检索结果-内蒙古大学图书馆

黑龙江畜牧兽医 2017年第9期 67-70,291页

作者：孙芬芬高玉龙潘伟王笑梅徐州医科大学形态学实验教学中心江苏徐州221004 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病科技创新团队哈尔滨150001 徐州医科大学病原生物学与免疫学教研室/江苏省免疫与代谢重点实验室江苏徐州221004

为了用大肠杆菌原核表达系统表达鸡传染性贫血病毒(CIAV)VP2基因片段,并制备其兔抗血清,试验以CIAV M9905株基因组DNA为模板,通过PCR扩增VP2基因,与p ET28a(+)载体连接后转化DH5α获得阳性重组子,将其转化*** BL21(DE3)菌,IPTG诱导表达... 详细信息

为了用大肠杆菌原核表达系统表达鸡传染性贫血病毒(CIAV)VP2基因片段,并制备其兔抗血清,试验以CIAV M9905株基因组DNA为模板,通过PCR扩增VP2基因,与p ET28a(+)载体连接后转化DH5α获得阳性重组子,将其转化*** BL21(DE3)菌,IPTG诱导表达出His-VP2重组蛋白,经Ni-NTA树脂纯化后免疫新西兰白兔制备兔抗血清,采用IFA和Western-blot检测该血清的特异性,ELISA测定其效价。结果表明:重组His-VP2融合蛋白的分子质量约为36 ku,以包涵体形式存在。制备的兔抗VP2血清效价在1∶6 400以上,可特异性结合真核表达的VP2蛋白,表明其反应原性较好。说明试验成功表达VP2蛋白,并制备出兔抗血清,可用于该蛋白与病毒其他蛋白之间的相互作用的进一步研究。

关键词：鸡传染性贫血病毒(CIAV) VP2蛋白原核表达纯化兔抗血清

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埃博拉和马尔堡病毒囊膜糖蛋白嵌合型重组水泡性口炎病毒的构建及鉴定

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中国预防兽医学报 2016年第6期38卷 438-442页

作者：邵钰王金良刘任强张会雷王喜军葛金英温志远步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

埃博拉病毒(EBOV)和马尔堡病毒(MARV)属于丝状病毒科,能够导致人和动物发生致命的埃博拉出血热和马尔堡出血热,这两种病是重要的尚未传入我国的烈性人兽共患病。为研制安全有效的储备疫苗,本研究利用水泡性口炎病毒(VSV)反向遗传操作技... 详细信息

埃博拉病毒(EBOV)和马尔堡病毒(MARV)属于丝状病毒科,能够导致人和动物发生致命的埃博拉出血热和马尔堡出血热,这两种病是重要的尚未传入我国的烈性人兽共患病。为研制安全有效的储备疫苗,本研究利用水泡性口炎病毒(VSV)反向遗传操作技术,将VSV自身糖蛋白(GP)分别替换为EBOV或MARV的GP,构建了表达扎伊尔型EBOV、苏丹型EBOV及MARV GP的嵌合VSV重组病毒r VSV△G/ZEBOVGP、r VSV△G/SEBOVGP及r VSV△G/MARVGP。Western blot和间接免疫荧光试验表明这3种GP蛋白在重组病毒感染的细胞中均能够正确表达。电镜观察结果显示,3种重组病毒均与亲本病毒具有相同形态特征,表明这3种外源GP蛋白均能够嵌合在重组病毒粒子表面。本研究构建的这3种重组病毒为进一步的动物免疫试验并评价其免疫效果奠定了基础。

关键词：埃博拉病毒马尔堡病毒囊膜糖蛋白水泡性口炎病毒

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鹅细小病毒弱毒株的培育及其致弱前后全基因组中核酸变异的分析

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中国预防兽医学报 2016年第6期38卷 434-437页

作者：张青山李晨曦刘明邵周伍林张云中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为制备鹅细小病毒(GPV)弱毒株并研究其传代致弱前后的基因变化情况,本研究将GPV YG株在鹅胚成纤维细胞(GEF)和鸭胚成纤维细胞(DEF)中交替传代培养至72代次,并且对F0、F24、F48和F72代次病毒进行PCR全基因组扩增和测序。序列比对结果显示... 详细信息

