检索结果-内蒙古大学图书馆

中国免疫学杂志 1998年第1期14卷 57-60页

作者：江国托刘思国步志高祁贤康丽娟卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室南京农业大学动物医学系东北农业大学生物工程系

从我国华中、华东、华南、华北、东北及西北等地分离鸡传染性支气管炎病毒流行株，经病毒的病原性、形态结构、理化特性、病毒抗原的特异性检测、组织嗜性、结构多肽及血清型分析等多方面的鉴定，对来源于我国不同地区的流行毒株免疫原... 详细信息

从我国华中、华东、华南、华北、东北及西北等地分离鸡传染性支气管炎病毒流行株，经病毒的病原性、形态结构、理化特性、病毒抗原的特异性检测、组织嗜性、结构多肽及血清型分析等多方面的鉴定，对来源于我国不同地区的流行毒株免疫原Ｓ１基因进行了分子克隆及基因分型；ＲＴ－ＰＣＲ扩增病毒Ｓ１基因，将Ｓ１基因５′和３′端分别进行分子修饰之后插入克隆载体ｐＵＣ１８的ＢａｍＨⅠ／ＨｉｎｄⅢ位点，在Ｅｃｏｌｉ中实现了目的基因的克隆；利用英国病毒株Ｓ１全基因核酸探针与流行株Ｓ１基因的重组克隆质粒分子杂交及目的基因５′端高变区核苷酸序列分析鉴定后，采用ＨａｅⅢ、ＰＶＵⅡ和ＸｂａⅠ等限制性核酸内切酶酶切分析不同流行株Ｓ１基因ｃＤＮＡ。结果表明，我国流行的鸡传染性支气管炎病毒分为６个主要的基因型；试验发现除与Ｍ４１和澳大利亚Ｔ株相近基因型毒株之外，我国流行的毒株存在明显的分子水平的变异，这与病毒血清型鉴定的结果一致，鸡传染性支气管炎病毒中国流行毒株免疫原基因Ｓ１的分子克隆及基因分型为该病毒分子流行病学及病毒遗传变异的主要分子基础的深入研究奠定了基础。

关键词：鸡病传染性支气管炎分子克隆基因分 IB病毒

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HVT非必需基因区鉴定及含MDVgB基因重组病毒的构建

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自然科学进展（国家重点实验室通讯） 1998年第6期8卷 755-758页

作者：赵晓岩刘长军李曦田志军原野徐宜为中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

以火鸡疱疹病毒(HVT)约8.0kb的BamHⅠDNA克隆片段中的B9mHⅠHindⅢ亚克隆片段为同源序列,将大肠杆菌β-半乳糖苷酶(LacZ)基因作为报告基因,通过同源重组,获得了表达LacZ基因产物的重组HVT(LacZ-rHVT)。经体内、体外传代表明重组病毒中的... 详细信息

以火鸡疱疹病毒(HVT)约8.0kb的BamHⅠDNA克隆片段中的B9mHⅠHindⅢ亚克隆片段为同源序列,将大肠杆菌β-半乳糖苷酶(LacZ)基因作为报告基因,通过同源重组,获得了表达LacZ基因产物的重组HVT(LacZ-rHVT)。经体内、体外传代表明重组病毒中的LacZ基因表达稳定;同时证明该亚克隆片段属于HVT复制的非必需基因。在此基础上,将Ⅰ型马立克氏病毒(MDV)糖蛋白B(gB)基因插入该亚克隆片段中,构建了含gB基因的HVT转移载体质粒(pHMDVgB)。将pHMDVgB与LacZ-rHVT DNA重组,通过病毒蚀斑的颜色筛选,获得了含MDVgB基因的重组HVT(MDVgB-rHVT)。采用PCR扩增及Dot blot杂交检测证实MDV的gB基因已插入到HVT基因组中。

关键词： MDVgB基因火鸡疱疹病毒重组病毒疫苗 HVT

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一种快速鉴定重组转化子的方法

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生物技术 1998年第6期8卷 41-44,5页

作者：金红李媛邓国华于康震中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

对于重组DNA的鉴定往往需要两至三天甚至更长的时间。尤其是对那些既无筛选标志，插入DNA片段又与原载体大小差别甚大的重组转化子的鉴定，更加耗时费力。该研究利用PCR方法，建立了一种从转化子菌落中直接鉴定重组DNA的方法，使这一过... 详细信息

