痘病毒遗传稳定性传染性喉气管炎病毒重组疫苗鸡传染性喉气管炎

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

抗禽流感病毒多表位DNA疫苗的构建及其免疫效力研究

抗禽流感病毒多表位DNA疫苗的构建及其免疫效力研究

引用

中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：彭金美童光志王云峰仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨)

多表位DNA疫苗是建立在常规DNA疫苗基础上的一种新型疫苗.它是用表位作免疫原,这样就比较容易在一个表达载体上克隆病原体的多个抗原基因中具有免疫活性的部分.本试验以H5N1亚型禽流感病毒的HA和NP基因及其表位为基础构建了4个重组质粒:... 详细信息

多表位DNA疫苗是建立在常规DNA疫苗基础上的一种新型疫苗.它是用表位作免疫原,这样就比较容易在一个表达载体上克隆病原体的多个抗原基因中具有免疫活性的部分.本试验以H5N1亚型禽流感病毒的HA和NP基因及其表位为基础构建了4个重组质粒:1、pIRES/HA(表达全长的HA基因);2、pIRES/tHA(只表达HA基因的主要抗原表位区);3、pIRES/tHA-NPep(融合表达HA基因的抗原表位区和NP基因的三个CTL表位);4、pIRES/tHA-NPep-IFN-γ(用鸡的IFN-γ基因取代质粒pIRES/tHA-NPep中的neo基因).分别用这四个重组质粒和空载体质粒pIRES1neo肌注免疫30日龄SPF鸡.免疫三次,间隔为两周,每次每只鸡的剂量为200μg.第三次免疫后两周以高致病性禽流感病毒H5N1强毒攻击,免疫及攻毒前后均采血检测HI抗体效价和外周血CD<'4+>、CD<'8+>T细胞的变化.结果,攻毒前各质粒免疫组均检测不到HI抗体,攻毒后一周存活鸡HI抗体效价迅速升高到64-256.流式细胞术检测外周血CD<'4+>、CD<'8+>T细胞在疫苗免疫后都有不同程度的升高.载体质粒对照组鸡(10只)在攻毒后3-8天内全部死亡,其他各质粒免疫组鸡都获得了部分保护,保护率分别是,pIRES/HA组为54.5﹪(6/11),pIREStHA组为30﹪(3/10),pIRESHA1NPep组为36.3﹪(4/11),pIRESHA1NPep-IFN-γ组为50﹪(5/10).这些结果表明我们构建的多表位DNA疫苗能够诱导机体产生特异性免疫应答,并在同型禽流感强毒攻击时对鸡只提供了一定的保护.

关键词： DNA疫苗禽流感病毒免疫效力抗原表位

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鸡γ-干扰素基因在昆虫细胞/杆状病毒载体系统中的表达

引用

农业生物技术学报 2004年第6期12卷 639-643页

作者：王海艳刘胜旺孔宪刚赵振华内蒙古农业大学动物科学与医学学院呼和浩特010018 内蒙古农业大学动物科学与医学学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

将鸡(Gallus gallus)的γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)基因亚克隆到杆状病毒转移载体pMelBacB的BamH I位点上,构建真核转移载体pMelBacB-ChIFN-γ,经限制性内切酶消化、ChIFN-γ特异引物PCR鉴定和序列测定,证明目的基因正确克隆到载... 详细信息

将鸡(Gallus gallus)的γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)基因亚克隆到杆状病毒转移载体pMelBacB的BamH I位点上,构建真核转移载体pMelBacB-ChIFN-γ,经限制性内切酶消化、ChIFN-γ特异引物PCR鉴定和序列测定,证明目的基因正确克隆到载体的预期位点。将纯化的pMeiBaeB-ChIFN-γ质粒与杆状病毒DNA(Bac-N-BlueDNA)共转染sf9昆虫细胞,经3轮蓝斑筛选纯化,获得了重组杆状病毒rBaculovirus-ChIFN-γ。提取病毒DNA经ChIFN-γ特异引物和重组杆状病毒特异引物PCR鉴定,证明获得了纯化的重组杆状病毒,命名为rBaculovirus-ChIFN-γ。用该重组病毒接种sf9昆虫细胞,收获接种后不同时间的细胞进行SDS-PAGE,结果表明ChIFN-γ基因在昆虫细胞中获得了表达,表达的重组蛋白分子量约为19 kD。应用在大肠杆菌(Escherichia coil)原核表达系统中表达的重组蛋白制备的兔抗ChIFN-γ多克隆抗体进行Western blot分析,表明表达的重组蛋白具有抗原性。

关键词：鸡IFN-γ 昆虫细胞/杆状病毒重组蛋白

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

H5N1亚型高致病性禽流感病毒A/goose/Guangdong/1/96株反向基因操作系统的建立

H5N1亚型高致病性禽流感病毒A/goose/Guangdong/1/96株反向基因操...

