检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2000年第6期22卷 415-417页

作者：曹殿军刘培欣闫丽辉孙建宏中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

本研究通过对大量不同毒力NDVF基因核苷酸序列分析 ,根据毒力和序列间的相关规律 ,分别设计合成了两组引物 ,建立了一个可以迅速鉴别NDV强、弱毒株的RT_PCR方法 ,对强毒株可扩增出 133bp的特异性片段和 36 2bp的通用片段 ,弱毒株可以扩... 详细信息

本研究通过对大量不同毒力NDVF基因核苷酸序列分析 ,根据毒力和序列间的相关规律 ,分别设计合成了两组引物 ,建立了一个可以迅速鉴别NDV强、弱毒株的RT_PCR方法 ,对强毒株可扩增出 133bp的特异性片段和 36 2bp的通用片段 ,弱毒株可以扩增出 2 5 2bp的特异性片段和 36 2bp的通用片段。只需一个RT_PCR反应 ,整个实验过程可在 5小时内完成。敏感性测定结果表明该方法的最低检出量不低于 5 0 0pg的NDVRNA。为了增加方法的实用性。

关键词：新城疫病毒融合蛋白基因 RT-PCR

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猪繁殖与呼吸综合征重组核衣壳蛋白(N)-ELISA诊断方法的建立与应用

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 127-130页

作者：王云峰周艳君仇华吉钱平蔡雪晖柴文君童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

将猪繁殖与呼吸综合征病毒国内分离株ＣＨ－ｌａ的核衣壳蛋白基因定向克隆到ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓＢ转移载体ＰＨ启动子下游，与苜蓿银蚊夜蛾多核型多角体病毒线性化ＤＮＡ共转染Ｓｆ９细胞。获得能隐定表达核衣壳蛋白（Ｎ蛋白）的... 详细信息

将猪繁殖与呼吸综合征病毒国内分离株ＣＨ－ｌａ的核衣壳蛋白基因定向克隆到ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓＢ转移载体ＰＨ启动子下游，与苜蓿银蚊夜蛾多核型多角体病毒线性化ＤＮＡ共转染Ｓｆ９细胞。获得能隐定表达核衣壳蛋白（Ｎ蛋白）的重组杆状病毒。利用昆虫杆状病毒表达系统表达的猪繁殖与呼吸综合征病毒重组Ｎ蛋白作为抗原，包被聚苯乙烯微量反应板，建立了猪繁殖与呼吸综合征重组Ｎ蛋白－ＥＬＩＳＡ诊断方法。试验证明，该方法对其他８种猪疫病阳性血清均无交叉反应，对标准阳性样品的检出率为１００％，具有敏感性高、特异性强的特点。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征 ELISA 重组N蛋白

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一株内源性猪细小病毒的分离与鉴定

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 90-93页

作者：李昌文仇华吉童光志田志军王玉春韩孝成刘红全董齐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

本研究从不明病毒污染的ＰＫ１５细胞培养物中分离到了一株猪细小病毒，从形态学、血清学、分子生物学几个方面对其进行了鉴定，同时克隆了该毒株ＶＰ２基因，并测定了其核苷酸序列。将该毒株命名为ＳＹ－９９株。

关键词：猪细小病毒内源性病毒 PK15细胞系 VP2基因

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应用反转录聚合酶链式反应检测鸡Th1样淋巴因子mRNA表达的研究

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中国预防兽医学报 2000年第1期22卷 48-51页

作者：刘胜旺孔宪刚陈洪岩张宝山刘永刚童光志卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

应用反转录聚合酶链式反应(RT_PCR) 和限制性酶切分析技术对鸡脾细胞体外受到有丝分裂原ConA刺激的情况下,其Th1 样淋巴因子mRNA的表达水平进行了研究。实验结果表明,ConA诱导培养3 小时的鸡脾细胞表达α_干扰素(ChIFN_α) 、γ_干扰素(... 详细信息

应用反转录聚合酶链式反应(RT_PCR) 和限制性酶切分析技术对鸡脾细胞体外受到有丝分裂原ConA刺激的情况下,其Th1 样淋巴因子mRNA的表达水平进行了研究。实验结果表明,ConA诱导培养3 小时的鸡脾细胞表达α_干扰素(ChIFN_α) 、γ_干扰素(ChIFN_γ)和白细胞介素_2(ChIL_2) 等鸡的Th1 样淋巴因子mRNA。未诱导但培养了3 小时的鸡脾细胞可表达ChIFN_α和ChIFN_γmRNA,而未检测到ChIL_2m RNA的表达。正常SPF鸡的脾细胞可表达ChIFN_αmRNA。本研究应用不同公司生产的反转录酶和Taq 多聚酶,取得了相同的结果。表明该方法具有很好的重复性,而且该法敏感而方便。

