检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业科学 2015年第15期48卷 3050-3055页

作者：王云鹤包红梅孙佳善李雁冰徐晓龙王子龙施建忠曾显营王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室/国家禽流感参考实验室河北农业大学动物科技学院

【目的】2013年3月,中国国家卫生和计划生育委员会宣布在上海、安徽地区发现了人感染H7N9亚型流感病毒事件,由于这种新型重组H7N9流感病毒未曾有过感染人或者动物的报道,因此出现了一系列亟待解决的问题,引起了全世界范围的广泛关注。根... 详细信息

【目的】2013年3月,中国国家卫生和计划生育委员会宣布在上海、安徽地区发现了人感染H7N9亚型流感病毒事件,由于这种新型重组H7N9流感病毒未曾有过感染人或者动物的报道,因此出现了一系列亟待解决的问题,引起了全世界范围的广泛关注。根据H7N9亚型禽流感病毒HA和NA核苷酸序列,设计并合成靶基因为HA和NA的2对引物,建立快速检测H7N9亚型禽流感病毒的一步法RT-PCR检测方法。【方法】根据测序结果,用DNAStar生物软件进行同源性分析比较,选出H7和N9基因中高度保守且特异的核苷酸区域,用oligo6.0软件设计针对H7和N9基因的引物。用Trizol LS提取RNA,采用一步法Access RT-PCR扩增反应液,建立了一步法检测H7N9亚型禽流感病毒RT-PCR方法。以H7N9亚型流感病毒为阳性对照,其他亚型流感病毒以及新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊等其他禽病病原作为阴性对照,按所建立的反应体系和反应程序进行RT-PCR反应,验证所建立方法的特异性。对病毒含量为106.5 EID50·m L-1的H7N9亚型禽流感病毒尿囊液依次进行10倍倍比稀释,提取RNA用RT-PCR方法检测,评价其敏感性。另外,采取双盲试验用荧光定量RT-PCR对该方法进行了比对验证。【结果】用H7亚型特异性引物检测H1—H15亚型禽流感病毒和鸡新城疫病毒等其他禽病病原,除H7亚型流感病毒外,其他样品均为阴性;用N9亚型特异性引物检测N1—N9亚型禽流感病毒和其他禽病病原,仅当前流行的H7N9亚型AIV样品有特异性目的条带,与其他N1—N9亚型禽流感病毒和鸡新城疫病毒等其他禽病病原均无交叉反应。通过对H7N9亚型禽流感病毒尿囊液进行10倍倍比稀释检测,证实该方法最低检出量为1.4×102.5 EID50·m L-1,并可以从阳性棉拭子浸出液中扩增出目的基因片段。【结论】该RT-PCR方法具有特异性强和准确率高的特点,可以作为H7N9亚型AIV核酸检测的一种有效候选方法。

关键词：禽流感病毒 H7N9亚型 RT-PCR

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脑心肌炎病毒IRES置换不影响口蹄疫病毒的复制和毒力

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中国预防兽医学报 2015年第11期37卷 834-837页

作者：高荣远杨德成孙超周国辉王海伟于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

内部核糖体进入位点(IRES)是微RNA病毒起始蛋白合成的关键元件。为研究IRES元件在病毒致病过程中的作用,本研究以口蹄疫病毒(FMDV)为模型,在已建立的O型FMDV c DNA感染性克隆的基础上,利用融合PCR的方法以脑心肌炎病毒(EMCV)的IRES替换F... 详细信息

内部核糖体进入位点(IRES)是微RNA病毒起始蛋白合成的关键元件。为研究IRES元件在病毒致病过程中的作用,本研究以口蹄疫病毒(FMDV)为模型,在已建立的O型FMDV c DNA感染性克隆的基础上,利用融合PCR的方法以脑心肌炎病毒(EMCV)的IRES替换FMDV的IRES,构建并拯救出含有EMCV IRES的嵌合病毒(r FMDV-EIRES)。一步生长曲线结果显示r FMDV-EIRES无论是在鼠源BHK-21细胞还是在猪源IBRS-2细胞中的复制能力均与亲本病毒相近。另外,r FMDV-EIRES对乳鼠的致病力与亲本病毒也相同。以上研究结果表明,虽然EMCV IRES与FMDV IRES一级序列存在显著差异,但二者的置换并不影响FMDV的复制和毒力,该结果有助于加深IRES在微RNA病毒复制和致病性功能的认识。

关键词：内部核糖体进入位点蛋白翻译起始口蹄疫病毒 IRES嵌合病毒拯救

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猪圆环病毒Ⅱ型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

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黑龙江畜牧兽医 2015年第6期 168-171页

作者：郝立沙张璐佟杰于颖杨莹莹张武超涂亚斌蔡雪辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断中心哈尔滨150001

为了快速准确检测猪圆环病毒Ⅱ型（PCV-2）并对病毒拷贝数进行定量,试验根据Gen Bank中PCV-2保守序列（登录号为FJ644559.1）设计1对特异性引物和Taq Man探针,制备标准品,建立PCV-2的荧光定量检测方法,并对临床样品进行检测。结果表明... 详细信息

