检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2015年第9期37卷 721-724页

作者：刘永相李秀云刘鑫蒋艳妹郭冬春田进仇铮邹希明曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 北方森林动物园黑龙江哈尔滨150332

为研究虎源细小病毒的分子遗传特征,本研究从东北虎腹泻粪便样品中分离到一株虎源细小病毒(HRB-T2014)。对该分离株的VP2基因进行克隆测序分析,结果表明,HRB-T2014与虎源细小病毒FJ405225和HT-374的相似性最高,达到99.9%,而与犬源细小... 详细信息

为研究虎源细小病毒的分子遗传特征,本研究从东北虎腹泻粪便样品中分离到一株虎源细小病毒(HRB-T2014)。对该分离株的VP2基因进行克隆测序分析,结果表明,HRB-T2014与虎源细小病毒FJ405225和HT-374的相似性最高,达到99.9%,而与犬源细小病毒相似性最低,仅为98.1%。VP2基因核苷酸序列系统发育树分析结果显示,HRB-T2014与虎源中国分离株位于同一进化分支,并与猫和貂细小病毒共处于猫细小病毒分支,而与犬细小病毒处于不同的进化分支。以上结果表明,HRB-T2014与猫源细小病毒具有共同的遗传起源。

关键词：虎细小病毒分离鉴定 VP2基因序列分析

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鸡传染性喉气管炎病毒LJS09株致病性的研究

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中国预防兽医学报 2015年第3期37卷 181-184页

作者：蒋露李慧昕韩宗玺孔宪刚刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽呼吸道病创新团队黑龙江哈尔滨150001

为鉴定鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)LJS09株(于2009年分离自江苏省)的致病性,本研究将ILTV LJS09以102 EID50的剂量人工感染SPF鸡。结果表明在感染后4 d^6 d(dpi),感染鸡表现出呼吸困难等临床症状;剖检时可见明显的喉气管病变及典型的组... 详细信息

为鉴定鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)LJS09株(于2009年分离自江苏省)的致病性,本研究将ILTV LJS09以102 EID50的剂量人工感染SPF鸡。结果表明在感染后4 d^6 d(dpi),感染鸡表现出呼吸困难等临床症状;剖检时可见明显的喉气管病变及典型的组织病理学变化;临床指数达到1.4;发病率和死亡率分别为80%和10%;感染鸡血清抗体水平于8 dpi开始转为阳性(30%),20 dpi血清抗体全部转阳(100%)。另外,荧光定量PCR检测结果表明ILTV在感染鸡体内分布广泛,主要嗜性组织为喉头、气管、哈德氏腺、脑、盲肠和腺胃。根据感染鸡的临床指数、发病率和死亡率,表明ILTV LJS09株对鸡具有较强的致病性。

关键词：传染性喉气管炎病毒 LJS09分离株致病性

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表达传染性喉气管炎病毒gB主要抗原表位区域重组新城疫病毒的构建

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中国预防兽医学报 2015年第6期37卷 414-417页

作者：孙娜娜王琪李慧昕刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽呼吸道病创新团队黑龙江哈尔滨150001

为构建以新城疫病毒(NDV)为活病毒载体表达传染性喉气管炎病毒(ILTV)g B主要抗原表位区域的重组病毒,本研究以ILTV LJS09株的DNA为模板,通过PCR技术扩增1 323 bp ILTV编码g B主要抗原表位的基因片段(1 bp^440 bp),将其插入到NDV感染性克... 详细信息

