检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2017年第1期47卷 109-113页

作者：朱蕴暖张鑫朱向东陈建飞时洪艳石达王鑫季朝阳冯力黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪消化道团队黑龙江哈尔滨150069 东北农业大学生命科技学院黑龙江哈尔滨150030

为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)直观、特异和快速的检测方法,将TGEV接种PK-15细胞后,以抗TGEV N蛋白的单克隆抗体为一抗,荧光素FITC标记的山羊抗小鼠Ig G为二抗,建立了TGEV的间接免疫荧光(IFA)检测方法。结果显示,TGEV的最佳接种效价为... 详细信息

为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)直观、特异和快速的检测方法,将TGEV接种PK-15细胞后,以抗TGEV N蛋白的单克隆抗体为一抗,荧光素FITC标记的山羊抗小鼠Ig G为二抗,建立了TGEV的间接免疫荧光(IFA)检测方法。结果显示,TGEV的最佳接种效价为1×102TCID50,培养时间为24 h,细胞最佳固定液为40 m L/L多聚甲醛,最佳封闭条件为10 g/L BSA 37℃封闭30 min,一抗的最佳使用浓度为1 ng/L,二抗的最佳稀释度为1∶100。对常见的猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒和猪圆环病毒2型等猪病病原检测均为阴性。结果表明,建立的检测方法对TGEV具有良好的特异性。本研究建立的方法为TGEV的实验室诊断及TGEV在感染细胞中的定位和动态分布提供了有效的检测手段。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒间接免疫荧光方法抗TGEVN蛋白单克隆抗体

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鸭瘟重组病毒穿梭载体的构建及分析

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实验动物科学 2017年第3期34卷 16-19,23页

作者：刘柏含牛银杰赵丽丽弥春霞陈洪岩牡丹江师范学院生命科学与技术学院牡丹江157011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069

目的本研究目的为构建重组穿梭载体,拯救带有增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)重组病毒,为重组二联苗的研制奠定基础。方法选择已经证实的US区域的US2-SORF3、US7-US8和UL区域中的UL15-UL18的非编码区作为... 详细信息

目的本研究目的为构建重组穿梭载体,拯救带有增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)重组病毒,为重组二联苗的研制奠定基础。方法选择已经证实的US区域的US2-SORF3、US7-US8和UL区域中的UL15-UL18的非编码区作为插入位点构建穿梭载体P-US2-SORF3-EGFP,P-UL15-UL18-EGFP,P-US7-US8-EGFP。在已感染疫苗毒的鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblasts,CEFs)中转染穿梭载体,经细胞同源重组,收集细胞上清,进行噬斑筛选及纯化。结果成功构建了三个带有EGFP标签的穿梭载体,p Blusecript II SK构建的穿梭载体未成功筛选到重组噬斑而用p UC18构建的穿梭载体成功筛选到重组噬斑。结论拯救鸭瘟重组毒的研究中,p Blusecript II SK载体可能不是最佳的适用载体,也可能是插入位点为病毒复制的必须区。

关键词：鸭瘟病毒穿梭载体噬斑纯化

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Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒一步法PCR检测方法的建立

Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒一步法PCR检测方法的建立

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第十三届中国实验动物科学年会

作者：赵丽丽刘海燕徐丽晶王怡平陆涛峰陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室

目的为了建立快速检测Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒PCR方法。方法根据NCBI公布的来自我国不同省份的的Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒的基因序列,找出其保守序列,设计合成两对引物,在一个PCR反应管中进行PCR反应,并进行条件优化。结果该方法敏... 详细信息

目的为了建立快速检测Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒PCR方法。方法根据NCBI公布的来自我国不同省份的的Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒的基因序列,找出其保守序列,设计合成两对引物,在一个PCR反应管中进行PCR反应,并进行条件优化。结果该方法敏感性高,最低能检出5.3pg Ⅰ型鸭肝炎病毒和2.7pg鸭瘟病毒的RNA或DNA模板。其特异性强,对番鸭细小病毒(MDPV),鹅细小病毒(GPV),新城疫病毒(NDV)和流感病毒(AIV),鸭减蛋综合征病毒(EDSV),禽网状内皮组织增生症病毒(REV),鸭坦布苏病毒(DTMUV),禽呼肠弧病毒(ARV)8种病毒的检测均为阴性,Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒检测结果为阳性。用建立的方法检测了江苏徐州采集的100份样品,Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒的阳性率分别为1.2%和26%。结论建立了Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒一步法PCR检测方法。