为了快速准确检测猪圆环病毒Ⅱ型（PCV-2）并对病毒拷贝数进行定量,试验根据Gen Bank中PCV-2保守序列（登录号为FJ644559.1）设计1对特异性引物和Taq Man探针,制备标准品,建立PCV-2的荧光定量检测方法,并对临床样品进行检测。结果表明：该方法在1×10^1~1×10^8拷贝/μL的模板范围内具有良好的线性关系,相关系数可达0.999;敏感性是常规PCR方法的100倍;对猪细小病毒（PPV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）均为阴性,没有交叉反应;批内、批间重复试验变异系数均小于2.50%;在临床检测中,比常规PCR方法检测PCV-2的阳性检出率高出38%。说明试验成功建立了PCV-2 Taq Man荧光定量PCR检测方法,可用于临床检测PCV-2感染及对其拷贝数进行定量。

关键词：猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2) TaqMan荧光定量PCR 应用探针标准品拷贝数

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表达鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白重组乳酸乳球菌的构建及其表达的优化

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中国预防兽医学报 2015年第11期37卷 825-828页

作者：张旺刘琳琳祁小乐高玉龙王永强高宏雷李凯高立刘长军张艳萍王笑梅崔红玉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病创新团队黑龙江哈尔滨150001

鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)的VP2蛋白是该病毒的主要抗原蛋白,为制备乳酸菌黏膜免疫口服疫苗,本研究采用乳酸乳球菌(***)及其Nisin诱导的表达系统,对VP2基因进行密码子优化,构建了表达IBDVVP2蛋白的重组乳酸乳球菌***/p NZ-VP2。经正交... 详细信息

鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)的VP2蛋白是该病毒的主要抗原蛋白,为制备乳酸菌黏膜免疫口服疫苗,本研究采用乳酸乳球菌(***)及其Nisin诱导的表达系统,对VP2基因进行密码子优化,构建了表达IBDVVP2蛋白的重组乳酸乳球菌***/p NZ-VP2。经正交试验对诱导条件进行优化,重组VP2蛋白(r VP2)表达量比优化前明显提高,最终得到最佳诱导条件为:OD600nm=0.5开始诱导,Nisin终浓度为2 ng/m L,诱导时间为5 h,r VP2表达量达到最大值38μg/m L。经western blot检测,r VP2能够持续性表达并具有良好的抗原性。该重组乳酸菌的构建为进一步体内免疫实验奠定了基础。

关键词：鸡传染性法氏囊病毒重组乳酸菌 VP2蛋白

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副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素各亚基处理PK-15细胞的基因表达谱分析

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中国预防兽医学报 2015年第5期37卷 371-374页

作者：牛惠李艳玲周泷李大鹏张艳禾李刚谢芳王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150001

为研究副猪嗜血杆菌(***)细胞致死膨胀毒素(CDT)各亚基(Cdt A、Cdt B和Cdt C)的相关生物学功能,本研究采用基因芯片技术对以CDT各亚基处理的PK-15细胞基因表达谱进行检测和分析。通过比较各亚基处理细胞与空白对照细胞基因表达谱的检测... 详细信息

为研究副猪嗜血杆菌(***)细胞致死膨胀毒素(CDT)各亚基(Cdt A、Cdt B和Cdt C)的相关生物学功能,本研究采用基因芯片技术对以CDT各亚基处理的PK-15细胞基因表达谱进行检测和分析。通过比较各亚基处理细胞与空白对照细胞基因表达谱的检测结果显示,Cdt A、Cdt B和Cdt C作用PK-15细胞后,处理细胞中分别有91个基因、126个基因及135个基因出现差异表达变化。根据芯片结果选取变化较显著的基因进行荧光定量RT-PCR验证,结果与基因芯片检测结果基本一致。基因注释(GO)分析表明,这些蛋白分别参与免疫系统调节、生物调控、代谢过程和定位等过程。本研究结果为进一步研究CDT的致病作用机制奠定了基础。

关键词：副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素表达谱基因芯片

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感染性犊牛腹泻病原学的研究进展

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黑龙江畜牧兽医 2015年第12期 73-76页

作者：智海东高艳刘长明付朝阳中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 哈尔滨维科生物技术开发公司哈尔滨150069

犊牛腹泻是危害养牛业最为严重的疾病之一，给养牛业造成了重大的经济损失。传染性和非传染性因子均可引起犊牛腹泻，但以传染性病原体引起的居多。引起犊牛腹泻的病原体主要有病毒、细菌和寄生虫。虽然近些年来在犊牛腹泻的防控中取得... 详细信息

犊牛腹泻是危害养牛业最为严重的疾病之一，给养牛业造成了重大的经济损失。传染性和非传染性因子均可引起犊牛腹泻，但以传染性病原体引起的居多。引起犊牛腹泻的病原体主要有病毒、细菌和寄生虫。虽然近些年来在犊牛腹泻的防控中取得很大进展，但存在的问题依然很多，目前犊牛腹泻的复杂性又使专家将研究重点转向病原学研究。本文对引起犊牛腹泻的主要病毒、细菌和原虫的一些特点和致病性方面的近期研究进展进行综述，以期为犊牛腹泻防控提供借鉴。