对于重组DNA的鉴定往往需要两至三天甚至更长的时间。尤其是对那些既无筛选标志，插入DNA片段又与原载体大小差别甚大的重组转化子的鉴定，更加耗时费力。该研究利用PCR方法，建立了一种从转化子菌落中直接鉴定重组DNA的方法，使这一过程缩短为半天，减少了不必要的人力和物力耗费。

关键词：基因重组技术多聚酶链反应 PCR

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甲醛对马立克氏病琼扩抗原的影响

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中国畜禽传染病 1998年第4期20卷 246-246页

作者：李维义李媛熊永忠中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

甲醛对马立克氏病琼扩抗原的影响李维义李媛熊永忠＊（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，哈尔滨１５０００１）甲醛作为一种灭活剂，被人们广泛用于抗原和疫苗的生产。目前许多禽用灭活疫苗都是用甲醛来灭活... 详细信息

甲醛对马立克氏病琼扩抗原的影响李维义李媛熊永忠＊（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，哈尔滨１５０００１）甲醛作为一种灭活剂，被人们广泛用于抗原和疫苗的生产。目前许多禽用灭活疫苗都是用甲醛来灭活。在甲醛灭活过程中，对被灭活的生物...

关键词：马立克氏病琼扩抗原甲醛

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'97香港禽流感

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中国畜禽传染病 1998年第3期20卷 187-187页

作者：于康震陈化兰唐秀英中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

’９７香港禽流感于康震陈化兰唐秀英（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，哈尔滨１５０００１）’９７香港禽流感以“杀人”为特征，令全世界哗然，被美国新闻机构评为１９９７年世界三大科技新闻之一，国际... 详细信息

’９７香港禽流感于康震陈化兰唐秀英（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，哈尔滨１５０００１）’９７香港禽流感以“杀人”为特征，令全世界哗然，被美国新闻机构评为１９９７年世界三大科技新闻之一，国际科技界也予以极大关注，面临新的挑战...

关键词：禽流感致病性人兽共患病香港

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PCR结合分子杂交法检测鸡传染性支气管炎病毒

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中国兽医学报 1997年第5期17卷 431-433页

作者：刘滨东刘思国袁秀芳万梅梅孔宪刚卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

利用逆转录－ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）特异性扩增鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）基因组中Ｍ基因和Ｎ基因之间一段核酸片段。以ｐＵＣ１９质粒载体将此片段克隆，用ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切此重组质粒，回收克隆片段后，制成生物素标... 详细信息

利用逆转录－ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）特异性扩增鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）基因组中Ｍ基因和Ｎ基因之间一段核酸片段。以ｐＵＣ１９质粒载体将此片段克隆，用ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切此重组质粒，回收克隆片段后，制成生物素标记的核酸探针。用ＲＴ－ＰＣＲ及生物素核酸探针法分别对ＩＢＶ，ＩＢＤＶ，ＩＬＴＶ，ＭＤＶ及ＮＤＶ进行检测，结果证明该方法为ＩＢＶ特异性检测方法。对人工感染ＩＢＶ的ＳＰＦ鸡口腔棉拭样品进行跟踪检测，证明本方法能在ＳＰＦ鸡接毒后１～１０ｄ内检出ＩＢＶ。

关键词： PCR 核酸探针传染性支气管炎病毒鸡病

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禽流感病毒血凝素基因的克隆及其DNA疫苗的免疫原性

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中国兽医学报 1997年第6期17卷 555-558页

作者：陈化兰于康震田国斌唐秀英卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

禽流感病毒（ＡＩＶ）的表面结构蛋白血凝素（ＨＡ）是其主要保护性抗原。本研究参考已发表的Ｈ７亚型ＡＩＶ的ＨＡ基因序列，设计合成了１对Ｈ７ＨＡ特异引物，以ＡＩＶＡ／Ａｆｒｉ．Ｓｔａｒ．／Ｅｎｇ－Ｑ／９８３／７９／（Ｈ７Ｎ... 详细信息