为制备鹅细小病毒(GPV)弱毒株并研究其传代致弱前后的基因变化情况,本研究将GPV YG株在鹅胚成纤维细胞(GEF)和鸭胚成纤维细胞(DEF)中交替传代培养至72代次,并且对F0、F24、F48和F72代次病毒进行PCR全基因组扩增和测序。序列比对结果显示,F72代与F0代相比,5'和3'非编码区存在163个核苷酸差异,多数集中于反向终端重复序列(ITR)中,5'和3'两端均有6段碱基插入;编码区氨基酸序列比对结果显示,与F0代次病毒相比,F72代次病毒共有23个氨基酸位点突变,18个位于VP蛋白,5个位于非结构蛋白。病毒致病性试验表明,随着传代次数的增加,其毒力呈减弱趋势,并且F72代次病毒进一步致弱。本研究对GPV致弱后基因变化情况的分析及动物致病性试验结果为GPV毒力致弱机制的研究奠定了基础。

关键词：鹅细小病毒毒力致弱全基因组序列分析

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双向转录/表达载体的构建及其在马流感病毒反向遗传系统中的应用

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中国预防兽医学报 2016年第11期38卷 860-864页

作者：张翔郭巍王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为构建用于拯救流感病毒的双向转录／表达载体，本研究以pEF4／myc—HisB为骨架首次构建了含有人源的EF1-α和polⅠ双启动子的载体pEZ，并通过报告基因证明其具有双向转录／表达的功能。此外，基于pEZ载体分别构建含有马流感病毒（EIV）... 详细信息

为构建用于拯救流感病毒的双向转录／表达载体，本研究以pEF4／myc—HisB为骨架首次构建了含有人源的EF1-α和polⅠ双启动子的载体pEZ，并通过报告基因证明其具有双向转录／表达的功能。此外，基于pEZ载体分别构建含有马流感病毒（EIV）A／equine／Jilin／1／1989（H3N8）（JL89）株各个节段cDNA的8个重组质粒，且其中HA节段通过点突变技术引入分子遗传标记（HindⅢ和NdeⅠ酶切位点）。将8个重组质粒共转染293T细胞，拯救出病毒（rJL89）。病毒滴度测定显示，拯救的第一代病毒具有较高的病毒滴度（2．38×10^5TCID50/mL）；序列分析表明，rJL89与JL89的各个节段的序列几乎一致性（99．9％～100％）；酶切鉴定表明，rJL89稳定携带分子遗传标记（HindⅢ和NdeⅠ酶切位点）；血凝效价测定表明，rJL89与JL89有相同的血凝效价（2^R）；生长动力学研究显示，rJL89具有与JL89相同的生物学特性。以上结果证明，基于pEZ载体建立了EIVJL89株的8质粒反向遗传系统，该系统可以拯救出较高滴度的病毒。本研究将为进一步开展EIV分子生物学研究提供有效平台。

关键词：双向转录/表达载体 EF1-α启动子反向遗传学病毒拯救马流感病毒

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体外弓形虫感染小鼠巨噬细胞对其极化的影响

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中国预防兽医学报 2016年第6期38卷 475-478页

作者：祝瑶胡守萍张交儿张卓郑君贾洪林何希君中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为探索体外弓形虫感染小鼠巨噬细胞对其极化的影响,本研究采用M-CSF诱导分离的小鼠骨髓细胞分化为巨噬细胞,在体外以弓形虫感染骨髓来源的巨噬细胞,分别于感染后0 h、6 h、12 h、24 h、36 h、48 h收集细胞和细胞培养液,利用Griess法和Ar... 详细信息

