检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业科学 2003年第4期36卷 443-447页

作者：王笑梅王牟平高宏雷付朝阳曾祥伟张守发东北农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室吉林133400 哈尔滨150030 延边大学农学院哈尔滨150001

应用Pichia酵母表达系统高效表达了传染性法氏囊病毒 (IBDV)VP2 基因片段。首先用OLIGO设计 1对引物P5、P6 ,以插入IBDVVP2 基因的 pUC19为模板 ,扩增出带有终止密码子的 1.5kb片段 ,将此片段正向亚克隆到 pPICZA表达载体上 ,将构建好... 详细信息

应用Pichia酵母表达系统高效表达了传染性法氏囊病毒 (IBDV)VP2 基因片段。首先用OLIGO设计 1对引物P5、P6 ,以插入IBDVVP2 基因的 pUC19为模板 ,扩增出带有终止密码子的 1.5kb片段 ,将此片段正向亚克隆到 pPICZA表达载体上 ,将构建好的载体pPICVP2 用SacI内切酶线性化后 ,转染酵母PichiapastorisGS115细胞 ,经PCR鉴定 ,筛选出 5 0多个重组子。分别用甲醇诱导后 ,经SDS PAGE凝胶电泳、琼脂扩散试验、Dot ELISA检测 ,得到 9个不同程度表达 4 1kuVP2 活性蛋白的阳性重组子。经凝胶薄层扫描仪分析 ,表达蛋白占酵母细胞总蛋白的最高比率为 16 % ,表达量为 0 .6 2 0 8g·L-1。表达产物免疫SPF鸡可诱导产生特异性抗体 ,并能保护鸡抵抗超强毒致死性攻击 ,具有良好的免疫原性。

关键词：传染性法氏囊病病毒 VP2 酵母表达免疫原性

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日本脑炎病毒NS1基因在大肠杆菌中的高效表达

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兽医大学学报 2003年第3期23卷 255-257页

作者：金吉东仇华吉田志军周艳君张守发童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 延边大学农学院动物医学系吉林龙井133400

提取日本脑炎病毒弱毒株 SA1 4 - 1 4 - 2的基因组 RNA,用 RT- PCR扩增其 NS1基因 c DNA,将其克隆到原核表达载体 p ET- 30 b(+)中 ,转化大肠杆菌 BL - 2 1 (DE3) ,经 IPTG诱导 ,NS1基因获得高效表达。 SDS- PAGE分析显示 ,表达的融合... 详细信息

提取日本脑炎病毒弱毒株 SA1 4 - 1 4 - 2的基因组 RNA,用 RT- PCR扩增其 NS1基因 c DNA,将其克隆到原核表达载体 p ET- 30 b(+)中 ,转化大肠杆菌 BL - 2 1 (DE3) ,经 IPTG诱导 ,NS1基因获得高效表达。 SDS- PAGE分析显示 ,表达的融合蛋白表观相对分子质量约为 4 6 0 0 0 ,重组 NS1蛋白占菌体总蛋白的 30 .8%。 Western blotting分析表明。

关键词：日本脑炎病毒 NSl基因大肠杆菌表达乙型脑炎

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伪狂犬病病毒通用转移载体的构建及应用

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中国预防兽医学报 2003年第1期25卷 16-20页

作者：钱平李祥敏陈焕春肖少波仇华吉童光志华中农业大学畜牧兽医学院动物病毒室湖北武汉430070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

将来自质粒pFSV40的 3 0 0bpBamHI/PstI片段〔其中含有SV40poly(A)和部分多克隆位点〕插入到质粒pUSK相应的酶切位点中 ,获得重组质粒pUSKSV40 ,该重组质粒中gG基因 5’端编码区缺失了 42 8bp。将来自质粒pcDNA3 .1( +)的 946bpBglIIEc... 详细信息