为构建以新城疫病毒(NDV)为活病毒载体表达传染性喉气管炎病毒(ILTV)g B主要抗原表位区域的重组病毒,本研究以ILTV LJS09株的DNA为模板,通过PCR技术扩增1 323 bp ILTV编码g B主要抗原表位的基因片段(1 bp^440 bp),将其插入到NDV感染性克隆p BR-FL中,构建含有ILTV g B主要抗原基因的NDV c DNA克隆p BR-FL-g B1-440。利用磷酸钙转染法,在辅助质粒p CI-neo-NP、p CI-neo-P和p CI-neo-L的共同作用下,将重组质粒转染于表达T7聚合酶重组痘病毒预感染的BSR-T7/5细胞,获得重组病毒r L-g B1-440。采用RT-PCR检测接种重组病毒的鸡胚尿囊液,结果表明重组病毒中含有相应的外源基因。利用g B的抗血清检测重组病毒中g B的表达,间接免疫荧光试验表明,在感染重组病毒的BSR-T7/5细胞中目的蛋白得到表达。本研究为研制和开发传染性喉气管炎重组新城疫二联活疫苗奠定基础。

关键词：重组新城疫病毒传染性喉气管炎病毒 gB蛋白主要抗原表位基因

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犬瘟热病毒融合蛋白、血凝蛋白、基质蛋白和核衣壳蛋白基因DNA联合免疫的研究

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中国预防兽医学报 2015年第7期37卷 549-552页

作者：秦立得蒋伟王喜军帅磊葛金英步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 北京信得威特科技有限公司北京101302

为研究犬瘟热病毒(CDV)融合蛋白(F)、血凝蛋白(H)、基质膜蛋白(M)和核衣壳蛋白(N)基因核酸联合免疫的效力,本研究分别构建了表达经哺乳动物密码子优化的CDV F、H、M和N蛋白基因的真核重组表达质粒p CAGG-CDVF、p CAGG-CDVH、p CAGG-CDVM... 详细信息

为研究犬瘟热病毒(CDV)融合蛋白(F)、血凝蛋白(H)、基质膜蛋白(M)和核衣壳蛋白(N)基因核酸联合免疫的效力,本研究分别构建了表达经哺乳动物密码子优化的CDV F、H、M和N蛋白基因的真核重组表达质粒p CAGG-CDVF、p CAGG-CDVH、p CAGG-CDVM和p CAGG-CDVN;将其分别转染BHK-21细胞后通过间接免疫荧光试验表明,目的蛋白均获得正确表达。此外,将等量混合的重组质粒p CAGG-CDVF、p CAGG-CDVH、p CAGG-CDVM(3组份DNA疫苗)或重组质粒p CAGG-CDVF、p CAGG-CDVH、p CAGG-CDVM、p CAGG-CDVN(4组份DNA疫苗),分别以500μg/只经肌肉注射途径免疫A组(6只)或B组(6只)比格犬,间隔4周以相同剂量、途径加强免疫一次,并于初次免疫前、后不同时间检测血清CDV中和抗体。中和试验结果显示,A组和B组免疫犬,二免4周时,CDV中和抗体滴度平均值达到峰值,分别为6 log2和5.64 log2;在初免54周时,CDV中和抗体滴度均仍然维持5 log2。因此,3组份DNA疫苗为具有良好应用前景的犬瘟热候选疫苗。

关键词：犬瘟热犬瘟热病毒 DNA疫苗

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禽I型副粘病毒天鹅源分离株对鸡的致病性研究

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中国预防兽医学报 2015年第2期37卷 140-142页

作者：赵莎莎韩宗玺邵昱昊孔宪刚刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽呼吸道病创新团队黑龙江哈尔滨150001

为研究禽I型副粘病毒(APMV-1)天鹅分离株sw/CH/LHLJ/120608对鸡的致病性,本研究将该病毒以105EID50/m L的剂量,采用点眼和滴鼻的方式感染SPF鸡,检测其致病性,同时,采用荧光定量RT-PCR的方法检测病毒在各组织中的分布。结果显示,sw/CH/LH... 详细信息

为研究禽I型副粘病毒(APMV-1)天鹅分离株sw/CH/LHLJ/120608对鸡的致病性,本研究将该病毒以105EID50/m L的剂量,采用点眼和滴鼻的方式感染SPF鸡,检测其致病性,同时,采用荧光定量RT-PCR的方法检测病毒在各组织中的分布。结果显示,sw/CH/LHLJ/120608分离株感染鸡能够引起30%的发病率和6%的死亡率,并且病毒在感染鸡的呼吸系统、消化系统、免疫系统以及泌尿系统中均有广泛的分布。根据对APMV-1实验动物致病性的判定标准,该病毒株对鸡具有中等毒力的致病力特征。