关键词： Ⅰ型鸭肝炎病毒鸭瘟病毒一步法PCR 应用

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SPF大白猪和长白猪群体生理生化特性分析

SPF大白猪和长白猪群体生理生化特性分析

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第八届北京实验动物科学国际论坛

作者：权金强高彩霞江新杰李昌文路小野赵生国陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069 甘肃农业大学动物科学技术学院兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069 牡丹江师范学院生命科学与技术学院牡丹江157011 甘肃农业大学动物科学技术学院兰州730070

目的：研究分析SPF大白猪、长白猪生殖生理和血液生理生化特性。方法：常规方法测定SPF大白猪、长白猪群体10项生殖生理指标、19项血液生理和18项血液生化指标，统计分析各指标在不同群体、不同年龄、不同性别间的差异。结果：... 详细信息

目的：研究分析SPF大白猪、长白猪生殖生理和血液生理生化特性。方法：常规方法测定SPF大白猪、长白猪群体10项生殖生理指标、19项血液生理和18项血液生化指标，统计分析各指标在不同群体、不同年龄、不同性别间的差异。结果：SPF大白猪、长白猪生殖生理指标和血液大部分生理生化指标差异不显著（P＞0.05)，个别指标如血液生理指标GRAN、HGB、RDW、PLT、PCT,血液生化指标ALKP、CHOL、TBIL、BUN在品种间、不同年龄以及不同性别之间差异显著（P＜0.05)，但其偏离正常值范围较小。结论：SPF大白猪、长白猪在生殖生理和血液生理生化等方面基本稳定，与其它实验用小型猪相比差异不大，本研究为其标准化饲养、动物模型的构建以及封闭群猪群遗传质量的评价提供了重要的基础数据。

关键词：实验用猪大白猪长白猪生殖生理指标血液生化指标

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抗原处理相关转运体基因多态性与疾病相关性的研究进展

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实验动物与比较医学 2017年第3期37卷 252-256页

作者：王兴童陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室实验动物与比较医学创新团队哈尔滨150069

抗原处理相关转运体(TAP)是一种异二聚体跨膜转运蛋白,具有高度多态性,主要功能是将胞质中加工产生的抗原肽转运到内质网腔,与主要组织相容复合体(MHC)Ⅰ类分子组装形成抗原肽-MHCI复合物后转运至细胞表面,被CD8^+T淋巴细胞识别,诱导机... 详细信息

抗原处理相关转运体(TAP)是一种异二聚体跨膜转运蛋白,具有高度多态性,主要功能是将胞质中加工产生的抗原肽转运到内质网腔,与主要组织相容复合体(MHC)Ⅰ类分子组装形成抗原肽-MHCI复合物后转运至细胞表面,被CD8^+T淋巴细胞识别,诱导机体产生细胞免疫应答。某些特定的人类疾病同TAP的多态性相关,包括多种肿瘤疾病、自身免疫疾病和传染性疾病等。本文就实验动物的TAP基因在与疾病相关性方面的比较医学研究进展做一综述。

关键词：抗原处理相关转运体(TAP) 多态性疾病相关性

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鸭瘟病毒在鸭胚脐带间充质干细胞上生物学特性的研究

鸭瘟病毒在鸭胚脐带间充质干细胞上生物学特性的研究

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第八届北京实验动物科学国际论坛

作者：徐丽晶陆涛峰王怡平陈洪岩赵丽丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

为了解鸭瘟病毒(DPV)在鸭胚脐带间充质干细胞上的适应性和增殖情况.本实验将DPV接种鸭胚脐带间充质干细胞,连续传代致第10代,通过CPE观察、病毒粒子电镜观察、核酸检测、间接免疫荧光检测等方法分析其生物学特性,并测定了连续10代的病... 详细信息

