检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2021年第8期61卷 2457-2468页

作者：李火明夏颖李干武蔡文通中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

【目的】多方面鉴定尿路致病性大肠杆菌中的Ⅰ型限制-修饰(restriction-modification,RM)系统C5423-5425,并揭示其功能与生理意义。【方法】利用Lambda Red重组系统构建CFT073 DNA甲基化转移酶基因缺失株Δc5424;利用单分子实时测序分... 详细信息

【目的】多方面鉴定尿路致病性大肠杆菌中的Ⅰ型限制-修饰(restriction-modification,RM)系统C5423-5425,并揭示其功能与生理意义。【方法】利用Lambda Red重组系统构建CFT073 DNA甲基化转移酶基因缺失株Δc5424;利用单分子实时测序分析以获得C5424甲基化修饰的位点与基序;利用转化效率试验说明RM系统抵御外源DNA的转化;利用转录组测序和荧光定量RT-PCR鉴定C5424的调控基因;利用软琼脂平板运动试验等方法研究细菌生理功能的变化。【结果】用生物信息学方法鉴定了一个Ⅰ型RM系统;获得了c5424的突变株;鉴定了C5424修饰的靶序列G^(m)AGNNNNNNNGTCA/TG^(m)AC NNNNNNNCTC,并揭示了靶序列在基因组中的分布;C5424系统可以抵御外源DNA的进入;c5424的缺失显著影响17个基因的表达,包括运动相关基因motB和抗活性氯基因rclR等;c5424的缺失显著影响CFT073的运动能力和抗次氯酸的能力。【结论】本文从多方面鉴定了尿路致病性大肠杆菌CFT073中的I型RM系统C5423-5425,这个系统对细菌具有重要的生理意义。本文对研究细菌的表观遗传学具有参考价值。

关键词：尿路致病性大肠杆菌 DNA甲基化转移酶单分子实时测序限制-修饰系统

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病毒工厂:病毒复制的关键场所

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微生物学报 2021年第7期61卷 1873-1881页

作者：王冰吴红霞仇华吉孙元中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

多种病毒的复制和组装过程需要在被称为“病毒工厂”的特殊结构内完成。随着研究水平的不断提高,研究者已经在一定程度上揭示了病毒工厂的形成过程及结构。病毒入侵细胞后,能够招募细胞和病毒成分从而形成病毒组装和成熟的场所,细胞膜... 详细信息

多种病毒的复制和组装过程需要在被称为“病毒工厂”的特殊结构内完成。随着研究水平的不断提高,研究者已经在一定程度上揭示了病毒工厂的形成过程及结构。病毒入侵细胞后,能够招募细胞和病毒成分从而形成病毒组装和成熟的场所,细胞膜结构和细胞骨架能够参与该结构的形成,且部分病毒形成的病毒工厂还需线粒体提供能量。除上述特征外,病毒工厂的结构及形态会随病毒复制阶段的不同而不断变化。本文将对病毒工厂的结构、细胞器的招募、病毒工厂结构的变化及大分子物质的运输进行综述。

关键词：病毒工厂结构细胞器招募动态变化物质运输

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乳酸乳球菌表达系统的发展现状与前景展望

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微生物学报 2022年第3期62卷 895-905页

作者：高莹李淼孙元单春华仇华吉东北林业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150040 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

乳酸乳球菌作为全球公认安全的微生物,具有多种益生作用,常被用作基因工程宿主菌。在过去的二十年中,乳酸乳球菌作为载体在递呈病毒、细菌抗原等方面得到了广泛的应用,并且在不同领域发挥着重要作用。本文以乳链菌肽控制的表达(nisin-co... 详细信息

