检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2022年第5期44卷 560-565页

作者：高艳飞王尚辉王海伟孙明霞潘力肖培宇蔡雪辉涂亚斌中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

猪圆环病毒病(Porcine circovirus disease,PCVD)在全球范围内广泛流行,各生长阶段的猪均易发该病,因其致病性高、传染性强、能够引起严重的免疫抑制等特点,严重阻滞了全球养猪业的健康发展。猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,P... 详细信息

猪圆环病毒病(Porcine circovirus disease,PCVD)在全球范围内广泛流行,各生长阶段的猪均易发该病,因其致病性高、传染性强、能够引起严重的免疫抑制等特点,严重阻滞了全球养猪业的健康发展。猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是导致PCVD的主要病原,其对环境的耐受力强,对氯仿不敏感,在56℃或70℃均能够存活一段时间。

关键词：猪圆环病毒病猪圆环病毒2型基因工程疫苗免疫抑制养猪业主要病原 PCV2 耐受力

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一株基因V型禽呼肠孤病毒的分离鉴定与致病性研究

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中国兽医科学 2022年第5期52卷 603-609页

作者：刘芮罗丹李凯刘长军祁小乐张艳萍崔红玉潘青高玉龙高立中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了了解禽呼肠孤病毒(ARV)在我国的流行情况及其生物学特性和致病特点,通过细胞传代、RT-PCR检测及序列分析,从山东省送检的病鸡关节组织中成功分离到1株病毒,将其命名为ARV-SD20-3203,样品中未检测到其他常见外源禽类病毒的核酸。禽... 详细信息

为了了解禽呼肠孤病毒(ARV)在我国的流行情况及其生物学特性和致病特点,通过细胞传代、RT-PCR检测及序列分析,从山东省送检的病鸡关节组织中成功分离到1株病毒,将其命名为ARV-SD20-3203,样品中未检测到其他常见外源禽类病毒的核酸。禽呼肠孤病毒主要保护性抗原σC基因的遗传进化分析结果表明,ARV-SD20-3203属于ARV基因V型,与基因Ⅴ型参考毒株918和1017-1的遗传距离较近,其氨基酸序列同源性分别为93.0%和92.4%,而与其他基因型毒株的遗传距离较远。ARV-SD20-3203毒株在LMH细胞上增殖良好;对鸡胚和雏鸡均具有明显的致病性,接种鸡胚可引起100%死亡,接种1日龄SPF雏鸡可引起75%死亡,其中SPF雏鸡接种病毒后第5天为死亡高峰期,第8天之后,不再出现SPF雏鸡死亡。该研究分离到1株基因V型ARV毒株,这为了解我国ARV变异株的流行及遗传进化特征提供了重要的材料。

关键词：禽呼肠孤病毒变异株遗传进化致病性

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荧光标记新城疫病毒在检测病毒入侵过程中的应用

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中国兽医科学 2022年第7期52卷 853-860页

作者：刘添仪孙军峰师乾凯赵冉邸涛张春玮陈林娜张智颖韩宗玺刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

本研究利用荧光染料标记的新城疫病毒(NDV)检测病毒的吸附、融合和进入,旨在为研究NDV入侵细胞的机制提供一种工具。首先通过DiOC标记NDV(DiOC-NDV)检测病毒的吸附和进入,随后利用R18标记NDV(R18-NDV)检测病毒的融合,最后利用R18和DiOC... 详细信息

本研究利用荧光染料标记的新城疫病毒(NDV)检测病毒的吸附、融合和进入,旨在为研究NDV入侵细胞的机制提供一种工具。首先通过DiOC标记NDV(DiOC-NDV)检测病毒的吸附和进入,随后利用R18标记NDV(R18-NDV)检测病毒的融合,最后利用R18和DiOC同时标记NDV(DiOC/R18-NDV)进一步检测NDV在内体中的融合。病毒吸附的检测结果显示,代表NDV的绿色荧光定位于细胞表面。病毒进入的检测结果显示,60~120 min不能被台盼蓝淬灭以及被台盼蓝淬灭的绿色荧光强度均无明显变化(P>0.05);病毒融合的检测结果显示,30~120 min时均能在细胞表面和细胞质中观察到红色荧光,且60~120 min时细胞的总荧光强度无显著差异(P>0.05)。以上结果表明,NDV吸附细胞后,在细胞表面与内体中发生膜融合及进入,且该过程在60 min内完成。综上所述,荧光标记的NDV能直观、可靠地展现病毒的吸附、进入和融合过程,荧光标记NDV可作为一种研究NDV入侵细胞机制的工具。