为了解鸭瘟病毒(DPV)在鸭胚脐带间充质干细胞上的适应性和增殖情况.本实验将DPV接种鸭胚脐带间充质干细胞,连续传代致第10代,通过CPE观察、病毒粒子电镜观察、核酸检测、间接免疫荧光检测等方法分析其生物学特性,并测定了连续10代的病毒滴度(TCID50).第一代DPV即在鸭胚脐带间充质干细胞上产生了明显的CPE,并且在连续传代的过程中CPE能够稳定出现.电镜观察显示,初步提纯的病毒悬浮液在电镜下可见到结构清晰的子代病毒.PCR检测结果显示,F1～F10代DPV均能扩增出大小为416bp的UL6基因片段.间接免疫荧光又进一步证实DPV的阳性血清能够对染毒病灶产生特异性荧光染色.而且连续测定10代的病毒滴度(TCID50)均不低于10-6.43.说明DPV能在鸭胚脐带间充质干细胞上稳定增殖.本研究有望为获得高纯度鸭瘟病毒及细胞源疫苗研究提供理论基础.

关键词：鸭瘟病毒鸭胚脐带间充质干细胞适应性病毒增殖

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鹅细小病毒VP3蛋白抗血清的制备及在鸭胚和鸭胚成纤维细胞中的增殖研究

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实验动物与比较医学 2017年第3期37卷 240-243页

作者：牛银杰刘柏含赵丽丽孙畅陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室实验动物与比较医学创新团队哈尔滨150069

目的制备鹅细小病毒(GPV)VP3衣壳蛋白的兔抗血清,在绍兴麻鸭鸭胚及其成纤维细胞中成功增殖GPV。方法根据GPVH分离株的VP3基因序列构建原核表达载体pET3a-VP3,诱导纯化VP3蛋白,皮下注射免疫新西兰白兔,收集和纯化VP3抗血清,经Western blo... 详细信息

目的制备鹅细小病毒(GPV)VP3衣壳蛋白的兔抗血清,在绍兴麻鸭鸭胚及其成纤维细胞中成功增殖GPV。方法根据GPVH分离株的VP3基因序列构建原核表达载体pET3a-VP3,诱导纯化VP3蛋白,皮下注射免疫新西兰白兔,收集和纯化VP3抗血清,经Western blotting检测VP3抗血清与VP3蛋白的反应性。GPVH株鹅胚尿囊液接种SPF绍兴麻鸭胚和其成纤维细胞,通过PCR反应和间接免疫荧光方法,检测GPV在鸭胚及其成纤维细胞中的增殖。结果成功制备了VP3的兔抗血清,同时GPV在鸭胚及其成纤维细胞中进行良好增殖。结论 VP3抗血清的制备及GPV在绍兴麻鸭鸭胚及成纤维细胞中的增殖实验为GPV分子生物学特性及致病机制的研究奠定基础。

关键词：鹅细小病毒(GPV) VP3基因 VP3抗血清增殖

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上海市一起蛋鸡心包积水-肝炎综合征的紧急流行病学调查

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中国动物检疫 2017年第9期34卷 7-10页

作者：杨德全朱九超齐新永鞠厚斌周锦萍刘春国王靖飞上海市动物疫病预防控制中心上海201103 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

2016年7月1日,上海市某蛋鸡场62日龄蛋鸡出现发病和死亡现象,多次用抗生素治疗无效。为详细了解鸡场发病情况,分析导致疫病发生的风险因素,以便及时提出行之有效的防控建议,通过询问、现场调查和实验室诊断等方式开展了紧急流行病学调查... 详细信息

