检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2019年第11期41卷 1159-1163页

作者：张永莉胡薇刘强马泽林胡守萍张卓张险峰贾洪林何希君中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

免疫蛋白酶体在炎症性疾病模型中发挥重要作用。为研究免疫蛋白酶体亚基LMP7在弓形虫感染引起小鼠脑部炎症过程中的作用,本研究将36只BALB/c小鼠随机分为3组,每组12只:对照组小鼠腹腔注射PBS,实验组小鼠腹腔注射弓形虫RH强毒株,于人工... 详细信息

免疫蛋白酶体在炎症性疾病模型中发挥重要作用。为研究免疫蛋白酶体亚基LMP7在弓形虫感染引起小鼠脑部炎症过程中的作用,本研究将36只BALB/c小鼠随机分为3组,每组12只:对照组小鼠腹腔注射PBS,实验组小鼠腹腔注射弓形虫RH强毒株,于人工感染第2 d分别对实验组小鼠腹腔注射PBS(RH+PBS组)和PR-957(RH+PR-957组,免疫蛋白酶体亚基LMP7特异性抑制剂),分别于感染后第10 d和第23 d随机迫杀6只小鼠采集脑组织,western blot结果显示,RH+PR-957组小鼠的免疫蛋白酶体亚基LMP7在感染后第23 d时未见其表达被抑制;该组小鼠LMP10和LMP2表达量与RH+PBS组对比变化不大。小鼠存活率结果显示,RH+PR-957组小鼠存活率为67.7%,高于RH+PBS组和PBS组;脑组织病理学结果显示,RH+PBS组小鼠脑组织内有明显的血管套现象,RH+PR-957组小鼠脑组织有胶质细胞浸润和轻微的血管套现象;免疫组化结果显示,RH+PBS组小鼠脑组织中小胶质细胞的数量相比于RH+PR-957组增多,细胞突起变长、变粗,呈现高分枝状;荧光定量PCR结果显示,RH+PR-957组小鼠脑组织的促炎性细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-1β和IL-6的RNA转录水平明显低于RH+PBS组。上述结果表明抑制免疫蛋白酶体亚基LMP7的表达可减弱弓形虫感染引起的小鼠脑部炎症。本研究为免疫蛋白酶体亚基LMP7在弓形虫性中枢神经系统疾病致病机理的研究奠定基础。

关键词：小鼠弓形虫免疫蛋白酶体亚基LMP7抑制剂PR-957 促炎性细胞因子

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鼠伤寒沙门氏杆菌slrP基因缺失株的构建及其对细胞存活率的影响

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中国预防兽医学报 2019年第7期41卷 677-681页

作者：邵增玉毕彩鸿李江南翁长江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

为研究鼠伤寒沙门氏杆菌(ST)E3泛素连接酶SlrP对细胞存活率的影响,本研究利用λ-Red介导的同源重组技术,构建了STCVCC542株slrP基因缺失株(CVCC542ΔslrP),同时得到回补株CVCC542ΔslrP/pslrP。通过测定野生菌、缺失株和回补株的生长曲... 详细信息

为研究鼠伤寒沙门氏杆菌(ST)E3泛素连接酶SlrP对细胞存活率的影响,本研究利用λ-Red介导的同源重组技术,构建了STCVCC542株slrP基因缺失株(CVCC542ΔslrP),同时得到回补株CVCC542ΔslrP/pslrP。通过测定野生菌、缺失株和回补株的生长曲线及其对HeLa细胞存活率的影响,探究SlrP蛋白在ST感染过程中的作用。生长曲线显示,slrP基因的缺失和回补对CVCC542的生长无影响;细胞存活率试验结果显示缺失菌株与野生菌株相比细胞存活率明显升高(p<0.05),而回补株与缺失株相比细胞存活率明显下降(p<0.01)。本研究为进一步阐释ST引起细胞死亡机制和该病疫苗开发奠定基础。

关键词：鼠伤寒沙门氏菌 λ-Red slrP E3泛素连接酶细胞存活率

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新城疫病毒通过候鸟途径跨境传入我国的风险定量评估

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农业大数据学报 2020年第4期2卷 55-62页

作者：王世达魏丽丽王靖飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨150069 兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069 国家动物疫病数据中心哈尔滨150069

为评估我国家禽经候鸟途径导致感染新城疫病毒的风险,为疫病发生提供预警,本研究基于情景树方法,以斑头雁、白枕鹤及宗头鸥3种候鸟做为传播媒介,以候鸟携带病毒概率、候鸟存活概率、候鸟在目标区域出现/停留概率、候鸟与家禽有接触概率... 详细信息