关键词：禽I型副粘病毒天鹅源致病力

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一株自然重组的鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及分析

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中国预防兽医学报 2015年第6期37卷 418-421页

作者：徐倩倩王秋玲张婷婷韩宗玺梁殊林赵妍马得莹刘胜旺东北农业大学动物科技学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽病研究室黑龙江哈尔滨150001

本研究从吉林省德惠市某父母代蛋鸡场发生疑似呼吸道病毒感染的鸡群中分离到一株鸡传染性支气管炎病毒(IBV),命名为ck/CH/LJL/130908。该病毒基因型鉴定为Massachusetts型,与H120疫苗株和Mass 41强毒株S1基因的同源性分别为96.4%和94.4%... 详细信息

本研究从吉林省德惠市某父母代蛋鸡场发生疑似呼吸道病毒感染的鸡群中分离到一株鸡传染性支气管炎病毒(IBV),命名为ck/CH/LJL/130908。该病毒基因型鉴定为Massachusetts型,与H120疫苗株和Mass 41强毒株S1基因的同源性分别为96.4%和94.4%,与H120的亲缘关系更近。但基因组遗传进化分析显示,ck/CH/LJL/130908与Ark病毒遗传关系较近。推测该病毒在起源和进化过程中可能发生了重组。应用Sim Plot软件分析证实了这种推测,表明ck/CH/LJL/130908来源于IBV 4/91、Ark和H120之间的重组。重组位点分别位于基因组ORF1ab的Nsp2、Nsp3、Nsp16和S2编码区。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒全基因序列重组遗传进化分析

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鸭抗原相关转运体TAP1和TAP2原核表达及多克隆抗体的制备

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黑龙江畜牧兽医 2015年第6期 40-43页

作者：张晓娜吴少莲文辉强廉传江陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学研究团队哈尔滨150001

HBK鸭是国家禽类实验动物种子中心培育的我国首个无特定病原体(SPF)鸭,已封闭饲养9个世代。鸭抗原处理相关转运体(TAP)基因位于主要组织相容性复合体区域,TAP1和TAP2组成的二聚体具有将抗原肽从细胞质转运入内质网腔的重要作用。为了表... 详细信息

HBK鸭是国家禽类实验动物种子中心培育的我国首个无特定病原体(SPF)鸭,已封闭饲养9个世代。鸭抗原处理相关转运体(TAP)基因位于主要组织相容性复合体区域,TAP1和TAP2组成的二聚体具有将抗原肽从细胞质转运入内质网腔的重要作用。为了表达鸭抗原相关转运体蛋白,并制备特异性多克隆抗体,试验采用PCR方法扩增HBKB系鸭的TAP1完整基因和TAP2基因的预测肽结合区(PBD),分别命名为TAP1和TAP2PBD,克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒p ET-TAP1和p ET-TAP2PBD,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导表达后进行SDSPAGE及Western-blot鉴定,表达产物经SDS-PAGE后分别切胶免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体。结果表明:两种目的蛋白均获得了正确表达。说明试验制备了高特异性鸭TAP1和TAP2多克隆抗体,可用于水禽TAP的结构和功能研究。

关键词：鸭抗原相关转运体肽结合区原核表达多克隆抗体

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鸡NK细胞相关C型凝集素样编码基因研究进展

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动物医学进展 2015年第6期36卷 134-137页

作者：吴少莲韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

鸡的C型凝集素样基因编码包括鸡自然杀伤(natural killer,NK)细胞受体在内的许多免疫分子。鸡C型凝集素样编码基因分别位于自然杀伤基因复合体(NK gene complex,NKC)和主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)区域,... 详细信息