为探索体外弓形虫感染小鼠巨噬细胞对其极化的影响,本研究采用M-CSF诱导分离的小鼠骨髓细胞分化为巨噬细胞,在体外以弓形虫感染骨髓来源的巨噬细胞,分别于感染后0 h、6 h、12 h、24 h、36 h、48 h收集细胞和细胞培养液,利用Griess法和Arginase活性试验对i NOS和Arginase-1的酶活性进行检测。通过荧光定量PCR和western blot方法分别从m RNA水平和蛋白水平测定巨噬细胞中i NOS和Arginase-1的表达量。结果显示,弓形虫感染巨噬细胞后细胞中的Arginase-1的m RNA和蛋白含量均显著上调表达,i NOS的m RNA虽有短暂小幅度上调,但蛋白的含量无明显变化。本研究表明弓形虫感染巨噬细胞后能够明显诱导静息状态的巨噬细胞朝向M2型的方向极化,从而改变巨噬细胞的表型和功能。本研究为进一步阐明弓形虫与机体免疫系统相互作用提供了实验依据。

关键词：弓形虫巨噬细胞极化

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稳定表达小反刍兽疫病毒N蛋白的CHO细胞系的建立及表达产物的抗原性鉴定

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中国预防兽医学报 2016年第4期38卷 262-265页

作者：李翠翠孙一瑞王子龙陈伟业步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为制备具有天然抗原活性的小反刍兽疫病毒(PPRV)核衣壳(N)蛋白,本研究建立了稳定表达PPRV N蛋白的真核细胞系。首先,将去除核定位信号(NLS)编码序列并且在其5'端引入组织纤维蛋白溶酶原抗原信号肽(tPA SP)编码序列的PPRV N基因克隆... 详细信息

为制备具有天然抗原活性的小反刍兽疫病毒(PPRV)核衣壳(N)蛋白,本研究建立了稳定表达PPRV N蛋白的真核细胞系。首先,将去除核定位信号(NLS)编码序列并且在其5'端引入组织纤维蛋白溶酶原抗原信号肽(tPA SP)编码序列的PPRV N基因克隆至真核表达质粒pCAGG-neo中,构建了重组质粒pCAGG-N△NLS/his。并将其转染于CHO细胞中,经G418压力培养并采用间接免疫荧光试验(IFA)及western blot试验筛选鉴定,获得稳定表达PPRV N蛋白的细胞系。通过IFA及western blot试验鉴定His标签表明该细胞系传代至22代仍能够稳定表达PPRV N蛋白。最后通过western blot等试验表明该蛋白能够与绵羊抗PPRV多克隆抗体反应,进一步表明该细胞系表达的PPRV N蛋白具有天然的N蛋白抗原性,为PPRV病原学诊断等相关研究奠定了基础。

关键词：小反刍兽疫核衣壳蛋白 CHO细胞细胞系

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牛病毒性腹泻病毒LJ36/14的分离与鉴定

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中国预防兽医学报 2016年第12期38卷 949-952页

作者：朱远茂杨立新马磊任建乐杨婷薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为确定牛呼吸道传染病的病原,本研究对2014年从黑龙江省发生牛呼吸道传染病的某肉牛场采集的40份鼻拭子进行了病毒分离,结果分离到一株牛病毒性腹泻病毒(BVDV),命名为LJ36/14株。病毒鉴定结果表明,分离株在单层MDBK细胞中不产生细胞病变... 详细信息

为确定牛呼吸道传染病的病原,本研究对2014年从黑龙江省发生牛呼吸道传染病的某肉牛场采集的40份鼻拭子进行了病毒分离,结果分离到一株牛病毒性腹泻病毒(BVDV),命名为LJ36/14株。病毒鉴定结果表明,分离株在单层MDBK细胞中不产生细胞病变;利用BVDV p80蛋白的单克隆抗体(MAb)进行的间接免疫荧光试验表明接种LJ36/14株的细胞结果显示阳性。分离株的TCID_(50)为10^(5.9)/0.1 mL。对该分离株的5'端非编码区(5'UTR)和Npro基因进化树分析表明该分离株为国内首次分离并鉴定的基因亚型,即BVDV1v亚型。本研究为了解BVDV地理分布和流行情况及BVDV疫苗的制发奠定了基础。

