检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：杜文娟王一平黄立平危艳武陈冬杰孙建慧吴洪丽冯力刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

引言伪狂犬病病毒（PRV）是引起伪狂犬病的主要病原。伪狂犬病广泛存在于世界范围内的猪场中,给养猪业造成巨大的经济损失,不同年龄段的感染猪临床症状不同。PRV UL42蛋白,又被称为DNA的辅助性亚基,由PRV的UL42基因编码,在RRV的复制过... 详细信息

引言伪狂犬病病毒（PRV）是引起伪狂犬病的主要病原。伪狂犬病广泛存在于世界范围内的猪场中,给养猪业造成巨大的经济损失,不同年龄段的感染猪临床症状不同。PRV UL42蛋白,又被称为DNA的辅助性亚基,由PRV的UL42基因编码,在RRV的复制过程中发挥重要的作用。关于UL42蛋白的体外作用,在1995年已经有所报道。而到目前为止,关于PRV UL42蛋白的B细胞的抗原表位仍未见有报道。在本研究中,我们制备了6株针对PRV UL42蛋白的单抗,利用这些单抗,希望能对UL42蛋白在PRV复制过程中的亚细胞定位进行描述并能从感染PRV的PK-15细胞中将UL42蛋白沉淀出来以方便研究与UL42相互作用的蛋白。从而达到利于UL42功能研究的目的。方法利用原核表达系统表达了UL42蛋白,将其免疫6周龄的BALB/c小鼠,经过细胞融合和亚克隆,成功的筛选到6株能够稳定分泌UL42抗体的杂交瘤细胞。利用这些单抗,通过Western Blotting和间接ELISA方法,鉴定出了三个不同的抗原表位。利用DNA star软件对所鉴定的三个不同的抗原表位的保守性和特异性进行分析。通过间接免疫荧光方法对UL42蛋白的亚细胞定位进行描述,利用免疫共沉淀将UL42蛋白从感染PRV的PK-15细胞中沉淀出来,利用IPMA建立了一种新的测定PRV梯度的方法。结果 SDS-PAGE和Western Blotting结果表明UL42蛋白获得了正确表达。将切胶纯化的蛋白免疫6-8周龄的BALB/c小鼠,成功筛选到6株UL42的单抗。通过Western Blotting和间接ELISA方法,鉴定出了UL42蛋白的三个不同的线性抗原表位,其中SGGVLDALK位于UL42的N端,KRPAAPR和RMYTPIAAK位于UL42的C端。序列比对发现,三个抗原表位在不同的PRV毒株间具有很高的保守性,而在疱疹病毒属的其它成员所对应的部分中有较高的特异性。间接免疫荧光表明UL42蛋白在PRV的复制中定位于细胞核中。免疫共沉淀表明这些单抗能够将UL42从感染PRV的PK-15细胞中沉淀出来。所建立的检测PRV梯度的IPMA方法比传统的只观察细胞病变的方法有更高的敏感性且更容易观察。结论所鉴定的三个不同的抗原表位中,其中一个位于UL42蛋白的N端,另两个位于UL42蛋白的C端,这种现象和同属于疱疹病毒属的人的单纯疱疹病毒1型的UL42蛋白的抗原表位相似。而序列比对发现这些抗原表位在不同的PRV毒株间保守性很高,这将有利于建立以抗原表位为基础的PRV的诊断方法。这些单抗能够被应用于UL42蛋白功能的研究中,比如对UL42蛋白的核定位,发现UL42定位于细胞核中,这从侧面反映了UL42蛋白作为DNA聚合酶的辅助因子的作用。此外我们还可以利用这些单抗将UL42蛋白从感染了PRV的细胞中沉淀出来,这对于研究与UL42蛋白相互作用的蛋白打下了基础。所建立的用于测定PRV病毒梯度的IPMA方法比传统的只看细胞病变的方法具有更高的敏感性和较易观察。这些单抗在PRV UL42蛋白的功能研究中将会是非常有用的工具。

关键词： PRV)UL42 保守性抗原表位伪狂犬病病毒单克隆抗体制备

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1型鸭肝炎病毒强毒株在雏鸭体内分布情况研究

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实验动物科学 2015年第3期32卷 13-15页

作者：赵丽丽刘海燕牛银杰祝明皓刘胜旺陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学团队哈尔滨150001 东北农业大学哈尔滨150001

目的利用建立的Taq荧光定量RT-PCR检测方法研究鸭肝炎病毒(DHV-1)强毒株在感染雏鸭体内早期的动态分布规律。方法本研究采用鸭肝炎病毒强毒株人工感染3日龄雏鸭,利用已建立的Taq荧光定量RT-PCR方法,对接种24 h内DHV-1强毒株感染雏鸭的... 详细信息