关键词：新城疫病毒荧光标记 DiOC R18

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鸡腺病毒血清4型和11型Penton蛋白的表达及交叉反应性评价

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中国兽医科学 2022年第6期52卷 704-711页

作者：秦亚平刘亮亮刘胜旺李慧昕中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了了解不同血清型鸡腺病毒(fowladenovirus,FAdV)表面蛋白的交叉反应性,本研究对FAdV-4(HN/151025株)和FAdV-11(LN/1507株)型病毒的衣壳蛋白之一的Penton蛋白分别进行原核表达以及真核表达,并分别与FAdV-11和FAdV-4型血清进行交叉反应... 详细信息

为了了解不同血清型鸡腺病毒(fowladenovirus,FAdV)表面蛋白的交叉反应性,本研究对FAdV-4(HN/151025株)和FAdV-11(LN/1507株)型病毒的衣壳蛋白之一的Penton蛋白分别进行原核表达以及真核表达,并分别与FAdV-11和FAdV-4型血清进行交叉反应,评价FAdV-4与FAdV-11型毒株Penton蛋白的交叉反应性。Western-blot检测结果显示,FAdV-4型的Penton蛋白与同型血清有良好的反应性,但与FAdV-11型的血清无交叉反应性;FAdV-11型的Penton蛋白与同型血清有良好的反应性,同时与FAdV-4型的血清有微弱的交叉反应。上述结果表明,FAdV-4型血清可同时识别FAdV-4型和FAdV-11型病毒的Penton蛋白。对2株病毒Penton蛋白的氨基酸序列进行比对,结果显示,两种血清型毒株的Penton蛋白的N端差异较大,这个差异区可能与蛋白的主要抗原表位区相关,进而影响血清学交叉反应性及交叉反应的强度,这可能是造成两种血清型毒株Penton蛋白交叉反应差的原因之一。

关键词：鸡腺病毒血清4型血清11型 Penton蛋白交叉反应

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猪繁殖与呼吸综合征病毒RFLP 1-4-4 L1C株的分离鉴定及其遗传演化分析

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中国预防兽医学报 2022年第6期44卷 583-590,597页

作者：田笑笑黄昕怡夏大松王海伟田志军蔡雪辉安同庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)RFLP 1-4-4 lineage1C(L1C)变异株自2020年在美国出现以来,给养猪业造成了严重的经济损失。我国目前尚无RFLP 1-4-4 L1C变异株的报道。为了解我国PRRSV RFLP 1-4-4株的流行情况,本研究对我国15个省219份疑... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)RFLP 1-4-4 lineage1C(L1C)变异株自2020年在美国出现以来,给养猪业造成了严重的经济损失。我国目前尚无RFLP 1-4-4 L1C变异株的报道。为了解我国PRRSV RFLP 1-4-4株的流行情况,本研究对我国15个省219份疑似PRRSV感染的临床样品进行了PRRSV ORF5基因的RT-PCR检测与测序。结果显示,41份(18.72%)为PRRSV阳性样品,其中有1份来自黑龙江省样品中的PRRSV ORF5基因为1-4-4模式。将该样品经PAM分离病毒并经PCR和间接免疫荧光试验鉴定,结果显示分离到一株RFLP模式为1-4-4的PRRSV,命名为HLJ-80。采用PCR对分离病毒的全基因组分段扩增并测序拼接后显示其基因组全长15013 nt,利用MegAlign软件分析分离病毒与PRRSV 6株代表株的全基因组序列、ORF基因序列的同源性及其NSP2的氨基酸序列;利用MEGA6.0软件分析分离株ORF5基因序列并绘制其系统发生树(ML法);采用RDP4分析分离株全基因组序列的重组事件。全基因组序列的同源性分析结果显示,HLJ-80株与NADC30株的同源性最高,为93.3%,与其他代表株的同源性均低于90%。除ORF2基因外,其余基因序列均与NADC30株同源性最高(90.6%~99.3%)。ORF5基因的遗传进化树显示,HLJ-80株属于RFLP 1-4-4 L1C株。NSP2氨基酸序列分析结果显示,与VR-2332株相比,HLJ-80株NSP2存在131个氨基酸(111+1+19)的不连续缺失,缺失位置与NADC30株一致。上述结果表明,HLJ-80株与NADC30株的亲缘关系较近。重组分析结果显示,HLJ-80株有可能与PRRSV 2014-81株、SD53-1603株高度同源的病毒株重组而来。将本研究中的41株分离株ORF5基因序列,及GenBank中1996年~2021年我国3125条共计3166条北美洲型PRRSV ORF5基因序列,按照PRRSV RFLP 1-4-4模式和L1C分支谱系分类,并分析我国RFLP 1-4-4 L1C株在时间和地理上的分布;将2016年~2021年GenBank中7个国家全部北美洲型PRRSV ORF5基因序列(共计1918条),按照PRRSV RFLP分类,分析2016年以来我国与不同国家之间PRRSV RFLP的模式特点。结果显示,我国PRRSV RFLP 1-4-4自2003年首次出现,至今已累计达260株(8.2%),其中217株属于L1C分支(83.46%),其余为L8和L1A分支。PRRSV的RFLP分类结果显示,1918条PRRSV ORF5基因共有36种RFLP模式。其中RFLP 1-7-4模式的数量最多占25.96%,RFLP 1-4-4分布最广泛,除越南和印度外,该模式在其余5个国家均有分布,其在我国的数量最多。本研究为了解我国PRRSV RFLP 1-4-4株的流行情况提供了重要参考数据。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒限制性酶切片段长度多态性分支谱系 RFLP 1-4-4 L1C

