检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2017年第4期30卷 417-423,428页

作者：邱泊宁王翀赵永坤胡星星王化磊曹增国盖微微崔健男闫飞虎杨松涛夏咸柱吉林大学动物医学学院吉林长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室吉林长春130122 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 吉林农业大学动物科技学院吉林长春130118 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

目的采用层析技术制备高纯度的马抗中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrom coronavirus,MERS-CoV)F(ab’)_2。方法以MERS-CoV病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)对马匹进行多次免疫所制备的高免血清为原料,采用亲和层析技术提取血清IgG,经胃蛋白酶酶切后,通过阴离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析分别对F(ab’)_2进行纯化;以MERS假病毒检测所制备的IgG与F(ab’)_2中和活性。结果凝胶过滤层析实现了F(ab’)_2的高纯度分离,最终制备的F(ab’)_2收率约70%,纯度为93%以上,具有良好的中和活性,其半数抑制浓度(IC_(50))为5.13μg/ml。结论制备了高纯度马抗MERS-CoV免疫球蛋白F(ab’)_2,为人用抗MERS-CoV免疫球蛋白F(ab’)_2生产工艺的建立奠定了基础。

关键词：中东呼吸综合征冠状病毒病毒样颗粒层析免疫球蛋白

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原核系统表达的鸡白细胞介素-10的鼠抗血清体内研究的初步分析

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实验动物科学 2017年第3期34卷 1-5页

作者：王丽廷王兴童杨柳彭蔚宇孟兴陈洪岩高文伟韩凌霞山西农业大学动物科技学院太谷030801 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

目的获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性。方法采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原... 详细信息

目的获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性。方法采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原核重组质粒pET-chIL-10;转化至大肠杆菌DH5α中IPTG诱导表达,切下含有重组蛋白的SDS-PAGE胶条,免疫制备鼠抗血清;分别与包含信号肽和去除信号肽的chIL-10真核表达细胞系CHO-euchIL-10F和CHO-euchIL-10M进行间接免疫荧光抗体试验(IFA)和蛋白免疫印迹试验(Western blot),验证有无反应性。结果成功构建chIL-10的原核表达载体pET-chIL-10,获得了高效价的鼠抗血清,能与表达chIL-10的真核细胞系反应。结论原核表达的chIL-10特异性鼠抗血清将能用于体内研究的检测。

关键词：鸡白介素-10 原核表达鼠抗血清体内实验

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虫媒病毒与牛羊繁殖障碍性疾病

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中国预防兽医学报 2016年第6期38卷 507-512页

作者：王芳齐瑛琳于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

牛羊传染性疾病,在我国习惯上划分为烈性传染病口蹄疫、羊的小反刍兽疫及羊痘、人畜共患病布鲁氏杆菌病和牛结核以及多系统性传染病,后者包括以呼吸道疾病综合症为特征的呼吸系统疾病、以腹泻为特征的消化系统疾病和以流产为特征的繁殖... 详细信息

牛羊传染性疾病,在我国习惯上划分为烈性传染病口蹄疫、羊的小反刍兽疫及羊痘、人畜共患病布鲁氏杆菌病和牛结核以及多系统性传染病,后者包括以呼吸道疾病综合症为特征的呼吸系统疾病、以腹泻为特征的消化系统疾病和以流产为特征的繁殖障碍性疾病。繁殖障碍性疾病（Reproductive disorders diseases）即感染生殖系统的疾病,

关键词：繁殖障碍性疾病虫媒病毒烈性传染病疾病综合症人畜共患病小反刍兽疫牛结核阿卡斑病布鲁氏杆菌病中山病

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禽流感病毒B类等位基因NS1蛋白的原核表达、纯化及热稳定性分析

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农业生物技术学报 2016年第10期24卷 1482-1490页

作者：罗维玉胡永浩张杰王金光朱鹏阳梁立滨周圆李呈军姜丽陈化兰甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室

A型流感病毒的非结构蛋白基因(non-structural protein,NS)在进化上可以分为等位基因A和B,两者之间同源性低于70%;NS1是流感病毒对抗宿主免疫系统的主要毒力因子之一。本研究在序列比对分析的基础上,表达、纯化了本实验室保存的4株B类... 详细信息