禽流感病毒（ＡＩＶ）的表面结构蛋白血凝素（ＨＡ）是其主要保护性抗原。本研究参考已发表的Ｈ７亚型ＡＩＶ的ＨＡ基因序列，设计合成了１对Ｈ７ＨＡ特异引物，以ＡＩＶＡ／Ａｆｒｉ．Ｓｔａｒ．／Ｅｎｇ－Ｑ／９８３／７９／（Ｈ７Ｎ１）（Ａ／Ａｆｒｉ．Ｓｔａｒ．／Ｅｎｇ）核酸为模板，通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增出１条１．７ｋｂｃＤＮＡ片段。将这一片段定向克隆到ｐＵＣ１８中，对其５′端及３′端部分序列测定后，确证其为ＨＡｃＤＮＡ。将ＨＡ基因置于ＳＶ４０启动子和增强子下游，构建了这一基因的真核表达质粒ｐＳＶＨ７。以此质粒１００μｇ肌肉注射免疫３周龄ＳＰＦ鸡６只，４周后以１００倍鸡胚感染剂量（ＥＩＤ）的ＨＡ基因同源病毒对所有鸡进行攻毒，１周后以棉拭子进行泄殖腔病毒分离；免疫后１～６周每周对所有鸡翅静脉采血，分离血清，检测ＨＩ抗体。结果，１００μｇ免疫组鸡病毒分离数为０／６，对照组为６／６；攻毒后１周免疫组鸡ＨＩ效价为１∶３２～１∶６４，对照组为１∶４～１∶１６。表明所构建的ＨＡ基因表达质粒可作为基因疫苗诱导鸡产生免疫保护反应。

关键词：禽流感病毒血凝素基因 RT-PCR 克隆 DNA疫苗

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鸡传染性喉气管炎病毒中国王岗株gX基因的克隆及鉴定

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中国兽医学报 1997年第3期17卷 219-221页

作者：张绍杰宋程于力王玫王柳李昌仁童光志卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

以ｐＵＣ１９质粒为载体克隆鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）中国王岗株的ＤＮＡ，构建了鸡传染性喉气管炎病毒ＤＮＡ的ＫｐｎⅠＤＮＡ文库。参考ＩＬＴＶ－ＳＡ２株ｇＸ基因的核酸序列，设计并合成了分别为１２ｂｐ和１３ｂｐ的１对... 详细信息

以ｐＵＣ１９质粒为载体克隆鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）中国王岗株的ＤＮＡ，构建了鸡传染性喉气管炎病毒ＤＮＡ的ＫｐｎⅠＤＮＡ文库。参考ＩＬＴＶ－ＳＡ２株ｇＸ基因的核酸序列，设计并合成了分别为１２ｂｐ和１３ｂｐ的１对引物。以ＩＬＴＶ中国王岗株ＤＮＡ为模板，用ＰＣＲ方法特异性地扩增出０．８４ｋｂ的ＩＬＴＶ－ｇＸ基因片段。以地高辛标记该０．８４ｋｂ的片段为探针，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交从ＩＬＴＶ中国王岗株ＫｐｎⅠＤＮＡ文库中筛选出３个含５．２ｋｂ外源ＩＬＴＶＤＮＡ片段的ｇＸ基因阳性重组子。经酶切分析、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、ＰＣＲ检测和该片段部分酶谱分析表明，ＩＬＴＶ中国王岗株ＤＮＡ５．２ｋｂ的ＫｐｎⅠ片段无论是片段大小还是酶切图谱均与ＩＬＴＶ－ＳＡ２株完全相同，而且Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和ＰＣＲ检测均为ｇＸ阳性。

关键词：传染性喉气管炎病毒基因聚合酶链反应重组子

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新城疫病毒F_(48)E_(9)株HN基因的克隆与酶切分析

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中国兽医学报 1997年第4期17卷 326-330页

作者：曹殿军刘春丽王莉林张莹卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

为深入探讨新城疫病毒（ＮＤＶ）的结构与功能的关系，扩增和克隆了Ｆ４８Ｅ９株ＮＤＶ的ＨＮ基因。首先以提取的Ｆ４８Ｅ９株ＮＤＶ基因组ＲＮＡ为模板逆转录合成第一链ｃＤＮＡ，然后用ＨＮ基因特异性引物作ＰＣＲ扩增ＨＮｃＤＮＡ，... 详细信息