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猪氨基肽酶N病毒结合受体核心区对TGEV在ST细胞中复制影响的研究

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中国预防兽医学报 2023年第1期45卷 1-8页

作者：史鑫琪季朝阳陈晓彤张子博张鑫郭慧娟田璐王洪峰陈洪岩王靖飞冯力夏长友孟庆文中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学创新团队/国家禽类实验动物资源库黑龙江哈尔滨150069 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪消化道传染病创新团队黑龙江哈尔滨150069 哈尔滨维科生物技术开发公司黑龙江哈尔滨150069 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原与病理形态学创新团队黑龙江哈尔滨150069

为研究与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)结合的猪氨基肽酶N(pAPN)受体核心区对TGEV复制以及细胞功能的影响,本研究检索并分析pAPN与TGEV的结合位点,结果显示,敲除pAPN aa668~aa963对其酶活性无影响。因此,利用CRISPR/Cas9技术构建pAPN与TGEV... 详细信息

为研究与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)结合的猪氨基肽酶N(pAPN)受体核心区对TGEV复制以及细胞功能的影响,本研究检索并分析pAPN与TGEV的结合位点,结果显示,敲除pAPN aa668~aa963对其酶活性无影响。因此,利用CRISPR/Cas9技术构建pAPN与TGEV结合位点敲除细胞系,经PCR和western blot鉴定结果显示,正确构建一株敲除pAPN aa668~aa963的ST细胞系,即敲除pAPN 15-21外显子,命名为KO-ST-15。采用CCK-8和细胞划痕方法检测KO-ST-15细胞的增殖和细胞迁移活性,结果显示,敲除pAPN 15-21外显子对ST细胞增殖和迁移活性均无显著影响。利用RT-qPCR和IFA检测KO-ST-15感染TGEV后病毒复制拷贝数和N蛋白的表达,结果显示,敲除pAPN 15-21外显子可极显著抑制TGEV在ST细胞系中的复制(P<0.001)。利用RT-qPCR检测KO-ST-15感染TGEV后炎症相关基因转录水平变化,结果显示,TGEV感染后KO-ST-15中的IL-6、IL-8和NLRP3(NOD-like receptor protein 3)mRNA转录水平无显著变化,但RIG-I和MDA5的转录水平显著上调(P<0.05)。上述结果首次表明,敲除pAPN15-21外显子能够极显著抑制TGEV在ST细胞中的复制,但细胞KO-ST-15的正常生理功能无变化,TGEV不能进入敲除pAPN 15-21外显子的细胞中引起炎症反应,该结果为进一步培育抗病育种猪提供参考依据和候选方案。

关键词：猪氨基肽酶N 猪传染性胃肠炎病毒 CRISPR/Cas9 ST细胞

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非洲猪瘟病毒p54蛋白原核表达及多克隆抗体的制备

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中国动物传染病学报 2023年第1期31卷 166-173页

作者：赵改红张涛清向志达张元峰李江南翁长江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室基础免疫创新团队哈尔滨150069 长江大学动物科学学院荆州434025