目的利用建立的Taq荧光定量RT-PCR检测方法研究鸭肝炎病毒(DHV-1)强毒株在感染雏鸭体内早期的动态分布规律。方法本研究采用鸭肝炎病毒强毒株人工感染3日龄雏鸭,利用已建立的Taq荧光定量RT-PCR方法,对接种24 h内DHV-1强毒株感染雏鸭的组织脏器进行了定量检测。结果接种后4 h即可在雏鸭心、肝、脑、肺、胰腺、回肠、盲肠、直肠、法氏囊和脾脏组织中检测到一定水平的病毒RNA,随着病程发展,RNA拷贝数持续升高,接种24 h后,肝脏中的病毒RNA拷贝数为最高,达到108.81copies/g,心、肺、肾、脾次之,约107copies/g。结论DHV-1强毒在雏鸭的早期感染雏鸭的实质器官、免疫器官和消化系统等均具有广泛的嗜性。

关键词：鸭肝炎病毒实时荧光定量PCR 雏鸭动态分布

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牛支原体及其脂质相关膜蛋白诱导胎牛肺细胞IL-1β表达的分子机制研究

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中国预防兽医学报 2015年第6期37卷 444-447页

作者：刘素丽汪洋李媛周玉梅高利萍邵佳日王琪陈莹辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物支原体病研究室黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 东北农业大学资源与环境学院黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为研究牛支原体(***)及其脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎牛肺(EBL)细胞IL-1β表达的分子机制,本研究首先以***及其LAMPs刺激EBL细胞,利用荧光定量PCR检测细胞因子IL-1β的动态变化;然后将融合表达的细胞p65(Rel A)蛋白和绿色荧光蛋白重组... 详细信息

为研究牛支原体(***)及其脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎牛肺(EBL)细胞IL-1β表达的分子机制,本研究首先以***及其LAMPs刺激EBL细胞,利用荧光定量PCR检测细胞因子IL-1β的动态变化;然后将融合表达的细胞p65(Rel A)蛋白和绿色荧光蛋白重组质粒p EGFP-p65转染EBL细胞,以LAMPs刺激EBL细胞,通过激光共聚焦观察p65的亚细胞分布。荧光定量PCR结果显示,***及其LAMPs能够诱导EBL细胞IL-1β的表达;而且LAMPs作用的最佳剂量为2μg/m L,最佳时间为12 h。同时,激光共聚焦试验检测到LAMPs能够诱导p65进入EBL细胞核中。上述实验结果表明LAMPs能够诱导EBL细胞中p65进入细胞核内,从而激活NF-κB信号通路,诱导IL-1β上调表达。

关键词：牛支原体脂质相关膜蛋白胎牛肺细胞 NF-κB信号通路 IL-1β IL-1β

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蓝舌病病毒1型衣壳蛋白VP2、VP5、VP7酵母双杂交诱饵质粒的构建及鉴定

蓝舌病病毒1型衣壳蛋白VP2、VP5、VP7酵母双杂交诱饵质粒的构建及...

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：张继凯孙恩成杨涛徐青元吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室

研究目的:蓝舌病（Bluetongue,BT）是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒引起的反刍动物虫媒（如库蠓、伊蚊等）传染病。蓝舌病病毒基因组由10个大小不同的双股RNA组成,分别编码7种结构蛋白（VP1P7）和4种非结构蛋白（NS1、NS2、NS3/N... 详细信息

研究目的:蓝舌病（Bluetongue,BT）是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒引起的反刍动物虫媒（如库蠓、伊蚊等）传染病。蓝舌病病毒基因组由10个大小不同的双股RNA组成,分别编码7种结构蛋白（VP1P7）和4种非结构蛋白（NS1、NS2、NS3/NS3A、NS4）。其中VP2蛋白由L2基因（2900bp左右）编码,以三聚体的形式存在;VP5蛋白是由M6基因（1639bp）编码,也以三聚体形式存在,VP5蛋白比较保守,是BTV的另一个型特异性抗原,它与VP2共同决定BTV的血清型;VP7蛋白

关键词：壳蛋白酵母双杂交 VP2 VP5 VP7

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蓝舌病病毒新型NS4蛋白的亚细胞定位分析及其功能预测

蓝舌病病毒新型NS4蛋白的亚细胞定位分析及其功能预测

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：吕爽杨涛徐青元孙恩成张继凯吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室