为评估我国家禽经候鸟途径导致感染新城疫病毒的风险,为疫病发生提供预警,本研究基于情景树方法,以斑头雁、白枕鹤及宗头鸥3种候鸟做为传播媒介,以候鸟携带病毒概率、候鸟存活概率、候鸟在目标区域出现/停留概率、候鸟与家禽有接触概率、候鸟与家禽有效接触概率、免疫覆盖率及免疫保护效率7个因素为主要风险节点构建了新城疫病毒通过候鸟途径传入我国家禽的风险评估模型。针对情景树中的关键风险节点进行数据采集及评估,以县级行政区划为空间单元、月份为时间单元对新城疫病毒通过候鸟途径引入风险进行了定量分析。分析结果表明,每年1—2月以及11—12月相对高风险区域主要集中在我国南部沿海地区,3—4月以及9—10月,处于候鸟迁徙路线上的中部东部地区家禽感染新城疫病毒的相对风险较高;5—6月我国东北地区以及中部地区为家禽通过候鸟途径感染新城疫病毒的相对高风险地区,7—8月,在我国华东地区出现了一个集中的相对高风险区域。整体而言,我国东部及中部地区风险高于西部地区。敏感性分析显示疫苗免疫是降低候鸟将新城疫病毒传播至家禽风险的主要因素。该研究为以风险评估为基础的疫病监测提供技术方案,为基于风险预警的新发新城疫疫情防控提供了理论依据。

关键词：风险评估新城疫候鸟病毒

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抗犬细小病毒VP2蛋白单链抗体的制备与中和活性研究

抗犬细小病毒VP2蛋白单链抗体的制备与中和活性研究

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第22届中国科协年会--公共卫生安全与生物技术论坛

作者：李彤彤宋彩玲杨凯越王文静陈慧宇刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨 150069

为了减轻鼠源单克隆抗体(McAb)异源性引起的宿主免疫排斥反应,同时克服生产McAb成本高及费时费力等缺点,利用原核表达制备具有抗犬细小病毒(CPV)鼠源抗体可变区基因的单链抗体(single chain antibody fragment,ScFv).提取实验室前期制... 详细信息

为了减轻鼠源单克隆抗体(McAb)异源性引起的宿主免疫排斥反应,同时克服生产McAb成本高及费时费力等缺点,利用原核表达制备具有抗犬细小病毒(CPV)鼠源抗体可变区基因的单链抗体(single chain antibody fragment,ScFv).提取实验室前期制备筛选的分泌具有良好中和活性抗CPV VP2 蛋白McAb 的杂交瘤细胞株总 RNA,从反转录cDNA 中扩增抗体重链可变区(VH)基因和轻链可变区(VL)基因并克隆到表达载体中,构建重组质粒pOPE101-ScFv;将重组质粒转化大肠杆菌进行诱导表达,通过蛋白免疫印迹(Western blot)实验、酶联免疫吸附试验(en-zyme linked immunosorbent assay,ELISA)和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)证明,利用大肠杆菌表达系统获得的ScFv具有和CPV特异性结合的能力,且具有中和活性,效价为 1∶20(0.028μg/ml),为CPV的临床免疫治疗提供基础.

关键词：犬细小病毒单链抗体原核表达

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规模化驴场驴腺疫病原菌的分离鉴定及其对小鼠感染力的研究

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黑龙江畜牧兽医 2020年第22期 67-70,76,166页

作者：王宁王涛郭奎姜桂苗赵付伟王晓钧郭巍中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马传染病与慢病毒病研究团队哈尔滨150069 东阿阿胶股份有限公司国家胶类中药工程技术研究中心山东东阿252201

为了对从某千头规模养驴场采集的病料进行驴腺疫病原菌的分离鉴定并判断其毒力,试验使用已报道的特异性PCR方法进行腺疫病原的快速鉴定,再通过生化鉴定、革兰氏染色、16S rRNA测序等方法进一步确定病原菌种类,然后对分离菌株进行药敏试... 详细信息

