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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：王秀梅辛九庆李媛中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

【目的】牛支原体（Mycoplasma bovis,***）是一种能引起牛支原体肺炎和乳房炎的病原菌。近年来,该病原菌在世界范围内呈快速传播态。临床上对于牛支原体病的预防主要通过加强饲养管理,提高机体抵抗力:减少长途运输、拥挤、饥渴等应激... 详细信息

【目的】牛支原体（Mycoplasma bovis,***）是一种能引起牛支原体肺炎和乳房炎的病原菌。近年来,该病原菌在世界范围内呈快速传播态。临床上对于牛支原体病的预防主要通过加强饲养管理,提高机体抵抗力:减少长途运输、拥挤、饥渴等应激因素或降低其造成的影响,发病后治疗多采用抗生素,如环丙沙星、四环素和泰妙菌素等。然而随着抗生素的广泛使用,耐药现象也越来越多,本研究开展MIC测定可为临床牛支原体病的治疗提供参考数据。【方法】本研究通过测定临床分离牛支原体的颜色变化单位（colour change unit,CCU）确定MIC测定时***的浓度,采用微量稀释法测定***对临床常用的8种抗菌药的MIC。【结果】滴度测定结果显示牛支原体为108 CCU/ml,按照CLSI规定,MIC测定时牛支原体的终浓度为104 CCU/ml。与国外报道相似,本研究中泰妙菌素MIC90为128ug/ml,泰乐菌素MIC90为64ug/m1,恩诺沙星MIC90为0.6ug/ml,氟苯尼考MIC90为16ug/ml,林可霉素MIC90为8ug/ml。受试的八种抗菌药中,8株牛支原体对大观霉素、恩诺沙星、四环素和多西环素全部敏感,对泰妙菌素全部耐药,对泰乐菌素、氟苯尼考和林可霉素的耐药率分别为88%,38%和50%。【结论】上述结果可为临床合理用药提供参考,临床治疗牛支原体感染时可优先使用敏感性较高的药物,如大观霉素、恩诺沙星、四环素和多西环素等,减少使用或避免使用耐药率高的药物,如泰妙菌素,泰乐菌素和林可霉素等。

关键词：牛支原体耐药性 CCU

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猫杯状病毒的分离鉴定及超变区基因序列分析

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中国预防兽医学报 2015年第11期37卷 885-887页

作者：刘春国刘永相刘大飞郭东春田进仇铮刘鑫蒋艳妹刘家森彭永刚李岩刘明曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江省青冈县畜牧兽医局黑龙江绥化151600

为了解猫杯状病毒(FCV)的生物学特性,本研究对猫体内分离到的一株FCV HRB-SS株进行了病毒学、分子生物学鉴定和遗传学分析。结果显示该分离株能够在猫肾细胞系(CRFK)中产生明显的细胞病变,形成蚀斑。FCV的VP1基因超变区核苷酸序列分析... 详细信息

为了解猫杯状病毒(FCV)的生物学特性,本研究对猫体内分离到的一株FCV HRB-SS株进行了病毒学、分子生物学鉴定和遗传学分析。结果显示该分离株能够在猫肾细胞系(CRFK)中产生明显的细胞病变,形成蚀斑。FCV的VP1基因超变区核苷酸序列分析结果显示,HRB-SS分离株与疫苗株CVXPOLYCAP同源性最高,为78.2%,而与中国分离株CH-JL和GD的同源性最低,仅为67.9%和68.8%;推导氨基酸序列分析结果显示,HRB-SS分离株与12Q087-5、UTCVM-NH12和FCLF4的同源性最高,为86.7%,而与中国分离株的同源性仅为73.9%。系统发育树分析结果显示,HRB-SS分离株与中国分离株亲缘关系较远。本研究结果表明,FCV HRB-SS与我国FCV具有不同的遗传起源。

关键词：猫杯状病毒分离鉴定超变区序列分析

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A组猪轮状病毒NSP3蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第4期37卷 295-298页

作者：谷凤丽石达时洪艳陈建飞张鑫袁婧徐天董慧冯力东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪消化道团队黑龙江哈尔滨150001 沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110866