A型流感病毒的非结构蛋白基因(non-structural protein,NS)在进化上可以分为等位基因A和B,两者之间同源性低于70%;NS1是流感病毒对抗宿主免疫系统的主要毒力因子之一。本研究在序列比对分析的基础上,表达、纯化了本实验室保存的4株B类等位基因禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)(A/duck/Hunan/S1256/12(H3N8),A/environment/Hunan/S4484/11(H12N7),A/duck/Guangdong/07/00(H5N1)和A/duck/Shanghai/08/01(H5N1))的NS1蛋白,并对其进行稳定性分析。首先从感染的鸡胚尿囊液中提取病毒总RNA,利用特异引物Uni12反转录获得c DNA,以其为模板PCR扩增得到NS1全长片段,利用Bam HⅠ和NotⅠ双酶切将其定向插入p GEX6P-1载体,大肠杆菌(Escherichia coli)BL21菌株中诱导表达。该蛋白在纯化过程中稳定性差,沉淀析出。为此,进一步构建NS1蛋白截短突变体(1M-202A,R38A/K41A),并在BL21菌株中诱导表达,经过GE health Glutathione sepharose 4B亲和层析、Source Q阳离子交换柱层析和Hitrap Superdex75分子筛凝胶层析逐步纯化,然后进行SDS-PAGE凝胶纯度分析,并测定OD320,进行蛋白热稳定性分析。结果表明,经进化分析,4株病毒均属于禽流感病毒B类等位基因群,4株病毒NS1蛋白经过全长野生型、全长突变体及截短突变体的逐步优化表达,截短突变体NS1蛋白表达质量相对较高,最终经过逐步纯化获得纯度达到90%以上的蛋白样品,且4株病毒中A/duck/Hunan/S1256/12(H3N8)NS1蛋白的稳定性最好。研究结果为进一步研究其分子结构与功能提供了基础资料。

关键词：禽流感病毒 NS1蛋白原核表达纯化热稳定性

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驴感染马流感病毒的现状与危害

驴感染马流感病毒的现状与危害

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第三届(2017)中国驴业发展大会暨第七届驴产业发展高峰论坛

作者：孙金辉郭巍胡哲王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室马传染病与慢病毒研究团队吉林农业大学动物科技学院

2016年以来,随着养驴业的蓬勃发展,各地养殖户不断的引种,导致驴群中各种疾病的发生,其中最常见的为驴感染马流感病毒。马流感(Equine influenza),是由正粘病毒科(Orthom yxoviridae)流感病毒属(Influenza virus)A型流感病毒引起马属动... 详细信息

2016年以来,随着养驴业的蓬勃发展,各地养殖户不断的引种,导致驴群中各种疾病的发生,其中最常见的为驴感染马流感病毒。马流感(Equine influenza),是由正粘病毒科(Orthom yxoviridae)流感病毒属(Influenza virus)A型流感病毒引起马属动物的一种急性暴发式流行的传染病。马流感传播迅速,在马群中发病率高,但病死率低,世界动物卫生组织(Office International Des Epizooties,OIE)将其列为法定报告传染病。到目前为止,马流感仅有

关键词：马流感病毒亚单位疫苗马属动物

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SPF鸡微生物质量控制标准与监测技术

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实验动物科学 2017年第1期34卷 66-70页

作者：林欢韩凌霞赵丽丽陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学团队/国家禽类实验动物种子中心/农业部实验动物质量监督检验测试中心哈尔滨150001

SPF鸡及鸡胚被大量用于人和兽用生物制品的生产基质和质量检定材料,在农业科学、医学科学和生物制品等领域的研究、生产、检定工作中有非常重要的作用。本文总结了SPF鸡及鸡胚的微生物质量控制标准、质量监测技术,以及我国SPF鸡培育和... 详细信息

SPF鸡及鸡胚被大量用于人和兽用生物制品的生产基质和质量检定材料,在农业科学、医学科学和生物制品等领域的研究、生产、检定工作中有非常重要的作用。本文总结了SPF鸡及鸡胚的微生物质量控制标准、质量监测技术,以及我国SPF鸡培育和产业发展概况。

关键词： SPF鸡微生物质量标准监测技术

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猪FcγRⅢ双抗体夹心ELISA方法的建立及其在PRRSV感染猪中的初步应用

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中国兽医杂志 2016年第5期52卷 3-5,9页

作者：谷伟红郭龙军牛军伟田志军冯力王玉娥中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

利用自行制备的FcγRⅢ多克隆抗体作为捕获抗体,鼠源抗FcγRⅢ特异性单克隆抗体作为示踪抗体,辣根过氧化物酶标记羊抗鼠Ig G作为检测系统,建立了检测可溶性FcγRⅢ(s FcγRⅢ)水平的双抗体夹心ELISA方法。利用建立的该ELISA方法对感染... 详细信息

利用自行制备的FcγRⅢ多克隆抗体作为捕获抗体,鼠源抗FcγRⅢ特异性单克隆抗体作为示踪抗体,辣根过氧化物酶标记羊抗鼠Ig G作为检测系统,建立了检测可溶性FcγRⅢ(s FcγRⅢ)水平的双抗体夹心ELISA方法。利用建立的该ELISA方法对感染猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)血清进行检测,结果显示,猪感染PRRSV后,血清中s FcγRⅢ的水平明显增高,因此s FcγRⅢ的水平可能作为PRRSV感染的预警标志。该研究结果为进一步阐释FcγRⅢ在PRRSV感染中发挥的作用奠定了基础。