鸡的C型凝集素样基因编码包括鸡自然杀伤(natural killer,NK)细胞受体在内的许多免疫分子。鸡C型凝集素样编码基因分别位于自然杀伤基因复合体(NK gene complex,NKC)和主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)区域,在NKC区为CD69和CD94/NKG2,在MHC区为相邻的B-NK和B-Lec基因。B-NK是目前唯一已证明表达于NK细胞上的凝集素样受体,其配体尚不清楚,但是已经证明B-NK能够和活化的细胞上的配体结合。论文主要讨论CD69、CD94/NKG、B-NK和BLec 4个基因的系统发育比较和蛋白质结构的研究进展。

关键词：鸡 NK细胞 C型凝集素样受体

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猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp9与宿主CALM2基因编码钙调蛋白的相互作用研究

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中国预防兽医学报 2015年第9期37卷 674-678页

作者：胡亮郭东伟李江南尹曼曼黄丽翁长江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原监测与分子流行病学团队黑龙江哈尔滨150001

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白Nsp9为该病毒RNA依赖的RNA聚合酶(Rd Rp),在病毒的转录复制过程中发挥关键性作用。为筛选与Nsp9相互作用的宿主蛋白,本研究采用酵母双杂交方法,以PRRSV Nsp9为诱饵蛋白,从猪肺泡巨噬细胞(PAM)... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白Nsp9为该病毒RNA依赖的RNA聚合酶(Rd Rp),在病毒的转录复制过程中发挥关键性作用。为筛选与Nsp9相互作用的宿主蛋白,本研究采用酵母双杂交方法,以PRRSV Nsp9为诱饵蛋白,从猪肺泡巨噬细胞(PAM)酵母表达c DNA文库中筛选到CALM2(Calmodulin 2)基因。酵母回返验证试验和免疫共沉淀(Co-IP)试验证明CALM2基因编码的钙调蛋白(Ca M)与Nsp9特异地相互作用。激光共聚焦试验表明Ca M与Nsp9共定位于HEK293细胞胞浆内。本研究筛选到一个与Nsp9相互作用的新宿主蛋白Ca M,但该蛋白是否直接参与PRRSV的复制过程还有待进一步研究。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 Nsp9 酵母双杂交肺泡巨噬细胞钙调蛋白

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整合埃博拉病毒囊膜蛋白的伪病毒的构建

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中国预防兽医学报 2015年第12期37卷 926-929页

作者：王玉杰王斌时静胡丹于群郑永辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室一美国密歇根州立大学天然免疫联合实验室黑龙江哈尔滨150001

埃博拉病毒(EBOV)是一种能够引起人类和灵长类动物的烈性出血热的病原体,致死率高达90%。对该病毒活病毒的操作仅能够在生物安全4级实验室进行,高级别的生物安全要求限制了病毒的研究。为建立一个能够表达EBOV囊膜蛋白(GP)的伪病毒,本... 详细信息

埃博拉病毒(EBOV)是一种能够引起人类和灵长类动物的烈性出血热的病原体,致死率高达90%。对该病毒活病毒的操作仅能够在生物安全4级实验室进行,高级别的生物安全要求限制了病毒的研究。为建立一个能够表达EBOV囊膜蛋白(GP)的伪病毒,本研究利用表达GP基因的重组质粒,与囊膜蛋白缺失、表达绿色荧光蛋白(GFP)的人免疫缺陷病病毒1型(HIV-1)基因组的重组质粒共转染人胚胎肾细胞(293T),以包装整合含有囊膜蛋白的伪型EBOV。结果表明,EBOV GP蛋白能够正确组装至HIV-1病毒表面;利用组装的伪型病毒粒子感染293T、人宫颈癌细胞(Hela)、人骨肉瘤细胞(Ghost)和非洲绿猴肾细胞(Vero)几种细胞系,结果显示在不同细胞系中均可检测到GFP蛋白的表达,表明组装的伪型病毒可以模拟野生型病毒感染相关细胞。本研究构建的伪型EBOV作为活病毒的替代工具,为研究EBOV的感染机制及中和抗体的筛选提供了一个良好的平台。

关键词：埃博拉病毒伪病毒囊膜蛋白

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