为制备A组猪轮状病毒(Po RV)非结构蛋白NSP3的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究将原核表达、纯化的重组NSP3蛋白(r NSP3)免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞进行融合,经间接ELISA法筛选,得到一株能够稳定分泌抗Po RV(... 详细信息

为制备A组猪轮状病毒(Po RV)非结构蛋白NSP3的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究将原核表达、纯化的重组NSP3蛋白(r NSP3)免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞进行融合,经间接ELISA法筛选,得到一株能够稳定分泌抗Po RV(G9)的杂交瘤细胞株(5B8)。MAb鉴定结果显示其抗体亚类为Ig G1型;MAb细胞培养上清液效价为1∶103,western blot及间接免疫荧光结果表明该株MAb能够与Po RV反应。对NSP3蛋白进行截短表达,采用western blot试验确定所获得的MAb识别的抗原表位区域序列为290QDYD RTFL297。该MAb的制备为进一步研究NSP3蛋白的结构和功能奠定了良好的基础。

关键词： A组猪轮状病毒 NSP3蛋白单克隆抗体抗原表位

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A群轮状病毒NSP5蛋白在细胞器中定位特性

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中国预防兽医学报 2015年第2期37卷 143-145页

作者：谷凤丽石达时洪艳陈建飞张鑫袁婧徐天董慧冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪消化道团队黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110866

为研究A组猪轮状病毒(Po RV)非结构蛋白NSP5在MA-104细胞中的定位情况,本研究将NSP5蛋白基因克隆于表达载体p EGFP-C2中构建重组质粒p EGFP-NSP5,将其转染于MA-104细胞中进行NSP5瞬时表达,并于转染48 h后利用激光共聚焦显微镜分析NSP5... 详细信息

为研究A组猪轮状病毒(Po RV)非结构蛋白NSP5在MA-104细胞中的定位情况,本研究将NSP5蛋白基因克隆于表达载体p EGFP-C2中构建重组质粒p EGFP-NSP5,将其转染于MA-104细胞中进行NSP5瞬时表达,并于转染48 h后利用激光共聚焦显微镜分析NSP5表达蛋白在细胞中的定位情况。结果表明,表达蛋白在MA-104细胞中的线粒体、内质网、高尔基体中均有分布,主要定位于细胞质。本研究为进一步分析病毒的复制和致病机理提供依据。

关键词： A组猪轮状病毒 NSP5蛋白 MA-104细胞共定位

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地塞米松对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染仔猪的影响

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中国预防兽医学报 2015年第8期37卷 590-594页

作者：佟杰王刚于颖张冲常亚飞刘永刚涂亚斌汤艳东姜成刚王淑杰蔡雪辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 西北农林科技大学动物医学学院陕西杨凌712100 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

为研究地塞米松（DEx）对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP—PRRSV）感染仔猪造成的免疫系统和呼吸系统损伤的影响，本实验在断奶仔猪感染HP-PRRSVHuN4株前后，肌肉注射不同剂量的DEX。观察临床症状，检测其免疫系统相关指标的变化... 详细信息

为研究地塞米松（DEx）对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP—PRRSV）感染仔猪造成的免疫系统和呼吸系统损伤的影响，本实验在断奶仔猪感染HP-PRRSVHuN4株前后，肌肉注射不同剂量的DEX。观察临床症状，检测其免疫系统相关指标的变化。结果显示：不同剂量DEX注射组实验猪均表现典型临床症状，虽然其外周血中的促炎性细胞因子IL-1β、IL-6及TNF—d水平降低，CD4＋CD8‘T淋巴细胞亚群比例较HuN4单独感染组升高，CD8＋CD4-T细胞比例较HuN4单独感染组降低，但DEX注射组仔猪体温始终维持在40℃-42℃，肺部、胸腺和淋巴组织病变加重，死亡率达到100％（10／10），而HuN4单独感染组仔猪死亡率仅为25％（1／4）。表明DEX对HP—PRRSV感染的断奶仔猪虽具有一定的抑制炎症反应作用，但加重了HP-PRRSV感染的不利影响。本研究为全面防控HP—PRRSV提供新的实验依据。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸系统综合征病毒地塞米松促炎性细胞因子

