检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2018年第7期40卷 596-600页

作者：崔蒙蒙李江南王刚何希君翁长江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了直观、高效、特异性地检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染细胞和组织中PRRSV RNA,本研究根据HP-PRRSV Hu N4株ORF7基因序列设计8对28 bp^36 bp双"Z"结构的寡核苷酸探针(PRRSV-Nprobes),建立了一种新的PRRSV RNA原位... 详细信息

为了直观、高效、特异性地检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染细胞和组织中PRRSV RNA,本研究根据HP-PRRSV Hu N4株ORF7基因序列设计8对28 bp^36 bp双"Z"结构的寡核苷酸探针(PRRSV-Nprobes),建立了一种新的PRRSV RNA原位杂交检测的方法。该方法能特异性的检测PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)中PRRSV RNA,而对猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病毒(PRV)感染PAMs中的核酸呈现阴性。应用该方法检测PRRSV感染仔猪肺脏、腹股沟淋巴结和胸腺石蜡包埋组织切片中PRRSV RNA,在感染的腹股沟淋巴结中PRRSV RNA呈现集中分布,而PRRSV RNA在肺脏和胸腺中呈弥漫性分布。该方法可用于细胞和组织中核酸的定位及分布规律的研究,特别是用于病毒含量较少的潜伏感染的检测,为PRRSV实验室检测和致病机理研究奠定了良好的试验基础和技术支持。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒原位杂交 RNAscope 猪肺泡巨噬细胞石蜡包埋组织

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伪狂犬病毒被膜蛋白VP22单克隆抗体的制备及免疫电镜方法的建立

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黑龙江畜牧兽医 2018年第11期 37-40,252页

作者：刘慧敏陈利红史智宾刘春国仇铮王靖飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

为了制备伪狂犬病毒（PRV）被膜蛋白VP22的单克隆抗体并建立免疫电镜方法,试验首先构建真核重组质粒pCAGGS-UL49,酶切及间接免疫荧光验证该质粒是否构建成功,然后用真核重组质粒以100μg/只的剂量免疫6周龄Balb/c雌性小鼠,经过4次免疫... 详细信息

为了制备伪狂犬病毒（PRV）被膜蛋白VP22的单克隆抗体并建立免疫电镜方法,试验首先构建真核重组质粒pCAGGS-UL49,酶切及间接免疫荧光验证该质粒是否构建成功,然后用真核重组质粒以100μg/只的剂量免疫6周龄Balb/c雌性小鼠,经过4次免疫后进行细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性克隆,抗体亚类试剂盒鉴别抗体亚类,收集第5,10,20代次的杂交瘤细胞上清液用ELISA法检测其效价,Western-blot法鉴定其特异性,将该抗体分别稀释50,100,200倍并作为一抗,免疫电镜检测VP22蛋白的表达效果。结果表明：获得1株稳定分泌VP22蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞（3D6）,该单克隆抗体的亚类为IgM,能与VP22蛋白发生特异性反应,100倍稀释的单克隆抗体可达到利用免疫电镜技术检测细胞内该蛋白表达的最佳效果。说明筛选得到的PRV被膜蛋白VP22单克隆抗体和建立的免疫电镜方法可用于该病毒的致病性及装配机制研究。

关键词：伪狂犬病毒被膜蛋白单克隆抗体细胞融合杂交瘤细胞免疫电镜

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禽网状内皮组织增生病病毒env蛋白在毕赤酵母中的表达及其免疫原性研究

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中国预防兽医学报 2018年第12期40卷 1147-1151页

作者：杨彦超王静李凯祁小乐崔红玉高玉龙刘长军高宏雷王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为评价禽网状内皮组织增生病病毒(REV) env蛋白的免疫原性,本研究将env基因克隆至毕赤酵母表达载体pAO815,构建了含有两个env表达盒(已突变env基因中BglⅡ和Bam HⅠ酶切位点)的重组表达质粒pAO815-2env,并电转至毕赤酵母宿主菌GS115,构... 详细信息

为评价禽网状内皮组织增生病病毒(REV) env蛋白的免疫原性,本研究将env基因克隆至毕赤酵母表达载体pAO815,构建了含有两个env表达盒(已突变env基因中BglⅡ和Bam HⅠ酶切位点)的重组表达质粒pAO815-2env,并电转至毕赤酵母宿主菌GS115,构建重组酵母菌株pAO815-2env/GS115,经发酵培养得到的env蛋白(蛋白含量达到4.8 g/L)经亲和层析纯化后免疫SPF鸡,利用ELISA试剂盒和中和试验检测血清中的REV抗体。结果显示,重组酵母菌株表达的env蛋白,不仅能够诱导SPF鸡产生抗REV抗体,还能诱导其产生中和抗体,且产生的中和抗体效价较高,具有良好的免疫原性。本研究为开展禽网状内皮组织增生病亚单位疫苗的研制提供了实验依据。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒 env基因毕赤酵母发酵