将来自质粒pFSV40的 3 0 0bpBamHI/PstI片段〔其中含有SV40poly(A)和部分多克隆位点〕插入到质粒pUSK相应的酶切位点中 ,获得重组质粒pUSKSV40 ,该重组质粒中gG基因 5’端编码区缺失了 42 8bp。将来自质粒pcDNA3 .1( +)的 946bpBglIIEcoRI片段 (其中含CMV启动子及部分多克隆位点 )插入到质粒pUSKSV40的BamHIEcoRI位点 ,构建了通用载体pPRVCMV_uni,其中含有CMV启动子、SV40poly(A)以及NheI、Pmel、BamHI、BstXI、EcoRI、StuI、XbaI等 7个单一克隆位点。将eGFP基因插入到该通用载体的BamHI和EcoRI之间 ,用所获得的转移载体与TK_/gG_/LacZ+ PRV基因组共转染PK_1 5细胞 ,经检测eGFP基因在重组伪狂犬病病毒中获得表达 ,从而证实该通用载体的构建是可行的。本研究研制以伪狂犬病病毒为载体的二价或多价基因工程疫苗奠定了物质基础。

关键词：伪狂犬病伪狂犬病病毒通用转移载体重组伪狂犬病病毒基因工程疫苗

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鸡IL-15基因的克隆与序列分析

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中国预防兽医学报 2003年第2期25卷 107-111页

作者：独军政刘胜旺孔宪刚陈怀涛夏春甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 中国农业大学动物医学院

参照已发表的鸡IL_15cDNA序列 ,设计合成引物 ,应用反转录_聚合酶链反应 (ReverseTranscription_PolymeraseChainReaction ,RT_PCR)技术从有丝分裂原ConA活化 4 8小时的白来航鸡脾淋巴细胞中克隆到了鸡IL_15cDNA ,并对单独的三个阳性克... 详细信息

参照已发表的鸡IL_15cDNA序列 ,设计合成引物 ,应用反转录_聚合酶链反应 (ReverseTranscription_PolymeraseChainReaction ,RT_PCR)技术从有丝分裂原ConA活化 4 8小时的白来航鸡脾淋巴细胞中克隆到了鸡IL_15cDNA ,并对单独的三个阳性克隆分别进行了核苷酸序列测定 ,核苷酸与推导的氨基酸序列分析显示 ,本研究所用白来航鸡IL_15cDNA5’非编码区有两个框外ATG起始密码子 ,开放阅读框由 5 6 1bp组成 ,编码 187个氨基酸 ,其中N端信号肽含有 6 6个氨基酸 ,在第 4 8、14 9和 16 6位的天冬酰胺残基上有三个潜在的N糖基化位点。成熟的鸡IL_15含有 4个高度保守的半胱氨酸(Cysteine)残基 ,可形成两个链内二硫键。与已发表的鸡IL_15基因序列相比 ,该序列编码区第 36 5、397、4 0 7、4 5 7、4 74、5 5 6、5 5 7位的核苷酸发生了变化 ,分别由A、C、G、G、A、A、T依次变成了G、T、T、T、G、A、T ,推导的氨基酸序列在第 12 2、133、136、15 3和 186位发生了改变 ,分别由原来的天冬氨酸、精氨酸、色氨酸、丙氨酸、丙氨酸依次变成了甘氨酸、色氨酸、亮氨酸、丝氨酸和异亮氨酸 ,其中第 4 74位碱基的变化是同义突变。

关键词：鸡白细胞介素15 基因克隆序列

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编码鸡IL-18成熟蛋白基因的分子克隆与序列测定

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中国预防兽医学报 2003年第2期25卷 114-117页

作者：潘蔚绮刘胜旺孔宪刚李广兴夏春东北农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 中国农业大学动物医学院

白细胞介素 18(IL_18)是一种能诱导IFN_γ产生的新型细胞因子 ,在调节Th1型细胞免疫应答中起重要作用。本研究根据已发表的鸡白介素 18(IL_18)cDNA基因序列设计引物 ,用反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)技术从有丝分裂原ConA刺激 4 8小时... 详细信息