本研究以ASFV Pig/HLJ/18分离株基因组DNA为模板扩增tE183L基因片段,构建重组原核表达质粒pET-21a-tE183L。将其转化BL21(DE3)感受态细胞后经IPTG诱导表达可溶性p54蛋白,并将采用镍亲和层析柱和分子筛纯化的p54与弗氏佐剂等比混合后免... 详细信息

本研究以ASFV Pig/HLJ/18分离株基因组DNA为模板扩增tE183L基因片段,构建重组原核表达质粒pET-21a-tE183L。将其转化BL21(DE3)感受态细胞后经IPTG诱导表达可溶性p54蛋白,并将采用镍亲和层析柱和分子筛纯化的p54与弗氏佐剂等比混合后免疫新西兰大白兔,采集血清经Protein G亲和层析纯化得到兔抗p54多克隆抗体。研究结果表明,构建的原核表达质粒p ET-21a-t E183L可成功表达p54蛋白且纯度较高。Western blot、间接免疫荧光和免疫沉淀试验结果显示,纯化的抗p54多克隆抗体能特异性识别HEK293T细胞中瞬时表达的Flag-ASFV p54蛋白和ASFV感染肺泡巨噬细胞(PAMs)后表达的ASFV p54蛋白。本研究成功表达和纯化p54可溶性蛋白;制备的多克隆抗体有良好的特异性,这为深入探讨ASFV p54蛋白的生物学功能奠定了基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 p54蛋白多克隆抗体

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鸭肠炎病毒UL41基因缺失株的构建及其体外增殖能力分析

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畜牧兽医学报 2022年第8期53卷 2689-2696页

作者：杨伏春刘芮李晓涵高立刘长军祁小乐崔红玉王笑梅高玉龙李凯中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽免疫抑制病创新团队哈尔滨150069

旨在构建鸭肠炎病毒(DEV)UL41基因缺失毒株,并对其生物学特性进行分析,本研究以克隆有DEV UL41基因的重组黏粒D1为骨架,利用Red/ET重组技术构建缺失UL41基因的重组黏粒D1 dUL41;将UL41基因缺失重组黏粒D1 dUL41与其他4个克隆有DEV基因... 详细信息

旨在构建鸭肠炎病毒(DEV)UL41基因缺失毒株,并对其生物学特性进行分析,本研究以克隆有DEV UL41基因的重组黏粒D1为骨架,利用Red/ET重组技术构建缺失UL41基因的重组黏粒D1 dUL41;将UL41基因缺失重组黏粒D1 dUL41与其他4个克隆有DEV基因组片段的亲本黏粒共转染鸭胚成纤维细胞(DEF),拯救获得UL41基因缺失毒株rDEV-SD19/dUL41。将该基因缺失病毒感染DEF后,提取病毒基因组进行PCR鉴定及测序,并利用间接免疫荧光试验检测该病毒感染细胞中UL41基因表达情况;绘制拯救的基因缺失病毒的生长曲线,分析其体外复制特性。PCR及测序结果显示,本研究成功构建了缺失UL41基因的重组黏粒D1 dUL41。将该基因缺失黏粒与其他含有DEV基因组的亲本黏粒共转染DEF后能够产生典型的蚀斑病变。PCR及测序结果显示,UL41基因成功从DEV基因组中缺失;间接免疫荧光试验发现,基因缺失病毒rDEV-SD19/dUL41感染DEF后,未见UL41蛋白表达。综上表明,本研究成功构建了DEV UL41基因缺失病毒。体外生长曲线显示,rDEV-SD19/dUL41在DEF中的复制能力明显低于亲本病毒,提示UL41蛋白在DEV复制中发挥重要作用。UL41基因缺失DEV的构建为进一步研究UL41基因在DEV感染和致病中的作用机制奠定了基础。

关键词：鸭肠炎病毒 UL41基因基因缺失复制能力

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NLRP3炎症小体和NF-κB信号通路参与化脓隐秘杆菌感染小鼠肝脏炎症反应的研究

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中国预防兽医学报 2023年第10期45卷 1054-1060,1079页

作者：李思琪秦嫘孟凡丹杨勇博王淑杰蔡雪辉东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为探究化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes)在肝脏中诱导炎症小体活化的机制,本研究以2×106 cfu/只腹腔注射化脓隐秘杆菌的小鼠为感染模型,分别于感染后不同时间采集小鼠肝脏组织,分别提取肝细胞RNA和蛋白质,将RNA反转录成cDNA作... 详细信息