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马传染性贫血病弱毒疫苗免疫马血清对同源和异源病毒株中和活性的研究

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中国预防兽医学报 2018年第2期40卷 142-146页

作者：刘影王雪峰王美月陈杰孙君帅马建王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为评价马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗免疫马血清对同源和异源病毒株的中和活性差异,本研究构建了不同EIAV株(EIAV_(FDDV3-8)、EIAV_(LN)、EIAV_(UK)和EIAV_(YN))Env的重组表达质粒,并将这些质粒与包装质粒(pUK-Gag-pol)及表达荧光素... 详细信息

为评价马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗免疫马血清对同源和异源病毒株的中和活性差异,本研究构建了不同EIAV株(EIAV_(FDDV3-8)、EIAV_(LN)、EIAV_(UK)和EIAV_(YN))Env的重组表达质粒,并将这些质粒与包装质粒(pUK-Gag-pol)及表达荧光素酶的转移质粒(pONY8.1)共转染293T细胞;将假病毒与疫苗免疫马(5#、8#)血清共孵育后接种于ELR1-293T细胞单层;通过检测细胞中荧光素酶活性,计算疫苗免疫马血清中和50%假病毒感染的血清稀释倍数,评价血清对病毒的中和活性。结果显示,疫苗免疫马血清对表达不同Env假病毒的中和滴度存在差异,从高到低依次是:pVR1012-FDDV-3-8-Env、pVR1012-LN-Env、pVR1012-UK-Env、pVR1012-YN-Env,而且免疫血清对不同病毒株的中和能力与不同病毒株Env的变异呈负相关(5#,R^2=0.99;8#,R^2=0.96)。虽然免疫马血清中和异源病毒株的能力显著低于同源病毒株,但其对异源病毒株仍具有良好的中和作用,本研究结果表明中国EIAV弱毒疫苗可以激发抗不同病毒株的广谱中和抗体。

关键词：马传染性贫血病毒囊膜蛋白假病毒中和抗体

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猪肺泡巨噬细胞极化对猪瘟病毒复制的影响

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中国预防兽医学报 2018年第2期40卷 91-95页

作者：高素丽胡守萍张交儿张卓刘强何希君中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为探究猪肺泡巨噬细胞(PAM)极化与猪瘟病毒(CSFV)复制之间的关系,本研究首先通过支气管肺泡灌洗液法建立了高纯度原代肺泡巨噬细胞的培养体系。通过western blot确立了PAM向M1和M2型巨噬细胞极化的鉴别体系,并用CCK8法检测巨噬细胞极化... 详细信息

为探究猪肺泡巨噬细胞(PAM)极化与猪瘟病毒(CSFV)复制之间的关系,本研究首先通过支气管肺泡灌洗液法建立了高纯度原代肺泡巨噬细胞的培养体系。通过western blot确立了PAM向M1和M2型巨噬细胞极化的鉴别体系,并用CCK8法检测巨噬细胞极化后的细胞活性。在此基础上,通过间接免疫荧光试验和荧光定量PCR分别检测感染不同亚型PAM的CSFV E2蛋白的表达及其E2基因的转录水平,显示PAM向M1型的极化可减少CSFV E2蛋白的表达,从而抑制病毒的复制。本研究不仅为研究宿主对CSFV的免疫机制提供了重要线索,而且为设计基于巨噬细胞极化亚型防制CSF新策略提供一定依据。

关键词：猪瘟病毒肺泡巨噬细胞极化病毒复制

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Clade 2.3.2e H5亚型禽流感DNA疫苗的免疫保护效力研究

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中国预防兽医学报 2018年第10期40卷 930-933页

作者：潘俊慧梁真洁陈普成唐猛曾显营柳金雄邓国华姜永萍陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨黑龙江150069