白细胞介素 18(IL_18)是一种能诱导IFN_γ产生的新型细胞因子 ,在调节Th1型细胞免疫应答中起重要作用。本研究根据已发表的鸡白介素 18(IL_18)cDNA基因序列设计引物 ,用反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)技术从有丝分裂原ConA刺激 4 8小时活化的白来航鸡脾细胞中扩增出编码鸡IL_18成熟蛋白质的基因 ,并进行序列测定 ,并与结果进行了比较 ,发现本研究克隆到的鸡IL_18成熟蛋白编码基因序列在 4 82位为C ,而Schnieder等报道的序列为T ,这一核苷酸序列的变化导致了推导的对应氨基酸残基由苯丙氨酸变为丝氨酸。该处碱基变化的原因究竟是鸡IL_18本身存在多态性 ,还是反转录或PCR过程中的碱基错配所致 ,该处碱基的变化对于鸡IL_18蛋白的表达及其生物活性究竟有无影响等问题正在研究中。该基因为国内首次报道经序列测定证实的鸡IL_18基因。

关键词：鸡IL-18成熟蛋白基因克隆序列测定白细胞介素8

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抗传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗

抗传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会

作者：王云峰智海东王玫仇华吉周艳君田志军童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

1925年传染性喉气管炎(Infectious Laryngotracheitis,ILT)首次发生于美国洛岛,是鸡的一种病毒性呼吸道传染病,该病可引起鸡死亡和产蛋下降,目前在多数国家仍有流行,对养禽业造成了严重的危害。疫苗接种是防制本病的一条切实可行的措施... 详细信息

1925年传染性喉气管炎(Infectious Laryngotracheitis,ILT)首次发生于美国洛岛,是鸡的一种病毒性呼吸道传染病,该病可引起鸡死亡和产蛋下降,目前在多数国家仍有流行,对养禽业造成了严重的危害。疫苗接种是防制本病的一条切实可行的措施。目前,国内外用于预防ILT的都是中强毒力的活疫苗,这些疫苗毒力普遍偏强,接种后反应大。这些疫苗与强毒株一样也能导致持续感染,在鸡体间

关键词：重组鸡痘病毒鸡痘疫苗减毒活疫苗重组病毒家畜传染病学中国畜牧兽医学会传染性喉气管炎

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传染性喉气管炎病毒糖蛋白gC主要免疫原性片段在原核系统中的表达

传染性喉气管炎病毒糖蛋白gC主要免疫原性片段在原核系统中的表达

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会

作者：智海东郑玉姝王云峰王玫仇华吉赵玉军童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

鸡传染性喉气管炎(Infectious Laryngotrcheitis,ILT)是鸡的一种急性上呼吸道传染病。本病以呼吸困难,喘气,咳出带血分泌物,喉部和气管粘膜肿胀,出血,并形成糜烂为特征,该病发病快,死亡率高,可导致产蛋率下降。自1924年美国发生该病以来... 详细信息

鸡传染性喉气管炎(Infectious Laryngotrcheitis,ILT)是鸡的一种急性上呼吸道传染病。本病以呼吸困难,喘气,咳出带血分泌物,喉部和气管粘膜肿胀,出血,并形成糜烂为特征,该病发病快,死亡率高,可导致产蛋率下降。自1924年美国发生该病以来,现已遍布世界的养禽国家和地区。引起该病的病原为鸡传染性喉气管炎病毒(Infectious Laryngotrcheitis Virus,ILTV),属于α-疱疹病毒