关键词： FcγRⅢ 多克隆抗体夹心ELISA 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒

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鸭肠炎病毒感染DEF细胞诱导干扰素γ上调表达

鸭肠炎病毒感染DEF细胞诱导干扰素γ上调表达

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2017年第十五届中国北方实验动物科技年会

作者：李思琪尹海畅陈洪岩赵丽丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室牡丹江师范学院生命科学与技术学院

鸭肠炎病毒(DEV)传播速度快,发病率和死亡率均较高,严重的影响了国内水禽业的发展。干扰素(IFN)是一种具有广谱抗病毒、抗肿瘤、抑制细胞增长和免疫调节作用的细胞因子。且有关感染DEV的细胞与干扰素γ的关系鲜少见报道。本研究中,分别... 详细信息

鸭肠炎病毒(DEV)传播速度快,发病率和死亡率均较高,严重的影响了国内水禽业的发展。干扰素(IFN)是一种具有广谱抗病毒、抗肿瘤、抑制细胞增长和免疫调节作用的细胞因子。且有关感染DEV的细胞与干扰素γ的关系鲜少见报道。本研究中,分别提取感染DEV后24h、36h、48h、60h的DEF细胞总RNA,进行反转录后,采用荧光定量PCR的方法,检测鸭IFNγ及干扰素刺激因子的表达量变化情况。结果显示:鸭IFNγ及干扰素刺激因子Mx、DDX50、OASI在mRNA水平上调。实验表明,DEV感染DEF细胞能够诱导鸭IFNγ产生及其相关信号通路的激活。本研究为进一步探索DEV感染DEF细胞激活Ⅱ型干扰素的机制提供理论基础,进而为水禽病的防控、净化提供思路。

关键词：鸭肠炎病毒鸭胚成纤维细胞干扰素干扰素刺激因子上调表达

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应用PCR方法快速鉴定SPF金定鸭性别

应用PCR方法快速鉴定SPF金定鸭性别

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2017年第十五届中国北方实验动物科技年会

作者：徐丽晶孙畅陆涛峰陈洪岩赵丽丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室东北农业大学生命科学学院

目的利用PCR方法鉴定SPF金定鸭的性别。方法根据已有的报道合成一对禽类性染色体上的染色质解螺旋蛋白DNA结合蛋白1(CHD1)基因的通用引物gCHD。采集培育中的85只SPF金定鸭血液样品,提取血液基因组DNA,进行PCR扩增。通过分析PCR扩增产物... 详细信息

目的利用PCR方法鉴定SPF金定鸭的性别。方法根据已有的报道合成一对禽类性染色体上的染色质解螺旋蛋白DNA结合蛋白1(CHD1)基因的通用引物gCHD。采集培育中的85只SPF金定鸭血液样品,提取血液基因组DNA,进行PCR扩增。通过分析PCR扩增产物凝胶电泳后的条带数判定禽类性别。结果 PCR扩增产物经琼脂糖电泳分析后,雌性鸭样品扩增出CHD1-Z和CHD1-W,而雄性鸭样品只扩增出CHD1-Z。结论这种PCR方法可作为SPF动物育种过程中有效的鉴定方法。

关键词： SPF金定鸭性别鉴定 PCR

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紧密连接蛋白occludin和claudin-1在猪机体不同组织的分布研究

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中国兽医杂志 2016年第8期52卷 21-24页

作者：骆晓蕾郭龙军谷伟红冯力王玉娥中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

紧密连接蛋白有维持上皮屏障完整性的功能,主要的组成蛋白有occludin和claudin-1。为研究猪体内紧密连接蛋白occludin和claudin-1的表达分布情况,首先用Gen Bank中发表的猪源occludin和claudin-1的序列,设计并合成了针对occludin和claud... 详细信息

紧密连接蛋白有维持上皮屏障完整性的功能,主要的组成蛋白有occludin和claudin-1。为研究猪体内紧密连接蛋白occludin和claudin-1的表达分布情况,首先用Gen Bank中发表的猪源occludin和claudin-1的序列,设计并合成了针对occludin和claudin-1的特异性引物,然后从无特定病原(SPF)猪体不同组织中提取总RNA,反转录成c DNA,用半定量方法测定SPF猪不同组织紧密连接蛋白的m RNA水平。结果发现,occludin和claudin-1在不同组织的分布存在差异。进一步测序发现,occludin序列相对保守,而claudin-1则变异较大。

关键词：紧密连接蛋白 claudin-1 occludin

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