关键词：限制性酶切分析鸡 Th1样淋巴因子 mRNA RT-PCR

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鸡传染性喉气管炎病毒DNA疫苗免疫效果观察

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中国预防兽医学报 2000年第3期22卷 179-181页

作者：孟松树张绍杰童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

将分别构建的含有鸡传染性喉气管炎病毒王岗株gB、gC和gD基因的重组真核表达质粒及空载体质粒分组肌肉注射雏鸡 ,攻毒后观察免疫保护效果。结果表明 ,重组质粒诱导了免疫应答 ,免疫保护率为 79% 。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒 DNA疫苗免疫应管

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猪传染性胃肠炎华毒弱毒株纤突蛋白B、C抗原位点片段基因的克隆与序列分析

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中国预防兽医学报 2000年第5期22卷 361-365页

作者：冯力佟有恩李伟杰朱远茂马思奇王明陈洪岩陈奖励中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨150001 兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

猪传染性胃肠炎华毒 (TGEVH)是我国分离的代表毒株 ,H弱毒株是我国自行培育成功的具有良好免疫原性的疫苗株。应用RT_PCR方法扩增出 1.3kb的目的片段 ,包括S基因的编码的B、C两个主要抗原位点的片段 ,目的片段与pUC19质粒载体进行连接 ... 详细信息

猪传染性胃肠炎华毒 (TGEVH)是我国分离的代表毒株 ,H弱毒株是我国自行培育成功的具有良好免疫原性的疫苗株。应用RT_PCR方法扩增出 1.3kb的目的片段 ,包括S基因的编码的B、C两个主要抗原位点的片段 ,目的片段与pUC19质粒载体进行连接 ,转化 ,鉴定后得到阳性重组质粒 ,命名为pTS1,将重组质粒插入的目的基因片段进行序列分析和比较 ,其结果表明TGEVH株S基因 5′端B、C位点片段 1190bp的核苷酸序列与国外的TGEV毒株Miller、Purdue_115、FS772 / 70及台湾省TFI毒株序列均具有很高的同源性 ,达 94.72 %以上。推导的氨基酸序列同源性为 94.70 %以上。编码抗原位点C的序列与其它毒株完全一致 ,但在B位点发生改变 ,即第 97个氨基酸发生改变 ,由Trp突变为Ser。该核苷酸该片段全长 12 6 1bp ,包括起始密码子ATG及基因间的共同序列ACTAAAC。本研究首次报道了国内的TGEV分离株_H弱毒株S基因的RT_PCR扩增及其编码的B、C抗原位点片段的分子克隆及序列分析 ,为进一步揭示TGEV强弱毒差别的分子机制。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 S基因分子克隆序列分析

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牛布氏杆菌抗独特型抗体F9小鼠免疫实验

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 8-11页

作者：金红李媛于康震宋晓华何倩妮谷登峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 新疆畜牧科学院兽医研究所乌鲁木齐830000

本研究以牛布氏杆菌抗独特型抗体Ｆ９为免疫原免疫小鼠，对小鼠体液免疫与细胞免疫的变化以及攻毒后Ｆ９对小鼠的保护情况进行了研究。阻断ＥＬＩＳＡ试验证明所制备的Ｆ９具有与布氏杆菌Ｓ_(85)Ａ抗原某一决定簇相似结构的“内影像”... 详细信息

本研究以牛布氏杆菌抗独特型抗体Ｆ９为免疫原免疫小鼠，对小鼠体液免疫与细胞免疫的变化以及攻毒后Ｆ９对小鼠的保护情况进行了研究。阻断ＥＬＩＳＡ试验证明所制备的Ｆ９具有与布氏杆菌Ｓ_(85)Ａ抗原某一决定簇相似结构的“内影像”。以Ｆ９为疫苗免疫小鼠的血清凝集试验及ＴＡＮＡＥ^+细胞检测结果均证明：Ｆ９能够诱导小鼠产生布氏杆菌凝集抗体并能使小鼠外周血淋巴细胞产生对布氏杆菌Ｓ_(85)Ａ抗原的敏感性应答，但Ｆ９组不如布氏杆菌Ｓ１９号疫苗组明显。说明Ｆ９能够刺激机体产生体液反应并能非特异性地增强细胞免疫。但攻毒试验结果又证明，Ｆ９组虽然出菌检出率在绝对数值上略小于健康对照组，但差异不显著，几乎不能对小鼠提供有效保护。

关键词：布氏杆菌抗独特型抗体疫苗

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禽流感病毒重组核蛋白在琼扩诊断中的应用

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 25-27页

作者：邓国华邓国华唐秀英田国彬于康震于康震中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心哈尔滨150001

利用杆状病毒表达禽流感病毒型特异性抗原－核蛋白，并就重组核蛋白作为禽流感琼扩诊断抗原地特异性和敏感性及作为抗原的其它特性进行了研究，并与普通全病毒琼扩抗原进行了应用比较试验，对３５４份现地可疑血清样品进行了检测，结果... 详细信息