研究目的:蓝舌病(Bluetongue,BT)是由蓝舌病病毒BTV引起的反刍动物绵羊等的虫媒传染病。NS4是新发现的BTV的一种非结构蛋白,位于S9基因上,与VP6的ORF相重叠,实验证实其是复制非必需蛋白,具有非典型核定位信号,在干扰素应答适应性中扮演... 详细信息

研究目的:蓝舌病(Bluetongue,BT)是由蓝舌病病毒BTV引起的反刍动物绵羊等的虫媒传染病。NS4是新发现的BTV的一种非结构蛋白,位于S9基因上,与VP6的ORF相重叠,实验证实其是复制非必需蛋白,具有非典型核定位信号,在干扰素应答适应性中扮演着重要角色[1]。但对于NS4的研究刚刚起步,信息仍然十分匮乏,本文进一步探究了NS4的亚细胞定位并预测了其功能结构,为深

关键词：亚细胞定位 NS4 核定位信号功能预测

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禽流感病毒通用型RT-LAMP快速检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2015年第5期37卷 383-386页

作者：石霖王秀荣孙阮洋李雁冰程荣华于学武曹东薛树山赵培徐晓龙马勇郑世民东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 辽宁省动物疫病预防控制中心辽宁沈阳110164 吉林省畜牧兽医科学研究院吉林长春130062

为建立一种禽流感病毒（AIV）的快速检测方法,本研究根据环介导等温扩增技术（LAMP）原理,设计了针对AIV M基因4个不同区段的特异性引物,并对反应条件和反应体系进行优化,建立了AIV的RT-LAMP方法。结果表明,该方法对AIV H1~H16亚型的检... 详细信息

为建立一种禽流感病毒（AIV）的快速检测方法,本研究根据环介导等温扩增技术（LAMP）原理,设计了针对AIV M基因4个不同区段的特异性引物,并对反应条件和反应体系进行优化,建立了AIV的RT-LAMP方法。结果表明,该方法对AIV H1~H16亚型的检测结果均为阳性,而对其他禽类病毒的扩增均为阴性,具有良好的特异性。对AIV的最低检测限为13.43 EID50/m L,灵敏度为普通一步RT-PCR的10倍;扩增反应可以在恒温水浴内60 min内完成;在反应体系中添加荧光染料后,肉眼即可判定检测结果。该检测方法与RT-PCR方法和荧光定量RT-PCR方法对临床样品检测的符合率均为81.8%。该方法能够简便、快速、灵敏、特异地检测AIV。

关键词：禽流感 RT-LAMP 诊断方法

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禽网状内皮组织增生病流行现状及防控

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中国家禽 2015年第1期37卷 1-4页

作者：邓小芸祁小乐李凯胡峰高玉龙高宏雷王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江职业学院黑龙江哈尔滨150111 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

禽网状内皮组织增生病(RE)是危害养禽业的一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,禽网状内皮组织增生病病毒(REV)感染范围不断扩大,已证明野鸟也能够携带该病毒。免疫抑制、混合感染、基因整合使得该病的防控形势日趋严峻。目前,生... 详细信息

禽网状内皮组织增生病(RE)是危害养禽业的一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,禽网状内皮组织增生病病毒(REV)感染范围不断扩大,已证明野鸟也能够携带该病毒。免疫抑制、混合感染、基因整合使得该病的防控形势日趋严峻。目前,生物制品的污染已经不是该病传播的主要原因,REV已经从早期的种源性病毒演变成了在自然界广泛存在的病原。通过疫苗免疫将该病控制到尽可能低的水平,进而进行REV的种群净化,是防控该病的科学策略。

关键词：禽网状内皮组织增生病流行免疫抑制混合感染亚单位疫苗

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二株鸭源H11N9亚型禽流感病毒的遗传进化及致病性分析

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动物医学进展 2015年第2期36卷 30-33页

作者：谭丹黄建龙王昌建何世成王卫国唐小明朱春霞范仲鑫汪洪冰刘道新邓国华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 长沙市动物疫病预防控制中心湖南长沙410006 湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙410129

为了解从湖南省洞庭湖区鸭群中分离的2株H11N9亚型禽流感病毒变异特点、进化规律及生物学特性,本研究对2株H11N9亚型禽流感病毒的HA、NA序列进行同源性和遗传进化分析,并用2株毒株对SPF鸡进行致病性试验。结果显示,本试验分离到2株H11N... 详细信息