为研制和更新针对H5亚型禽流感病毒(AIV)流行株的DNA疫苗,本研究将新近分离的H5亚型AIV Clade2.3.2e分支代表株A/Duck/Anhui/S1246/2015 (DK/AH/S1246/15)密码子优化的HA基因定向克隆至载体pCAGGS中构建重组质粒pCA-S1246,将该质粒转染293T细胞。利用间接免疫荧光和western blot检测,结果显示, HA蛋白可以在293T细胞中正确表达。将15μg、 30μg和60μg的p CA-S1246质粒分别免疫3周龄的SPF鸡, 3周以后以相同的剂量加强免疫后1周,检测其HI抗体平均效价分别可达1∶56、 1∶16和1∶37;加强免疫1周后用105EID50的DK/AH/S1246/15进行攻击时,免疫组的保护率为100%。本研究为DNA质粒pCA-S1246作为防控Clade.2.3.2e AIV的候选DNA疫苗株提供了实验依据。

关键词： DNA疫苗 Clade.2.3.2e禽流感病毒免疫效力评价

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两株H1N1亚型猪流感病毒HA蛋白中和性单克隆抗体的制备及抗病毒活性研究

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畜牧兽医学报 2018年第7期49卷 1460-1466页

作者：梁文花贾云慧许程志吴运谱陈艳杨焕良乔传玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨150069

为了制备抗欧亚类禽型(Eurasian avian-like,EA)H1N1猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)蛋白的单克隆抗体(MAb)并对其生物学活性进行检测,利用SIV A/swine/Henan/11/2005(HN11)增殖、纯化的全病毒蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾... 详细信息

为了制备抗欧亚类禽型(Eurasian avian-like,EA)H1N1猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)蛋白的单克隆抗体(MAb)并对其生物学活性进行检测,利用SIV A/swine/Henan/11/2005(HN11)增殖、纯化的全病毒蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,采用间接ELISA和HI检测方法进行筛选。结果获得了两株能稳定分泌抗HA蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为2B6和4C7;两株MAbs的腹水ELISA和HI效价均分别高于1∶107和5log2;两株MAbs能够在IFA试验中与病毒HA蛋白发生反应,而在Western blot试验中不能检测到病毒HA蛋白;病毒中和试验结果显示这两株MAbs对EA H1N1SIV具有病毒中和活性;MAbs的抗病毒活性又进一步通过小鼠的感染试验进行了评估,结果表明接种了MAbs的小鼠获得了有效抵抗同源及异源H1N1SIV感染的保护效果。研究证实制备的两株MAbs具有较高的病毒中和活性和较强的抗病毒感染能力,可以将其进一步应用于抗EA H1N1SIV的感染及开展病毒抗原性变异的分子基础研究。

关键词：猪流感病毒 HA蛋白单克隆抗体中和活性

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进口白羽肉种鸡禽白血病疫情鉴定

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中国预防兽医学报 2019年第5期41卷 526-529页

作者：马美哥于蒙蒙许传田黄庆华孟照洁王素艳邢立晓常芳芳李猷何希君刘长军祁小乐王永强孙延鸣王笑梅高玉龙中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病创新团队黑龙江哈尔滨150069 石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 山东省农业科学院畜牧兽医研究所/山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室山东济南250100 山东和康源生物育种股份有限公司山东济南271018

2018年以来,某进口品种肉种鸡发生疑似禽白血病病例,流行范围广,危害严重,为确定该次疫情的病原,本研究从辽宁、山东等地发病鸡场采集55份疑似禽白血病病料样品。病理组织切片观察显示,病料样品肝脏和脾脏均有髓细胞样肿瘤细胞增生。针... 详细信息

2018年以来,某进口品种肉种鸡发生疑似禽白血病病例,流行范围广,危害严重,为确定该次疫情的病原,本研究从辽宁、山东等地发病鸡场采集55份疑似禽白血病病料样品。病理组织切片观察显示,病料样品肝脏和脾脏均有髓细胞样肿瘤细胞增生。针对禽白血病病毒(ALV)、鸡马立克氏病病毒(MDV)和网状内皮组织增生症病毒(REV)的特异性PCR检测结果显示,55份病料样品中ALV阳性样品12份(21.8%),MDV阳性样品1份(1.82%),REV均为阴性。将12份ALV阳性病料样品经处理后接种DF-1细胞进行病毒分离,ELISA检测结果显示有8份ALV群特异性抗原阳性。ALV多重PCR检测结果表明,8个分离株均为J亚群ALV(ALV-J),测序结果显示,8个分离株之间核苷酸序列同源性为99.5%~100%,与A、B、C、D、E亚群ALV的同源性仅为56.5%~58.8%,与ALV-J的同源性为90.7%~96.6%,进一步表明所有分离株均为ALV-J。上述结果表明,引起该次进口白羽父母代肉种鸡发生禽白血病的病原主要以ALV-J为主,该研究结果为疫情的溯源和有效防控奠定了基础。