利用杆状病毒表达禽流感病毒型特异性抗原－核蛋白，并就重组核蛋白作为禽流感琼扩诊断抗原地特异性和敏感性及作为抗原的其它特性进行了研究，并与普通全病毒琼扩抗原进行了应用比较试验，对３５４份现地可疑血清样品进行了检测，结果表明：该抗原可以特异性地定性检测出所有１５个禽流感病毒亚型的抗血清，与普通全病毒琼扩抗原的检测结果一致，但沉淀线更细密、清晰，保存方便；与我国广泛流行的１５种禽类其它病原体的抗血清没有任何交叉反应，表明该重组核蛋白作为禽流感琼扩抗原特异、敏感、生物安全性更可靠和生产成本更低廉，有利于进一步扩大禽流感疫情调查范围和加大监测力度。

关键词：重组核蛋白琼扩抗原检测

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禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)全基因克隆及序列分析

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中国预防兽医学报 2000年第3期22卷 232-235页

作者：张建林于康震陈化兰唐秀英田国斌中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心哈尔滨150001

本研究用无特定病原体 (SPF)鸡胚增殖禽流感病毒鹅体分离株A/Goose/Guangdong/1/96 (H5N1) (GD1/96 ) ,提取病毒基因组总RNA ,运用反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)技术分别扩增该病毒分离株的 8个基因片段的cDNA ,分别克隆后进行序列测定... 详细信息

本研究用无特定病原体 (SPF)鸡胚增殖禽流感病毒鹅体分离株A/Goose/Guangdong/1/96 (H5N1) (GD1/96 ) ,提取病毒基因组总RNA ,运用反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)技术分别扩增该病毒分离株的 8个基因片段的cDNA ,分别克隆后进行序列测定。序列分析结果表明 ,所扩增到的 8个片段均包含相应的病毒基因的完整开放阅读框架。GD1/96株与 1997年香港禽流感事件中的 4株香港流感病毒分离株 (分别来自人、鸡、鸭和鹅 )的HA基因的高度同源性说明它们可能起源于同一种系 ,但NS基因的差异说明它们分属于不同的基因群系。GD1/96株与香港流感病毒分离株的核苷酸和推导的氨基酸序列的同源性较低 ( 6 3.9%～ 98.1%) ,而香港流感病毒分离株之间的核苷酸和氨基酸序列的同源性很高 ( 96 .5 %～ 10 0 %) ,且香港各流感病毒分离株的NA均缺失 5 7个核苷酸 ( 19个氨基酸 )残基。因此 ,内地H5N1分离株GD1/96与

关键词：禽流感病毒分离株全基因克隆序列分析

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新城疫病毒F48E9株及东北地区流行株F基因遗传变异分析

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中国兽医学报 2000年第2期20卷 117-120页

作者：曹殿军苑纯秀郭鑫闵平孔宪刚卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

采用异硫氰酸胍 /酚 /氯仿抽提一步法 ,提取新城疫病毒 ( NDV) F4 8E9株及 2个东北地区分离株 DB3、DB5基因组 RNA,并以其为模板经反转录合成 F基因 c DNA第 1链 ,再利用 PCR技术分段扩增出 F基因的c DNA。F4 8E9、DB3和 DB5株 F基因的 ... 详细信息

采用异硫氰酸胍 /酚 /氯仿抽提一步法 ,提取新城疫病毒 ( NDV) F4 8E9株及 2个东北地区分离株 DB3、DB5基因组 RNA,并以其为模板经反转录合成 F基因 c DNA第 1链 ,再利用 PCR技术分段扩增出 F基因的c DNA。F4 8E9、DB3和 DB5株 F基因的 c DNA经酶切修饰后 ,插入 p UC1 9的多克隆位点中 ,转化感受态 *** DH5α。经相对分子质量比较、酶切分析及 PCR等鉴定方法筛选出 F4 8E9、DB3和 DB5株 F基因的阳性克隆。然后采用 Sanger′s双脱氧末端终止法对阳性重组子进行核苷酸序列测定 ,证实分别获得了 F4 8E9、DB3和 DB5株 F基因的全长 c DNA。利用 DNASIS及 MEGA分析软件 ,将上述 3个毒株的 F基因序列与基他 1 1株有代表性的 NDV的相应序列进行比较分析 ,并绘制了 1 4株 NDV F基因的系统发育进化树。结果表明 ,F4 8E9和 DB3株在核苷酸序列上相对独立于 Toyoda等所分的 A、B、C组 ,单独成为一组 ;DB5株与B1 Hitchner株同属 B组 ,说明它们具有较高的同源性。同时也证明我国有不同基因型的毒株在流行。从进化的角度来看 ,NDV各毒株间确实存在遗传变异 ,但

关键词： NDV F基因克隆序列分析系统发育进化树

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