关键词：牛病毒性腹泻病毒间接免疫荧光反转录-聚合酶链式反应分子进化树分析

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用于构建双价禽流感DNA疫苗的双目的基因表达质粒的构建及鉴定

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中国预防兽医学报 2016年第4期38卷 257-261页

作者：黄冬陈普成刘兵唐猛柳金雄姜永萍陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为探索构建禽流感双价或多价DNA疫苗的可行性,本研究以本实验室前期研制的禽流感DNA疫苗p CAGGopti HA5为基础[其中含有禽流感病毒(AIV)A/Goose/Guang Dong/1/96(H5N1)的HA基因],将增强型绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因作为第二个目的基因... 详细信息

为探索构建禽流感双价或多价DNA疫苗的可行性,本研究以本实验室前期研制的禽流感DNA疫苗p CAGGopti HA5为基础[其中含有禽流感病毒(AIV)A/Goose/Guang Dong/1/96(H5N1)的HA基因],将增强型绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因作为第二个目的基因,利用双启动子启动、内部核糖体进入位点(IRES)介导以及通过蛋白Linker编码序列连接融合表达两个目的基因的形式,构建了双启动子重组表达质粒pH5-eGFP、IRES介导的重组表达质粒pHIE以及融合表达重组质粒pH6E。并采用脂质体介导将这3种重组质粒分别转染293T细胞,通过间接免疫荧光试验和western blot方法检测HA和eGFP这两种目的蛋白的瞬时表达情况。结果显示,这3种重组质粒均能够正确表达AIV的HA蛋白和eGFP。其中pH5-eGFP表达出两个独立的目的蛋白,而且互相不影响各自的表达和细胞定位;pH6E则以融合形式表达两种目的蛋白,由于HA蛋白具有膜定位信号,所以融合蛋白主要定位于细胞膜上。本研究结果表明,双启动子表达质粒和双目的蛋白融合表达质粒适合用于构建AIV以及其他相关病原的双价DNA疫苗。

关键词： DNA疫苗双价表达质粒 eGFP

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2015年国际马传染病疫情动态

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中国预防兽医学报 2016年第4期38卷 339-342页

作者：马建刘影王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

根据世界动物卫生组织（OIE）官方发布的疫情通报,主要是参考疫病信息周报（Weekly disease information）、及时通报和跟踪报道（Immediate notifications and follow-ups）检索项中的信息[1],并参考2014年及以前国际马传染病疫情动态... 详细信息

根据世界动物卫生组织（OIE）官方发布的疫情通报,主要是参考疫病信息周报（Weekly disease information）、及时通报和跟踪报道（Immediate notifications and follow-ups）检索项中的信息[1],并参考2014年及以前国际马传染病疫情动态,对收入OIE疫病目录中的马传染性疾病在2015年的疫情动态进行了全面回顾[2],并按病毒、细菌和寄生虫性传染病分类总结如下。

关键词：疫情动态马属动物东部马脑脊髓炎检索项寄生虫性马梨形虫病接触传染性流行病学调查子宫炎马流行性感冒

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TRIM蛋白参与天然免疫信号转导的研究进展

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中国预防兽医学报 2016年第2期38卷 166-170页

作者：王翠辉那雷王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

天然免疫系统是宿主抵抗病原微生物感染的第一道防线。天然免疫对病原微生物最直接的杀灭和清除作用是通过天然免疫分子和吞噬细胞实现的[1]。病原微生物所特有的能够被天然免疫细胞识别的靶分子称为病原相关分子模式（Pathogen associa... 详细信息

天然免疫系统是宿主抵抗病原微生物感染的第一道防线。天然免疫对病原微生物最直接的杀灭和清除作用是通过天然免疫分子和吞噬细胞实现的[1]。病原微生物所特有的能够被天然免疫细胞识别的靶分子称为病原相关分子模式（Pathogen associated molecular patterns,PAMPs）,宿主细胞通过模式识别受体（Pattern recognition receptors,

关键词： TRIM蛋白第一道防线病原微生物信号转导模式识别受体细胞识别 Pathogen 结构域免疫分子信号通路

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