关键词：犊牛腹泻病原学感染性非传染性经济损失养牛业病原体寄生虫

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传染性法氏囊病病毒反向遗传技术发展及其应用

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病毒学报 2015年第3期31卷 326-331页

作者：祁小乐王永强高立高宏雷高玉龙王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心扬州225009

传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)是双股双节段RNA病毒科的主要代表,其主要侵害鸡的中枢免疫器官法氏囊,引起的传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是危害养禽业健康发展的重要免疫抑制病。IBDV反... 详细信息

传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)是双股双节段RNA病毒科的主要代表,其主要侵害鸡的中枢免疫器官法氏囊,引起的传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是危害养禽业健康发展的重要免疫抑制病。IBDV反向遗传技术诞生的近20年来,病毒拯救技术不断完善,病毒基因功能研究更为深入,而且基于此的新型疫苗的研究也有较大进展。本实验室在该领域也做了比较系统和深入的工作。本综述对IBDV致病机制和防控研究具有重要启示意义。

关键词：传染性法氏囊病病毒反向遗传细胞嗜性毒力疫苗

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一株H10N7亚型禽流感病毒的分离鉴定及生物学特性研究

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中国预防兽医学报 2015年第1期37卷 6-9页

作者：王德丽慈彦鹏崔艳芳樊兆斌刘丽玲田国彬曾显营陈化兰李雁冰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

2013年,从秦皇岛野鸟林鹬体内分离到一株H10N7亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/Wood Sandpiper/Qinhuangdao/660-662/2013(H10N7)[简称WSP/QHD/660-662/2013(H10N7)]。本研究对该分离株的全基因序列进行测定,并对其进行致病性研究。基因组序列分析表明:该病毒的HA蛋白裂解位点为334PELMQGRGL343,属于低致病性AIV的分子特征,其HA基因与A/Duck/Hunan/S11205/2012(H10N3)的相似性达到97.90%,NA基因与A/Domestic Duck/Republic of Georgia/1/2010(H10N7)的相似性达到97.46%,内部基因与H9N2等多亚型AIV的相应基因节段具有较高的相似性,推测该分离株可能为一株多亚型流感病毒的重组株。对动物致病性试验结果显示:该病毒可以感染哺乳动物模型BALB/c小鼠,并且仅能够在鼠的肺脏和鼻甲骨粘膜上皮细胞中复制,表明该病毒分离株对小鼠也呈现低致病性。

关键词：禽流感病毒 H10N7 进化分析致病性

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两株野鸟源H9N2亚型禽流感病毒的进化分析和对小鼠的感染性研究

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中国预防兽医学报 2015年第11期37卷 817-820页

作者：肖丽崔鹏飞张芳关立峥施建忠邓国华陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为了解2015年分离自我国四川省野鸟粪便中的两株H9N2亚型禽流感病毒(AIV)Wild Bird/SC/S1264/2015(H9N2)(WB/SC/264/15)和Wild Bird/SC/S1411/2015(H9N2)(WB/SC/411/15)的生物学特性,本研究对其进行了全基因组序列测定和BALB/c小鼠的感染性试验。序列分析结果显示:两个分离株的HA裂解位点基序均为333PSRSSR↓GL340,符合低致病性AIV(LPAIV)的氨基酸序列特征,HA蛋白受体结合位点处的第226以及228位氨基酸残基分别为谷氨酰胺(Q)和甘氨酸(G),具有结合禽源AIV受体的分子特征。内部基因片段来源复杂,呈现明显的基因多样性。BALB/c小鼠的感染性试验结果显示,这两个分离株只在小鼠的上呼吸道鼻甲中有效复制,小鼠体重变化轻微,未见明显临床症状。

关键词：禽流感病毒 H9N2亚型野鸟进化感染性

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抗病毒免疫因子Viperin的研究进展

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病毒学报 2015年第1期31卷 91-96页

作者：朱春辉汤艳东徐方周建华宁夏医科大学基础医学院银川750004 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 哈药集团生物疫苗有限公司哈尔滨150069

先天免疫因子Viperin是一种功能与内质网相关的抗病毒蛋白,可被干扰素、多种病毒、细菌脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)和poly(I:C)等诱导表达。Viperin通过与病毒蛋白和某些细胞内蛋白的相互作用抑制病毒增殖,具有广谱抗病毒活性。在... 详细信息

先天免疫因子Viperin是一种功能与内质网相关的抗病毒蛋白,可被干扰素、多种病毒、细菌脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)和poly(I:C)等诱导表达。Viperin通过与病毒蛋白和某些细胞内蛋白的相互作用抑制病毒增殖,具有广谱抗病毒活性。在与宿主相互作用的长期进化过程中,某些病毒能够抑制细胞内Viperin的表达,逃逸其抗病毒功能。除抗病毒作用外,Viperin还具有其他一些生物学功能。近年来有关Viperin的研究,特别是在其抗病毒机理方面,进展较快,本文结合自身研究体会,就其基本特性和研究状况做一介绍。

关键词： Viperin 抗病毒蛋白细胞膜宿主蛋白相互作用

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