关键词：进口白羽肉种鸡禽白血病 J亚群禽白血病病毒病毒分离

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进口白羽肉种鸡J亚群禽白血病病毒的全基因组序列分析

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中国预防兽医学报 2019年第7期41卷 750-754页

作者：马美哥于蒙蒙许传田黄庆华孟照洁王素艳邢立晓常方方刘长军祁小乐王永强孙延鸣王笑梅高玉龙石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病创新团队黑龙江哈尔滨150069 山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室山东济南250100 山东和康源生物育种股份有限公司山东济南271018

为研究引起我国部分地区进口白羽肉种鸡发生禽白血病疫情的病毒来源及其变异趋势,本研究对从进口白羽肉种鸡分离的8株J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的全基因组序列进行测序分析。8株ALV-Jgp85氨基酸遗传演化分析显示,其与ALV-J肉鸡分离株(包... 详细信息

为研究引起我国部分地区进口白羽肉种鸡发生禽白血病疫情的病毒来源及其变异趋势,本研究对从进口白羽肉种鸡分离的8株J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的全基因组序列进行测序分析。8株ALV-Jgp85氨基酸遗传演化分析显示,其与ALV-J肉鸡分离株(包括ALV-J原型病毒株HPRS-103、美国肉鸡ALV-J分离株、国内肉鸡分离株)及蛋鸡分离株氨基酸序列同源性均低于92.5%,而与国内2014年父母代白羽肉种鸡ALV-J分离株GD14J2同源性较高,为93.5%~95.1%,处于同一分支。8株ALV-J的3'非编码区(3'UTR)在rTM区缺失203bp,DR-1区缺失7bp,E元件位置缺失125bp,仅保留了22个碱基,这一缺失特征与GD14J2一致。8株ALV-J的3'LTRU3区序列与ALV-J肉鸡分离株及蛋鸡分离株的相应基因序列同源性均低于91.5%,而与GD14J2病毒株的同源性较高,为94.3%~96.3%。序列分析发现U3区存在连续11bp缺失和164位碱基突变(C/T),该突变形成2个新的转录调控元件AIBREP1、AIBREP2。综合gp85、3'UTR和U3区序列特征,推测引起本次进口白羽肉种鸡禽白血病的ALV-J与国内2014年父母代白羽肉种鸡ALV-J分离株GD14J2为同一来源。但本次分离到的ALV-J病毒株也有新的变异趋势,这些变异是否与ALV-J致病性相关,还需进一步研究。本研究为ALV-J有效防控和净化提供数据支持。

关键词：进口肉种鸡禽白血病 J亚群禽白血病病毒全基因组序列分析

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中国预防兽医学报 2019年第6期41卷 590-594页

作者：李琦张朝霞谷昊容曹亮贾洪林王春仁黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 黑龙江省农垦总局动物卫生监督所黑龙江哈尔滨150036

为探究犬MDCK细胞中γ-干扰素(IFN-γ)诱导的免疫相关的GTP酶在刚地弓形虫(***)的纳虫空泡膜表面的定位情况,本研究采用慢病毒包装载体将免疫相关的GTP酶(Irgb11)与GFP的融合基因(Irgb11-GFP)引入犬MDCK细胞中,经荧光鉴定和western blo... 详细信息

为探究犬MDCK细胞中γ-干扰素(IFN-γ)诱导的免疫相关的GTP酶在刚地弓形虫(***)的纳虫空泡膜表面的定位情况,本研究采用慢病毒包装载体将免疫相关的GTP酶(Irgb11)与GFP的融合基因(Irgb11-GFP)引入犬MDCK细胞中,经荧光鉴定和western blot检测到Irgb11-GFP融合蛋白的表达,表明构建了过表达Irgb11的细胞系。采用IFN-γ诱导该细胞系24h后,接种弓形虫PLK株,以间接免疫荧光试验检测,并通过激光共聚焦扫描显微镜观察,结果显示Irgb11-GFP蛋白获得表达并能够与弓形虫PLK株的纳虫空泡膜(PVM)发生共定位,表明在IFN-γ存在的情况下,犬MDCK细胞中的Irgb11可以被募集到弓形虫PVM表面,从而发挥其破坏弓形虫PVM的功能。本实验为进一步研究犬细胞中抑制弓形虫生长的机制奠定基础。

关键词：弓形虫 Irgb11 γ-干扰素纳虫空泡膜

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