为了对从某千头规模养驴场采集的病料进行驴腺疫病原菌的分离鉴定并判断其毒力,试验使用已报道的特异性PCR方法进行腺疫病原的快速鉴定,再通过生化鉴定、革兰氏染色、16S rRNA测序等方法进一步确定病原菌种类,然后对分离菌株进行药敏试验和Balb/c小鼠的感染试验。结果表明:特异性PCR方法初步筛选到可能含有马链球菌马亚种的样品。分离纯化后将初步分离的菌株命名为SD2018,染色镜检可见典型的链球菌菌落形态。分离菌株SD2018精氨酸、蔗糖及溶血试验结果均为阳性,其余生化试验结果均为阴性。分离菌株SD2018 16S rRNA基因测序鉴定结果与马链球菌马亚种(JQ726496.1)序列同源性超过99%,判定为马链球菌马亚种。该菌株对苯唑西林、头孢曲松、红霉素、替考拉宁、利福平敏感,10 d内感染小鼠的最小完全致死剂量为1×103 cfu。说明分离菌株SD2018对小鼠致死性强,该规模化养驴场驴腺疫的病原体为马链球菌马亚种。

关键词：驴腺疫马链球菌马亚种分离鉴定耐药性感染力

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人源和禽源H7N9亚型禽流感病毒遗传进化分析及对小鼠的毒力评估

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动物医学进展 2020年第12期41卷 40-46页

作者：郭晶夏瑜杨佳欣张晓璇高鑫鑫刘成李旭勇聊城大学农学院山东聊城252000 苏州市疾病预防控制中心江苏苏州215000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

新型禽源A型H7N9禽流感病毒一直威胁着人类健康,对病毒的遗传进化和生物学特性进行持续研究对于H7N9禽流感的防控十分重要。为了解导致禽类和人类感染的H7N9病毒的进化、突变及其生物学特性,2014年和2015年从中国江苏分离出1株禽源和2... 详细信息

新型禽源A型H7N9禽流感病毒一直威胁着人类健康,对病毒的遗传进化和生物学特性进行持续研究对于H7N9禽流感的防控十分重要。为了解导致禽类和人类感染的H7N9病毒的进化、突变及其生物学特性,2014年和2015年从中国江苏分离出1株禽源和2株人源H7N9病毒,分别对这3株病毒的进化进行了评估。序列分析显示,HA基因在核苷酸水平上有98.7%至99.5%的同源性,并聚集成两个系统发育群。3株病毒的6个内部基因在核苷酸水平上具有96.8%至99.6%的同源性。在2株人源分离株的PB2中有E627K氨基酸位点突变,且在血凝素(HA)切割位点无连续碱性氨基酸插入。动物试验表明,人源分离株SZ19在小鼠中的毒力比禽源分离株CK/SZ141高,接种了SZ19病毒的小鼠体重下降了18%。此外,在观察期间2株试验病毒均未致死小鼠。病理学研究结果显示,与禽源病毒相比,人源H7N9病毒更容易感染小鼠的上呼吸道和下呼吸道。试验结果提示对禽类和人类进行H7N9禽流感系统监测的重要性以及在哺乳动物模型中对H7N9病毒的复制和致病性进行系统评估的必要性。

关键词： H7N9禽流感病毒进化毒力小鼠

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细菌鞭毛蛋白免疫佐剂活性作用机制及应用研究进展

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中国预防兽医学报 2020年第8期42卷 850-855页

作者：庞胜美吴文文丁雪燕刘思国王晓钧段强德朱国强扬州大学兽医学院江苏扬州225009 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

鞭毛是位于细菌表面的一种长丝状附属物,由基体部(Basal body)、鞭毛钩(Hook)和鞭毛丝(Fila-ment)3部分组成,其中fliC是鞭毛蛋白编码基因的主要结构成分。鞭毛蛋白是一种重要的病原体相关分子模式(Pathogen-associated molecular patter... 详细信息

鞭毛是位于细菌表面的一种长丝状附属物,由基体部(Basal body)、鞭毛钩(Hook)和鞭毛丝(Fila-ment)3部分组成,其中fliC是鞭毛蛋白编码基因的主要结构成分。鞭毛蛋白是一种重要的病原体相关分子模式(Pathogen-associated molecular patterns,PAMPs),能激活细胞表面Toll样受体5(Toll-like receptor 5,TLR5)[1]和/或细胞溶质NOD样受体蛋白4(NLR family CARD domain-containing protein 4,NL⁃RC4)[2],发挥免疫佐剂活性[3-4]。

关键词：免疫佐剂鞭毛蛋白 Toll样受体5 细胞溶质结构成分细菌鞭毛蛋白免疫 TLR5

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新型鸭呼肠孤病毒群特异性抗原蛋白的表达、纯化及其多克隆抗体的制备

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中国家禽 2020年第11期42卷 27-32页

作者：罗丹杨伏春高立李凯祁小乐高玉龙刘长军张艳萍崔红玉潘青王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病创新团队黑龙江哈尔滨150069 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