为探究化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes)在肝脏中诱导炎症小体活化的机制,本研究以2×106 cfu/只腹腔注射化脓隐秘杆菌的小鼠为感染模型,分别于感染后不同时间采集小鼠肝脏组织,分别提取肝细胞RNA和蛋白质,将RNA反转录成cDNA作为模板,利用荧光定量PCR检测小鼠肝脏组织中NLRP-3、ASC、IL-18、IL-1β和TNF-αm RNA的转录水平,同时通过western blot检测小鼠肝细胞中炎症小体信号通路蛋白NLRP-3、AIM2、ASC、Caspase-1、NLRP-1和细胞焦亡信号通路相关蛋白GSDMD-C、IL-18和IL-1β的表达。结果显示,与对照组相比,感染化脓隐秘杆菌后1 d、2 d和7 d的小鼠肝组织内炎症小体信号通路蛋白基因及促炎细胞因子基因的转录水平均显著升高(P<0.05);western blot检测感染后1 d、2 d、4 d和7 d的小鼠肝细胞蛋白,结果显示,与对照组相比,小鼠肝细胞内除NLRP-1的表达无差异外,其他炎症小体信号通路相关蛋白及促炎细胞因子表达量均显著或极显著升高(P<0.05,P<0.01)。上述结果证实化脓隐秘杆菌可诱导肝细胞中NLRP-3/ASC和AIM2/ASC炎症小体复合物的激活,继而促进Caspase-1的成熟与GSDMD的切割,引起肝细胞焦亡,导致大量促炎细胞因子释放。本研究进一步通过western blot检测化脓隐秘杆菌感染后1 d、2 d、4 d和7 d的小鼠肝细胞中NF-κB信号通路中p65和磷酸化p65蛋白(p-p65)的表达水平,结果显示,与对照组相比,p-p65蛋白的表达量显著升高(P<0.05),表明NF-κB信号通路被激活。同时,本研究也对化脓隐秘杆菌感染小鼠后1 d、2 d、4 d和7 d采集的肝脏组织进行病理学观察,结果显示,与对照组织相比,肝细胞均发生变性及坏死。本研究证实在化脓隐秘杆菌感染的小鼠肝细胞内炎症小体和NF-κB信号通路参与了感染期间的炎症反应,为化脓隐秘杆菌引起肝脏炎症反应发生的机制研究提供参考依据。

关键词：化脓隐秘杆菌炎症小体细胞焦亡炎症反应

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非洲猪瘟病毒E184L蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备

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中国动物传染病学报 2023年

作者：李雪雯李婷婷李长尧焦爽郑君荣俊翁长江长江大学生命科学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室基础免疫创新团队黑龙江省兽医免疫学重点实验室

本研究旨在表达非洲猪瘟病毒（ASFV）E184L蛋白（pE184L），并制备单克隆抗体（mAb），为其功能研究提供物质基础。首先，构建出了原核表达质粒pET21a-E184L并表达重组pE184L-His蛋白，使用镍亲和层析的方法对pE184L进行纯化，用纯化后... 详细信息

本研究旨在表达非洲猪瘟病毒（ASFV）E184L蛋白（pE184L），并制备单克隆抗体（mAb），为其功能研究提供物质基础。首先，构建出了原核表达质粒pET21a-E184L并表达重组pE184L-His蛋白，使用镍亲和层析的方法对pE184L进行纯化，用纯化后的蛋白对小鼠进行免疫，随后将阳性小鼠进行迫杀并取其脾细胞与SP2/0细胞进行融合，经间接ELISA方法筛选出能稳定分泌pE184L mAb的杂交瘤细胞。Western blot结果该抗体能够特异性识别过表达的外源pE184蛋白以及ASFV感染猪肺泡巨噬细胞（PAMs）表达的内源pE184蛋白。IFA结果表明该株mAb能特异性标记过表达的pE184L蛋白及在ASFV感染的PAMs细胞中表达的内源pE184L蛋白。Co-IP试验结果表明该株mAb能特异性结合过表达的pE184L蛋白及在ASFV感染的PAMs细胞中表达的内源pE184L蛋白。本研究成功表达并纯化了可溶性E184L蛋白，并制备了一株pE184L mAb，该mAb与pE184L蛋白具有良好的反应性，这为ASFV pE184L的生物学功能研究奠定了基础。

关键词： ASFV E184L 原核表达单克隆抗体

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