乳酸乳球菌作为全球公认安全的微生物,具有多种益生作用,常被用作基因工程宿主菌。在过去的二十年中,乳酸乳球菌作为载体在递呈病毒、细菌抗原等方面得到了广泛的应用,并且在不同领域发挥着重要作用。本文以乳链菌肽控制的表达(nisin-controlled expression,NICE)系统为例,介绍了基于乳酸乳球菌的表达系统的组成、不同组分的功能特点以及该表达系统在食品、疫苗和畜牧兽医等领域的应用,总结分析了NICE系统的特点以及需要改进的地方,并对该表达系统未来的发展前景进行了展望。

关键词：乳酸乳球菌宿主菌乳链菌肽控制的系统应用

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应激颗粒:细胞调控病毒感染的重要策略

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微生物学报 2021年第8期61卷 2236-2249页

作者：李淑红屈亮李素仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

真核细胞受到热休克、氧化应激、营养缺乏或者病毒感染等外界压力的刺激下会诱导一系列的应答反应,如形成应激颗粒(stress granule,SG),从而使细胞能更好地适应环境压力。SG作为胞浆中翻译起始复合物的聚集产物,在细胞的基因表达和稳态... 详细信息

真核细胞受到热休克、氧化应激、营养缺乏或者病毒感染等外界压力的刺激下会诱导一系列的应答反应,如形成应激颗粒(stress granule,SG),从而使细胞能更好地适应环境压力。SG作为胞浆中翻译起始复合物的聚集产物,在细胞的基因表达和稳态中发挥着重要的作用。病毒感染是诱导SG形成的条件之一,病毒侵入宿主细胞后会"借用"宿主的翻译机制完成自己的生命周期,宿主为了抵抗病毒的侵略而暂停翻译形成SG。本文对SG的产生及功能,SG与病毒的相互作用以及SG与病毒诱导的先天性免疫的关系等方面进行了综述,以期为进一步研究抗病毒策略提供方向。

关键词：应激颗粒病毒翻译先天性免疫

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核内小体的复杂结构与多样化功能

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生物工程学报 2021年第7期37卷 2223-2231页

作者：刘欣媛李连峰仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

核内小体是定位于细胞核内的无膜结构,为多蛋白-RNA复合体,通过招募相关蛋白参与基因转录、RNA剪切、表观遗传调控、肿瘤发生与抑制及抗病毒防御等多种细胞活动。明确核内小体蛋白的形成过程、功能和调控机制对研究相关疾病与病毒-宿主... 详细信息

核内小体是定位于细胞核内的无膜结构,为多蛋白-RNA复合体,通过招募相关蛋白参与基因转录、RNA剪切、表观遗传调控、肿瘤发生与抑制及抗病毒防御等多种细胞活动。明确核内小体蛋白的形成过程、功能和调控机制对研究相关疾病与病毒-宿主作用机制均具有重要意义。以下以几种核内小体蛋白为例,对核内小体的形成方式、结构与功能进行综述,并重点阐述其在抗病毒感染中的重要作用,期望为宿主抗病毒免疫机制研究提供一个新的靶标。

关键词：核内小体装配机制功能抗病毒应答

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识别不同亚型鸭甲型肝炎病毒VP0蛋白单克隆抗体的制备及表位鉴定

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中国预防兽医学报 2023年第4期45卷 416-422页

作者：王欣荣张文立马文杰潘喻张贺徐云飞陈洪岩夏长友于海东王玉娥中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 哈尔滨维科生物技术有限公司黑龙江哈尔滨150069 西南大学动物医学院重庆400715

为制备鸭甲型肝炎病毒(DHAV)VP0蛋白的单克隆抗体(MAb),本实验经PCR扩增DHAV-1和DHAV-3的VP0基因并克隆至原核表达载体pMAL-c5x中分别构建重组质粒pMAL-c5x-DHAV1-VP0和pMAL-c5x-DHAV3-VP0。重组质粒均经PCR和测序鉴定正确后转化大肠杆... 详细信息