为制备新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)群特异性抗原σB的多克隆抗体,研究采用RT-PCR方法扩增NDRV-SD19/6201株σB基因编码序列,将其克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。SDS-PAGE和Western... 详细信息

为制备新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)群特异性抗原σB的多克隆抗体,研究采用RT-PCR方法扩增NDRV-SD19/6201株σB基因编码序列,将其克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blot鉴定结果显示,NDRV群特异性抗原σB获得高效表达,重组蛋白分子量约55 ku,该重组蛋白具有良好的免疫活性,能与His-标签抗体及NDRV阳性血清发生特异性结合反应。以纯化的重组蛋白免疫新西兰兔,获得高效价多克隆抗体,效价1∶12 800以上;间接免疫荧光试验表明,多克隆抗体能特异性识别多株NDRV毒株,具有较好的免疫反应活性。研究为建立NDRV血清学诊断方法提供了材料,同时为探究σB蛋白生物学功能奠定了基础。

关键词：新型鸭呼肠孤病毒群特异性抗原蛋白 σB 多克隆抗体

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表达狂犬病病毒G蛋白重组犬瘟热病毒Snyder Hill株的构建及鉴定

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中国预防兽医学报 2019年第1期41卷 12-17页

作者：李翠霞王喜军赵丹丹帅磊步志高葛金英中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为构建一株表达狂犬病病毒(RV) G蛋白的重组犬瘟热病毒(CDV),本研究以本实验室分离的CDVSnyder Hill疫苗株为基础,在CDV P和M基因之间插入RV弱毒疫苗株ERA G蛋白基因,构建重组质粒p CI-CDV-RVG及表达CDV N、P和L蛋白的辅助质粒p CI-CDVN... 详细信息

为构建一株表达狂犬病病毒(RV) G蛋白的重组犬瘟热病毒(CDV),本研究以本实验室分离的CDVSnyder Hill疫苗株为基础,在CDV P和M基因之间插入RV弱毒疫苗株ERA G蛋白基因,构建重组质粒p CI-CDV-RVG及表达CDV N、P和L蛋白的辅助质粒p CI-CDVN、p CI-CDVP和p CI-CDVL,将重组质粒和辅助质粒共转染BSR细胞,拯救获得了表达RV G蛋白的重组犬瘟热病毒(rCDV-RVG),将该重组病毒在Vero细胞中传代,通过RT-PCR、间接免疫荧光试验(IFA)和western blot鉴定。结果显示RV G基因能够在r CDV-RVG中稳定存在并正确表达。病毒生长动力学曲线显示,重组病毒在Vero细胞中的增殖效率与拯救的亲本病毒r CDV无显著差异(p>0.05)。本研究表明CDV Snyder Hill株作为载体表达外源基因的潜力,为研制高效、安全、廉价的CDV-RV二联活载体疫苗奠定基础。

关键词：重组犬瘟热病毒狂犬病病毒 G蛋白鉴定

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AP2M1在狂犬病病毒侵入中的作用研究

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中国预防兽医学报 2019年第1期41卷 6-11页

作者：马骁王翀王金良王子龙王鑫鑫帅磊王喜军葛金英温志远步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

本研究前期利用RNA干扰技术在人类全基因组水平上筛选到了与狂犬病病毒(RABV)生命周期有关的宿主基因AP2M1。为进一步研究AP2M1影响RABV感染的机制,本实验在人胚胎肾细胞(HEK-293)中沉默或过表达AP2M1,采用高内涵筛选、病毒滴度检测等... 详细信息

本研究前期利用RNA干扰技术在人类全基因组水平上筛选到了与狂犬病病毒(RABV)生命周期有关的宿主基因AP2M1。为进一步研究AP2M1影响RABV感染的机制,本实验在人胚胎肾细胞(HEK-293)中沉默或过表达AP2M1,采用高内涵筛选、病毒滴度检测等方法分析AP2M1对RABV感染率的影响。结果显示:敲低AP2M1,RABV感染率显著下降;过表达AP2M1,RABV感染率上升。酸绕过实验显示AP2M1在RABV感染过程中发挥作用。激光共聚焦观察显示RABV G蛋白与AP2M1无共定位。免疫共沉淀实验显示AP2M1与RABV G蛋白无直接相互作用。本研究结果表明,AP2M1基因在RABV感染过程中发挥作用,但不是通过与RABV G蛋白的直接作用影响病毒的感染。本研究为阐明AP2M1在RABV生命周期中具体作用奠定了基础。

关键词： AP2M1 狂犬病病毒病毒侵入 G蛋白

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