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Gln对鸭瘟感染鸭十二指肠免疫调节相关基因表达量的影响

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实验动物科学 2015年第3期32卷 10-12,43页

作者：张圆圆赵丽丽王蕾牛银杰韩凌霞刘胜旺陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学团队哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽呼吸道病创新团队哈尔滨150001

目的为谷氨酰胺(Glutamine,Gln)在正常鸭及鸭瘟(Duck plague,DP)模型中对肠道功能及作用途径的研究提供依据。方法 280只无特定病原体(Specific pathogen free,SPF)7日龄雏鸭随机分为8组,四组梯度剂量每天灌喂Gln(0、0.5、1、2 g/kg饲料... 详细信息

目的为谷氨酰胺(Glutamine,Gln)在正常鸭及鸭瘟(Duck plague,DP)模型中对肠道功能及作用途径的研究提供依据。方法 280只无特定病原体(Specific pathogen free,SPF)7日龄雏鸭随机分为8组,四组梯度剂量每天灌喂Gln(0、0.5、1、2 g/kg饲料)6d,及另四组灌喂同等梯度剂量Gln 6 d,于第一天灌喂30 min后攻0.2 m L2000TCID50鸭瘟病毒,观察Gln对正常雏鸭的免疫促进作用及攻毒鸭免疫应激的缓解作用。测定Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)通路基因表达量。结果 Gln显著提高正常组TLR4通路mRNA表达量(P<0.05),显著降低攻毒组表达量(P<0.05)。结论 Gln通过TLR4通路提高正常雏鸭肠道的免疫力,降低鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)造成的肠道免疫损伤。

关键词：谷氨酰胺鸭鸭瘟十二指肠 TLR4通路

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一株致病性血清2型猪链球菌的多位点序列分型及其灭活后对小鼠的免疫保护效果评价

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中国预防兽医学报 2015年第1期37卷 57-61页

作者：高明明王淑杰金家民刘永刚陶冶李爱东张璐李莉姜成刚王刚申红蔡雪辉石河子大学动物科技学院新疆石河子832000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断及技术服务中心黑龙江哈尔滨150001 动物用生物制品国家工程研究中心黑龙江哈尔滨150001

为鉴定一株2012年分离自广东省的致病菌并评价其免疫原性,本研究对该分离株进行分型鉴定和MSLT分型分析。鉴定结果显示,该分离株为血清2型猪链球菌(***);其MSLT分型为ST1型,等位基因图谱是1、1、1、1、1、1、1,与高致病性的世界流行株P... 详细信息

为鉴定一株2012年分离自广东省的致病菌并评价其免疫原性,本研究对该分离株进行分型鉴定和MSLT分型分析。鉴定结果显示,该分离株为血清2型猪链球菌(***);其MSLT分型为ST1型,等位基因图谱是1、1、1、1、1、1、1,与高致病性的世界流行株P1/7同型;毒力基因型为Mrp+/Ef+/Sly+,将其命名为GD。进一步使用GD灭活菌以3×108cfu剂量3次免疫小鼠,免疫后分别采用GD,7型、9型*** WH和ZD进行攻毒试验。动物试验结果显示,免疫后小鼠抗体水平显著升高;对GD、WH和ZD的保护率分别为87.5%、87.5%和75%;免疫组小鼠血液和脏器内的细菌载量均显著低于对照组,而且无明显病变。本研究结果表明,GD灭活疫苗可以对不同血清型***攻毒提供有效的免疫保护,可以作为预防***病的有效灭活疫苗候选株。

关键词：猪链球菌 MLST分型分析灭活疫苗免疫保护

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B19单倍型鸡BNK蛋白单克隆抗体的制备

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实验动物科学 2015年第3期32卷 1-5页

作者：吴少莲彭蔚宇王兴童文辉强廉传江陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

目的体外构建稳定表达鸡自然杀伤细胞(Natural killer,NK)BNK蛋白的细胞系,制备BNK蛋白的单克隆抗体,为鸡BNK蛋白及NK细胞的研究提供便利。方法利用BNK19原核表达产物免疫BALB/c小鼠,体外稳定表达疫病敏感性B19单倍型鸡BNK蛋白(BNK19)... 详细信息