关键词：传染性喉气管炎病毒免疫原性原核系统糖蛋白

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猪流感病毒核蛋白基因的原核表达及其在诊断中的初步应用

猪流感病毒核蛋白基因的原核表达及其在诊断中的初步应用

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2003北京国际养猪研讨会暨展览会

作者：倪建强张春玲李海燕仇华吉王云峰田志军童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

根据GeneBank中A/Swine/Hong Kong/126/82(H3N2)株猪流感病毒(SIV)NP基因核苷酸序列设计合成一对引物,经RT-PCR扩增了我国SIV分离株A/Swine/Heilongjiang/3/2OOO(H3N2)的核蛋白(NP)基因。将扩增所得NP基因克隆于pMD18-T载体,酶切鉴定后对其序列分析表明NP基因与香港分离株同源性高达93.8%,然后定向亚克隆NP基因于原核表达载体pET30(a)的多克隆位点中,经酶切鉴定后,将含有NP基因的重组质粒命名为pET-NP。用pET-NP转化受体菌BL21,用诱导剂IPTG以不同浓度进行诱导,并在不同诱导时间收集样品。经SDS-PAGE电泳分析证实NP基因获得了表达,并在终浓度为1mM的IPTG诱导下,6 小时其表达量达到高峰,经Western-blot分析证实表达的重组核蛋白具有反应活性,大小约为60ku。用表达产物作琼脂扩散试验,结果表明表达产物与SIV抗血清可形成清晰的反应沉淀线,而与其它8种猪病原阳性血清不发生反应。正常菌体蛋白与SIV阳性血清也不发生反应。通过对40份送检血清样品的检测结果显示其与HI试验的相符率高达95%以上。试验证明利用原核表达系统制备的重组核蛋白作为诊断用抗原,不仅制备过程简单而且所建立的琼扩诊断方法特异、快速、简便,其灵敏度也能满足现地的使用要求。

关键词： SIV 核蛋白琼脂扩散试验

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鸡白细胞介素-18基因的原核表达及多克隆抗血清的制备

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中国兽医学报 2003年第5期23卷 427-430页

作者：刘胜旺潘蔚绮孔宪刚李广兴夏春中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业大学动物医学院北京100094

将编码鸡白细胞介素 - 18(interleukin- 18,IL- 18)成熟蛋白的基因亚克隆至原核表达载体 p PROEXTMHT中 ,构建重组质粒并进行确证性序列测定。然后将重组质粒转化大肠杆菌 DH5α并用 IPTG于 37℃诱导培养。表达的融合蛋白主要以包涵体... 详细信息

将编码鸡白细胞介素 - 18(interleukin- 18,IL- 18)成熟蛋白的基因亚克隆至原核表达载体 p PROEXTMHT中 ,构建重组质粒并进行确证性序列测定。然后将重组质粒转化大肠杆菌 DH5α并用 IPTG于 37℃诱导培养。表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在 ,目的蛋白表达量占菌体蛋白的 30 %。 SDS- PAGE和 Western blot分析显示 ,表达的鸡 IL-18融合蛋白相对分子质量约为 2 30 0 0。包涵体被 6 mol/ L 盐酸胍裂解后 ,通过镍离子亲和树脂进行了纯化。用所获得的重组鸡 IL- 18融合蛋白及其纯化产物经 3次肌肉注射豚鼠 ,制备豚鼠抗鸡 IL- 18多克隆抗血清 ,并用琼脂扩散试验多克隆抗血清进行了证明。本试验成功的原核表达、纯化了鸡 IL- 18融合蛋白 ,并制备了抗鸡 IL- 18多克隆抗血清 ,为下一阶段关于鸡 IL -

关键词：鸡白细胞介素-18基因原核表达多克隆抗血清重组蛋白制备细胞因子

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表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的重组伪狂犬病毒构建及其生物学特性分析

表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的重组伪狂犬病毒构建及其生...

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)主要表现为妊娠母猪发生早产、流产、产死胎、弱仔和木乃伊胎,仔猪和育肥猪发生呼吸道疾病,该病传播速度极快,给我国养猪业造成了巨大的经济损失。疫苗免疫是... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)主要表现为妊娠母猪发生早产、流产、产死胎、弱仔和木乃伊胎,仔猪和育肥猪发生呼吸道疾病,该病传播速度极快,给我国养猪业造成了巨大的经济损失。疫苗免疫是控制该病发生的一个有效办法,但目前现有疫苗

关键词：重组伪狂犬病毒 PRRSV 猪繁殖与呼吸综合征病毒重组病毒 GP5 生物学特性

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