2016年7月1日,上海市某蛋鸡场62日龄蛋鸡出现发病和死亡现象,多次用抗生素治疗无效。为详细了解鸡场发病情况,分析导致疫病发生的风险因素,以便及时提出行之有效的防控建议,通过询问、现场调查和实验室诊断等方式开展了紧急流行病学调查;采用描述性流行病学方法,对疫情特点、发病风险因素进行了分析。实验室诊断结果显示,Ⅰ群血清4型腺病毒核酸阳性。调查发现:发病的前一周,该地气温波动剧烈,造成鸡只应激;鸡场生物安全体系不健全,无针对车辆和人员的消毒措施。结合临床症状、病理剖检和实验室诊断结果,确诊该鸡场暴发了心包积水-肝炎综合征,是由Ⅰ群血清4型腺病毒引起的。通过注射特异性卵黄抗体及对症治疗,对可能引起此次暴发的风险因素进行控制,疫情得到了有效控制。

关键词：蛋鸡心包积水-肝炎综合征 .群血清4型腺病毒暴发调查风险因素

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编码基因完整的伪狂犬病毒细菌人工染色体的构建

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黑龙江畜牧兽医 2016年第12期 1-4,9,295页

作者：陈利红王靖飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

为了构建包含伪狂犬病毒(PRV)完整编码基因的细菌人工染色体(BAC),首先对PRV基因组进行了分析,确定了单一酶切位点AcclⅠ,用PCR方法扩增出上下游同源臂、EGFP表达盒并同BAC质粒一起克隆到p UC_(18)质粒,获得转移载体;将经限制性内切酶A... 详细信息

为了构建包含伪狂犬病毒(PRV)完整编码基因的细菌人工染色体(BAC),首先对PRV基因组进行了分析,确定了单一酶切位点AcclⅠ,用PCR方法扩增出上下游同源臂、EGFP表达盒并同BAC质粒一起克隆到p UC_(18)质粒,获得转移载体;将经限制性内切酶AcclⅠ处理过的病毒全基因组连同转移载体共同转染BHK21细胞,获得重组病毒;利用PCR检测、电镜观察及生长曲线测定对野毒与重组毒的基本特性进行了比较。结果表明:重组病毒可以稳定地表达绿色荧光,BAC在传代过程中能够稳定存在;重组病毒在电镜下的形态与野毒未见差异,其生长曲线也基本同野毒吻合。说明成功构建的编码基因完整的PRV细菌人工染色体可用于该病毒的结构生物学及致病机理研究。

关键词：伪狂犬病毒(PRV) 细菌人工染色体(BAC) 完整结构基因组重组病毒 EGFP

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高寒地区奶牛乳房炎凝固酶阴性致病葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

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中国预防兽医学报 2017年第10期39卷 848-851页

作者：郝俊玺董志民王秋东华欣祝瑶杨亲鄢明华刘思国张万江内蒙古农业大学内蒙古呼和浩特010018 天津市畜牧兽医研究所天津西青300381 天津市畜禽健康养殖技术工程中心天津西青300381 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150069

为调查高寒牧区引起奶牛乳房炎的凝固酶阴性致病葡萄球菌流行现状及耐药情况,本研究对呼伦贝尔地区3个规模化奶牛养殖场采用加州乳房炎测试法(CMT)进行高体细胞牛脂病检测,并采集330份牛奶样品,应用PCR方法、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型... 详细信息

为调查高寒牧区引起奶牛乳房炎的凝固酶阴性致病葡萄球菌流行现状及耐药情况,本研究对呼伦贝尔地区3个规模化奶牛养殖场采用加州乳房炎测试法(CMT)进行高体细胞牛脂病检测,并采集330份牛奶样品,应用PCR方法、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型和药敏试验等对样品中的葡萄球菌进行分离鉴定和耐药性分析。结果显示,该地区隐性乳房炎发病率达47.8%,共分离和鉴定出9种葡萄球菌60株(34.5%);60株葡萄球菌分为41个克隆谱型;60株葡萄球菌对青霉素和林可霉素的耐药率较高,分别为40.0%(24/60)和50.0%(30/60),表明这两种药是治疗乳房炎常用药物。本研究为高寒地区致病葡萄球菌引起的奶牛乳房炎临床合理用药及对病原菌的防控提供实验依据和指导。

关键词：葡萄球菌乳房炎药敏试验 PFGE分型

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