为制备鸭甲型肝炎病毒(DHAV)VP0蛋白的单克隆抗体(MAb),本实验经PCR扩增DHAV-1和DHAV-3的VP0基因并克隆至原核表达载体pMAL-c5x中分别构建重组质粒pMAL-c5x-DHAV1-VP0和pMAL-c5x-DHAV3-VP0。重组质粒均经PCR和测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,采用IPTG诱导表达,并经亲和层析的方法纯化后,采用SDS-PAGE检测两个重组蛋白的表达与纯化效果。SDS-PAGE结果显示,分别在约70 ku处出现目的条带,且纯化后的条带较单一。表明两种重组VP0蛋白(DHAV-1 rVP0和DHAV-3 rVP0蛋白)均获得了表达,且纯化效果均较好。采用纯化的DHAV-1 VP0和DHAV-3 VP0蛋白交叉免疫BALB/c小鼠4次,并在冲击免疫后3 d收获小鼠脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,采用间接ELISA方法筛选能够稳定分泌DHAV-1 VP0及DHAV-3 VP0蛋白抗体且MBP蛋白抗体为阴性的杂交瘤细胞株,采用试剂盒鉴定MAb的亚类。结果显示,获得了针对DHAV-1及DHAV-3 VP0蛋白的MAb 1H10,且其为IgG1亚型,轻链为κ链。将构建的表达DHAV-1及DHAV-3 VP0蛋白的重组真核表达质粒经PCR和测序鉴定正确后分别转染HEK293T细胞,24 h后以该MAb作为一抗,分别采用western blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定。结果显示,转染两种重组质粒的细胞均在35 ku处出现特异性条带,且细胞中均出现特异性绿色荧光,而转染空载体的对照细胞无该条带和绿色荧光。表明制备的MAb可以用于western blot和IFA鉴定DHAV-1和DHAV-3 VP0蛋白的表达。通过对VP0基因截短表达并采用western blot鉴定其识别的抗原表位,并对该表位的氨基酸序列与NCBI数据库中VP0蛋白的氨基酸序列比对。结果显示,MAb 1H10识别的线性表位为VP0蛋白的184LRTNTEIDL192,该表位与不同年代和不同地域分离的DHAV-1及DHAV-3 VP0蛋白相应氨基酸序列的同源性均为100%。表明该抗原表位在不同DHAV分离株中的保守性很高。本研究为DHAV检测方法的建立及具有广谱保护性表位疫苗的设计提供实验参考。

关键词：鸭甲型肝炎病毒单克隆抗体抗原表位

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cGAS-STING信号通路:免疫监视的重要机制

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微生物学报 2021年第7期61卷 1882-1895页

作者：周萍萍王涛孙元仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

免疫系统识别病原微生物的主要机制之一是识别其核酸。环磷酸鸟苷-腺苷合成酶(cGAS)是一种胞质DNA感受器,感知病原DNA后激活cGAS-STING通路。该通路不仅介导天然免疫应答以抵抗多种含DNA的病原微生物感染,还能感知肿瘤来源的DNA而产生... 详细信息

免疫系统识别病原微生物的主要机制之一是识别其核酸。环磷酸鸟苷-腺苷合成酶(cGAS)是一种胞质DNA感受器,感知病原DNA后激活cGAS-STING通路。该通路不仅介导天然免疫应答以抵抗多种含DNA的病原微生物感染,还能感知肿瘤来源的DNA而产生抗肿瘤免疫应答。然而,自体DNA对cGAS-STING通路的异常激活也会导致自身免疫性和炎症性疾病。本文综述了cGAS-STING信号通路及其在抗病毒天然免疫中的调控作用与功能,阐述了cGAS-STING通路在抗病毒感染和疾病中发挥的作用。

关键词： cGAS STING 先天免疫调控功能

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鹌鹑实验动物化简史及相关研究进展

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中国家禽 2023年第5期45卷 85-91页

作者：李昌文于海波都成王野陈洪岩夏长友中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家禽类实验动物资源库兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