目的体外构建稳定表达鸡自然杀伤细胞(Natural killer,NK)BNK蛋白的细胞系,制备BNK蛋白的单克隆抗体,为鸡BNK蛋白及NK细胞的研究提供便利。方法利用BNK19原核表达产物免疫BALB/c小鼠,体外稳定表达疫病敏感性B19单倍型鸡BNK蛋白(BNK19)的真核细胞系筛选单克隆抗体。结果用稳定表达BNK蛋白的真核细胞系筛选到2株BNK19特异性单克隆抗体。结论获得的单克隆抗体经鉴定具有免疫学活性,为鸡BNK蛋白及NK细胞的作用机制研究提供了条件。

关键词： B19单倍型鸡 BNK 单克隆抗体

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G2系和G5系鸡感染马立克氏病毒早期细胞因子转录水平的变化

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中国预防兽医学报 2015年第12期37卷 957-961页

作者：蔡文博吴少莲彭蔚宇王丽廷陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学团队黑龙江哈尔滨150001 常州市金坛区动物疫病预防控制中心江苏常州213200 山西农业大学动物科技学院山西太谷030801

为研究主要组织相容性抗原(MHC)不同的G2系和G5系鸡在感染马立克氏病毒(MDV)后立即早期病毒复制及细胞因子转录水平的动态变化,本实验对14日龄G2和G5系SPF鸡滴鼻接种超强毒(vv MDV)Md5株,以28S r RNA基因为内参,利用双重荧光定量RT-PCR(... 详细信息

为研究主要组织相容性抗原(MHC)不同的G2系和G5系鸡在感染马立克氏病毒(MDV)后立即早期病毒复制及细胞因子转录水平的动态变化,本实验对14日龄G2和G5系SPF鸡滴鼻接种超强毒(vv MDV)Md5株,以28S r RNA基因为内参,利用双重荧光定量RT-PCR(dq RT-PCR)方法对接种后4 h、24 h、48 h和96 h肺淋巴细胞、脾脏和外周血淋巴细胞(PBL)中MDV meq、IFN-γ、IL-18、IL-4和IL-10的m RNA含量进行检测。结果显示,接种后96 h仅在两品系感染鸡的肺淋巴细胞和脾脏中检测到了meq m RNA,G2系鸡群肺淋巴细胞中病毒m RNA含量高于G5系,但脾脏中较低。96 h肺淋巴细胞和脾脏中IFN-γ、IL-4和IL-10转录水平大幅上调,并且G2系鸡群均略高于G5。本研究结果提示G2系对MDV的抵抗能力强于G5,这两种品系鸡感染MDV后可能主要启动以Th2型为主的细胞免疫反应,为研究MDV对不同MHC单倍型鸡的致病性提供了实验依据。

关键词：马立克氏病毒 IFN-γ IL-18 IL-4 IL-10

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传染性法氏囊病病毒VPP5酵母双杂交诱饵载体的构建及互作宿主细胞蛋白的筛选

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中国家禽 2015年第3期37卷 22-26页

作者：王念张礼洲陈玉明卢珍高立高玉龙王永强高宏雷刘长军崔红玉李凯王笑梅祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

VP5蛋白是传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)编码的一种非结构蛋白,在病毒感染、释放、致病性方面起着重要作用。为了研究VP5蛋白与宿主细胞的相互作用,本试验首先将IBDV VP5基因克隆入p GBKT7,构建诱饵载体p G... 详细信息

VP5蛋白是传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)编码的一种非结构蛋白,在病毒感染、释放、致病性方面起着重要作用。为了研究VP5蛋白与宿主细胞的相互作用,本试验首先将IBDV VP5基因克隆入p GBKT7,构建诱饵载体p GBGt VP5,通过自激活试验证明其没有自激活活性,对酵母细胞没有毒性。然后,运用酵母双杂交技术,从鸡胚成纤维细胞(CEF)c DNA文库中筛选与VP5互作蛋白,经初筛、测序和回转验证,获得5个互作宿主细胞蛋白,为进一步深入研究IBDV VP5与宿主互作的效应和机制奠定基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒 VP5蛋白酵母双杂交诱饵载体互作蛋白

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