为了解从湖南省洞庭湖区鸭群中分离的2株H11N9亚型禽流感病毒变异特点、进化规律及生物学特性,本研究对2株H11N9亚型禽流感病毒的HA、NA序列进行同源性和遗传进化分析,并用2株毒株对SPF鸡进行致病性试验。结果显示,本试验分离到2株H11N9亚型禽流感毒株的HA裂解位点均没有多个连续的碱性氨基酸插入,属于低致病性毒株;HA基因的受体结合位点均非常保守,具有典型的禽源性特征;NA基因序列与在周边国家野鸟中分离的H11N9亚型毒株的氨基酸同源性较高;鼻腔接种SPF鸡后,均能使鸡感染并通过喉头或泄殖腔排毒,但感染的鸡均不表现明显的临床症状,并且不能使同居鸡感染排毒。

关键词： H11N9亚型禽流感遗传进化致病性

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猪细小病毒基因组特性的研究

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猪业科学 2015年第4期32卷 100-101页

作者：王正阳罗亚坤吕世明崔尚金贵州大学动物科技学院药理实验室贵州贵阳550025 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

猪细小病毒（PPV）属于细小病毒科细小病毒属的成员。猪细小病毒病是由PPV引起的以胚胎和胎儿感染及死亡而母体本身无明显症状的一种母猪繁殖障碍性传染病。1967年，Carteright等对猪的不孕、流产、死产等进行病原学研究时首次报道了本... 详细信息

猪细小病毒（PPV）属于细小病毒科细小病毒属的成员。猪细小病毒病是由PPV引起的以胚胎和胎儿感染及死亡而母体本身无明显症状的一种母猪繁殖障碍性传染病。1967年，Carteright等对猪的不孕、流产、死产等进行病原学研究时首次报道了本病，并从猪的流产胎儿中分离到PPV。目前，此病在世界范围内广泛流行，是造成母猪繁殖障碍的主要病因之一。

关键词：猪细小病毒病基因组特性母猪繁殖障碍流产胎儿世界范围 PPV 传染病病原学

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猫杯状病毒新型变异株的遗传特征分析

猫杯状病毒新型变异株的遗传特征分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：刘春国刘永相刘大飞郭东春田进李志杰刘家森曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室东北农业大学动物医学院

猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)是杯状病毒科、水疱疹病毒属成员之一,也是感染猫的重要病原之一,能够导致猫发生一系列严重的临床症状。FCV基因组包含一个单股正链RNA,极易产生遗传和抗原变异,这也是导致FCV毒力差异和疫苗免疫失... 详细信息

猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)是杯状病毒科、水疱疹病毒属成员之一,也是感染猫的重要病原之一,能够导致猫发生一系列严重的临床症状。FCV基因组包含一个单股正链RNA,极易产生遗传和抗原变异,这也是导致FCV毒力差异和疫苗免疫失败的基础。因此,对FCV基因组进行分析具有重要意义。为了解FCV的生物学特性,本研究对患有严重结膜炎的猫体内分离到的一株FCV HRB SS株进行了分离鉴定和遗传分析。结果表明HRB SS株全长基因组除了poly(A)共由7705 nt组成。编码两个大的ORF:ORF1(nt20-5311)和ORF2(nt 5312-7318),以及一个小的ORF3(nt7315-7638)。HRB SS株5'和3'非编码区分别由19nt和67nt组成。此外,HRB SS株在基因组3'端有24nt插入,与韩国分离株12Q087-1和12Q087-5相似,而中国分离株GD与F9疫苗株则保持相同的基因组形式。该片段的插入对病毒的意义如何将有待于进一步研究。基因组核苷酸序列分析结果表明FCVHRB SS株与1874株同源性最高,为80.3%,而与中国分离株GD的同源性最低,仅为76.6%。VP1超变区核苷酸序列分析发现,HRB SS株与疫苗株CVXPOLYCAP的同源性最高,为78.2%,而与中国分离株CH-JL和GD的同源性最低,仅为67.9%和68.8%。推导的超变区氨基酸序列分析结果显示,HB SS与12Q087-5、UTCVM-NH12和FCLF4的同源性最高,为86.7%,而与中国分离株的同源性仅为73.9%。系统发育树分析结果表明FCV HRB SS株基因组核苷酸序列与FCV/DD/2006/GE(德国)和UTCVM-H2(美国)的亲缘关系最近,并与美国分离株Urbana、1874和5789处于同一进化分支。而与疫苗株F9处于不同的进化分支。本研究结果表明,FCV HRB SS分离株为一株新型变异株,并与我国FCV具有不同的遗传起源。

关键词：猫杯状病毒变异株遗传特征超变区

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