引用

中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：李泽君焦培荣于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点实验室和兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点实验室和兽医生物技术国家重点实验室农业部畜牧兽医总站中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点实验室和兽医生物技术国家重点实验室

A/goose/Guangdong/1/96(GSsGD/196)是我国分离的第一株H5N1亚型禽流感病毒,它不仅是97香港感染并致人死亡的H5N1亚型流感病毒HA基因供体株,而且是我国目前流行的H5亚型流感病毒的共同祖先。本研究建立了该病毒的8质粒反向基因操作系统... 详细信息

A/goose/Guangdong/1/96(GSsGD/196)是我国分离的第一株H5N1亚型禽流感病毒,它不仅是97香港感染并致人死亡的H5N1亚型流感病毒HA基因供体株,而且是我国目前流行的H5亚型流感病毒的共同祖先。本研究建立了该病毒的8质粒反向基因操作系统,并通过细胞转染成功拯救了该病毒(R-GSGD/1/96)。R-GSGD/1/96在对SPF鸡和Balb/c小鼠的致病性方面保持了与亲本野毒(W-GSGD/1/96)一致的生物学特性,即对鸡都是高致病性毒株,R-GSGD/1/96与W-GSGD/1/96的静脉致病指数分别为2.01和2.10;救获病毒与野生病毒一样,尽管106EID50经鼻腔感染小鼠后1-2天内能从肺脏检测到低滴度的病毒,但不能在小鼠体内成功复制。GSGD/1/96反向基因操作系统的成功建立为进一步开展我国高致病性禽流感病毒分离株的生物学特性、遗传衍化及结构与其功能关系研究奠定了基础。

关键词：禽流感病毒 H5N1 反向基因操作

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

用鸡体偏嗜性密码子对H5亚型禽流感病毒HA基因的优化与构建及其DNA疫苗体外表达研究

用鸡体偏嗜性密码子对H5亚型禽流感病毒HA基因的优化与构建及其DN...

引用

中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：姜永萍李呈军张洪波步志高张芳芳于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室农业部畜牧兽医总站中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室

不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒保护性免疫原HA蛋白氨基酸密码子使用频率存在着明显差异。为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD... 详细信息

不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒保护性免疫原HA蛋白氨基酸密码子使用频率存在着明显差异。为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD,1/96(H5N1)]的HA基因(optiHA),并将其插入CMV启动子表达载体pCI构建了H5亚型DNA疫苗质粒pCIoptiHA,将含有GD/1/96(H5N1)野生型HA基因的质粒pCIHA和pCIoptiHA分别转染293T细胞,间接免疫荧光检测转染后24-48小时293T细胞中瞬时表达的HA抗原蛋白;Western-blot证实上述2种表达质粒均可正确表达H5亚型HA抗原蛋白,结果表明密码子优化的基因optiHA体外瞬时表达水平显著高于野生型HA基因。这一结果为进一步开展SPF鸡免疫保护效果的比较研究奠定了基础。

关键词： HA基因密码子优化重叠延伸PCR 间接免疫荧光 Western blot检测

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鸡传染性法氏囊病超强毒Gx及其致弱株基因组B节段的克隆和序列分析

鸡传染性法氏囊病超强毒Gx及其致弱株基因组B节段的克隆和序列分析

引用

中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会

作者：包晓玮张厚双高宏雷付朝阳彭志伟单文鲁王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室(黑龙江哈尔滨)

在蛋白酶K法分离提取了鸡传染性法氏囊病病毒强毒株Gx及其致弱株Gt的病毒核酸dsRNA,应用随机引物将RNA反转录成cDNA,以此为模板用长距离一步法扩增出全长基因B节段,将其克隆入PMD18-T载体,用DNAStar软件进行序列分析.测序结果表明,克隆... 详细信息

在蛋白酶K法分离提取了鸡传染性法氏囊病病毒强毒株Gx及其致弱株Gt的病毒核酸dsRNA,应用随机引物将RNA反转录成cDNA,以此为模板用长距离一步法扩增出全长基因B节段,将其克隆入PMD18-T载体,用DNAStar软件进行序列分析.测序结果表明,克隆的Gx株B节段全长为2827bp,与超强毒参考株UK661的同源性为88.2﹪,与强毒参考株Harbin-1株的同源性达96.3﹪;克隆的Gt株B节段全长为2827bp,与弱毒参考株P2的同源性达99.5﹪.而Gx与Gt株B节段的核苷酸的同源性只有89.8﹪;vvIBDV-Gx、IBDV-Gt株B节段全长的获得将为进一步构建感染性分子克隆奠定必要的基础.

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒基因组B节段克隆序列分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鸡体偏嗜性密码子优化免疫原基因增强H5亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效果

鸡体偏嗜性密码子优化免疫原基因增强H5亚型禽流感DNA疫苗免疫保...

引用

中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：姜永萍张洪波李呈军步志高张芳芳于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室农业部畜牧兽医总站中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室

利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR法及限制酶切法构建了密码子优化的A/Goose/GuangDong/1,96(H5N1)[GD/1,96(H5N1)]的HA基因(optiHA),并将其插入CMV启动予表达栽体pCI构建了H5亚型DNA疫苗质粒pCIoptiHA。将pCIopfiHA和表达GD/1/96(H5N1)HA基因的DNA疫苗质粒pCIHA通过间接免疫荧光法和Western-blot分析检测转染293T细胞后瞬时表达的HA抗原蛋白;随之将pCIoptiHA及pCIHA分别以100μg和10μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,4周后用100LD50的HPAIV GD/1/96(H5N1)鼻腔途径进行攻击。结果,间接免疫荧光法和Western-blot分析表明密码子优化的HA基因表达水平显著高于野生型HA基因;免疫SPF鸡后,100μg pCIoptiHA可形成75%的免疫保护,100μg pCIHA可形成50%的免疫保护;10μg pCIoptiHA可形成对免疫鸡75%的部分免疫保护,而10μg pCIHA则基本不能形成免疫保护;pCIoptiHA诱导的m抗体水平远远高于pCIHA。试验结果表明,HA基因密码子的优化可显著提高HA基因体外表达水平和H5亚型禽流感DNA疫苗诱导的保护性抗体免疫反应水平,增强免疫保护效果。

关键词：禽流感 H5亚型 DNA疫苗免疫保护

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：