鹌鹑是一种重要的生产和实验用家禽,可按照实验动物标准进行实验动物化。文章总结了鹌鹑实验动物化简史及当前与实验动物领域密切相关的研究进展,包括分类学地位和驯化、常用的品种品系及资源、无菌鹌鹑培育、近交系鹌鹑培育、实验室饲... 详细信息

鹌鹑是一种重要的生产和实验用家禽,可按照实验动物标准进行实验动物化。文章总结了鹌鹑实验动物化简史及当前与实验动物领域密切相关的研究进展,包括分类学地位和驯化、常用的品种品系及资源、无菌鹌鹑培育、近交系鹌鹑培育、实验室饲养健康管理和资源保存,并对实验鹌鹑的应用前景进行了展望。

关键词：鹌鹑实验动物资源

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猫疱疹病毒Ⅰ型RAA检测方法的建立与应用

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中国兽医科学 2023年第1期53卷 29-33页

作者：王颖戚睿斌崔赛赛杨育鹏冯可昕刘家森姜骞杨鸣发康洪涛曲连东东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨宾150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为建立一种快速检测猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)的方法,本研究根据GenBank上登录的FHV-1 UL55序列设计特异性探针及引物,筛选最佳引物对,建立了FHV-1的重组酶介导等温扩增(RAA)检测方法。该方法在39℃反应20 min即可快速、特异性地检测FHV-1... 详细信息

为建立一种快速检测猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)的方法,本研究根据GenBank上登录的FHV-1 UL55序列设计特异性探针及引物,筛选最佳引物对,建立了FHV-1的重组酶介导等温扩增(RAA)检测方法。该方法在39℃反应20 min即可快速、特异性地检测FHV-1。灵敏性试验结果显示,RAA最低检测限为7.60×101copies/μL,比普通PCR最低检测限高100倍。特异性试验结果显示,该RAA方法与猫杯状病毒、猫传染性腹膜炎病毒、猫细小病毒无交叉反应。对34份临床样本进行检测,其中13份为阳性,阳性检出率为38.23%。综上所述,本研究成功建立了猫疱疹病毒Ⅰ型RAA检测方法。

关键词：猫疱疹病毒重组酶介导等温扩增快速检测方法

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非洲猪瘟病毒DP148R蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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中国预防兽医学报 2022年第3期44卷 301-306页

作者：王永琦郑君翁长江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/基础免疫创新团队黑龙江哈尔滨150069

为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)DP148R蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究构建了重组原核表达质粒pET-28a-DP148R,通过PCR和测序鉴定正确后经原核表达并纯化了重组DP148R蛋白,将其按常规方法免疫BALB/c小鼠,取小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,... 详细信息

为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)DP148R蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究构建了重组原核表达质粒pET-28a-DP148R,通过PCR和测序鉴定正确后经原核表达并纯化了重组DP148R蛋白,将其按常规方法免疫BALB/c小鼠,取小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过ELISA方法筛选,获得一株能稳定分泌DP148R蛋白MAb的杂交瘤细胞株7D6。采用间接ELISA方法检测了该MAb的抗体效价,利用DP148R截短表达的各重组蛋白为抗原,采用western blot方法鉴定了该MAb识别的抗原表位,通过western blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定了该MAb的反应原性。鉴定结果显示,纯化的MAb效价高于1:105,MAb 7D6为IgG2b亚型,该MAb识别的线性抗原表位为29LYWVFRAIHI38;分别采用western blot和IFA两种方法鉴定,结果均显示,纯化的MAb既能够特异性识别HEK293T细胞中表达的Flag-DP148R蛋白,也能够识别ASFV感染的PAMs细胞中表达的DP148R蛋白,反应原性较强。本研究制备的ASFV DP148R蛋白MAb可以为ASF诊断方法的建立以及DP148R蛋白的生物学功能研究提供参考依据。

关键词：非洲猪瘟病毒 DP148R蛋白原核表达单克隆抗体

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