为深入探讨新城疫病毒（ＮＤＶ）的结构与功能的关系，扩增和克隆了Ｆ４８Ｅ９株ＮＤＶ的ＨＮ基因。首先以提取的Ｆ４８Ｅ９株ＮＤＶ基因组ＲＮＡ为模板逆转录合成第一链ｃＤＮＡ，然后用ＨＮ基因特异性引物作ＰＣＲ扩增ＨＮｃＤＮＡ，结果得到１条分子量约１．８ｋｂ的ＤＮＡ带，与ＮＤＶＨＮ基因的大小一致。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交进一步证实其为ＨＮ特异性ｃＤＮＡ。随后采用平端连接法将其克隆到ｐＳＶ·Ｓｐｏｒｔｌ质粒中，应用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ、ＳｃａⅠ、ＭｌｕⅠ、ＡｐａⅠ、ＰｓｔⅠ、和ＳｍａⅠ对ＮＤＶＦ４８Ｅ９株ＨＮｃＤＮＡ重组质粒作单酶或双酶切，结果表明，ＮＤＶＦ４８Ｅ９株ＨＮ基因较ＨｉｔｃｈｎｅｒＢ１株的ＨＮ基因缺少１个ＭｌｕⅠ位点（７０５ｂｐ左右），多１个ＰｓｔⅠ位点（８０２ｂｐ左右）。

关键词：新城疫病毒 HN基因克隆与鉴定

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旋毛虫肌幼虫ES抗原特异性蛋白2个结构基因的分子克隆及其高效表达

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中国兽医学报 1997年第6期17卷 581-588页

作者：阎玉河童光志卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室河南省农业科学院畜牧兽医研究所

旋毛虫肌幼虫排泄－分泌（ＥＳ）抗原来源于体外培养的旋毛虫肌幼虫的排泄－分泌物。为研制具有ＥＳ抗原功能的旋毛虫基因重组抗原，首先用ＡＧＰＣ法提取旋毛虫肌幼虫总ＲＮＡ并进行变性琼脂糖凝胶电泳分析，发现它缺少真核生物所具有... 详细信息

旋毛虫肌幼虫排泄－分泌（ＥＳ）抗原来源于体外培养的旋毛虫肌幼虫的排泄－分泌物。为研制具有ＥＳ抗原功能的旋毛虫基因重组抗原，首先用ＡＧＰＣ法提取旋毛虫肌幼虫总ＲＮＡ并进行变性琼脂糖凝胶电泳分析，发现它缺少真核生物所具有的２８ＳｒＲＮＡ。根据编码４５０００和４９０００蛋白的基因结构，设计并合成２对ＰＣＲ引物，用ＲＴ－ＰＣＲ方法分别扩增出了２个目的基因（ＴＳＰＧ和ＴＳＰＧⅡ）。序列分析发现，ＴＳＰＧ在第４５８到５０５位之间的核苷酸编码框架与结构基因Ｐ４５的不同，此外，还有多处出现与Ｐ４５不同的碱基。在ＴＳＰＧⅡ核苷酸序列中只有１个碱基与Ｐ４９不同。根据可识别的糖基化位点判定，ＴＳＰＧ和ＴＳＰＧⅡ各含有１个Ｎ－型连接的糖基化位点。将构建的３个重组质粒转化大肠杆菌，通过温度诱导培养，分别在大肠杆菌中表达出３７０００、４６０００和３４０００的重组蛋白，三者的表达水平分别为２２％、１０％和８％；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析和ＥＬＩＳＡ检测表明，它们均可被猪旋毛虫病阳性血清和单克隆抗体识别，但特异性有所不同。将ＴＳＰＧⅡ克隆至Ｅ．ｃｏｌｉ－Ｙｅａｓｔ穿梭载体ｐＨＩＬ－Ｓ１上，经内切酶消化和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交鉴定后，?

关键词：旋毛虫 ES抗原基因克隆高效表达

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