检索结果-内蒙古大学图书馆

禽网状内皮组织增殖病病毒SYBR GreenⅠ实时荧光PCR检测方法的建立

黑龙江农业科学 2015年第4期 47-52页

作者：牛秀杰赵妍薛美王云峰东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了探究禽网状内皮组织增殖病的快速检测方法,根据禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)LTR和gag基因的保守区域各设计并合成一对引物,建立检测插入感染与全病毒感染的SYBR Green I模式的实时荧光PCR方法(Real-time PCR)。以pMD-LTR,pMD-gag... 详细信息

为了探究禽网状内皮组织增殖病的快速检测方法,根据禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)LTR和gag基因的保守区域各设计并合成一对引物,建立检测插入感染与全病毒感染的SYBR Green I模式的实时荧光PCR方法(Real-time PCR)。以pMD-LTR,pMD-gag重组质粒为标准品建立标准曲线,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行评价。结果表明:该方法线性关系良好;敏感性能检测到10拷贝标准品;能特异性检测REV样品,不与其它禽相关病原发生交叉反应;板内、板间重复试验的变异系数均低于3%。应用该方法对人工感染REV的鸡的心、肝、脾、肺、肾、盲肠扁桃体、腺胃和法氏囊进行初步检测,结果显示法式囊中的含量最高。

关键词： SYBR GreenⅠ 实时荧光PCR 禽网状内皮增殖病毒 gag基因 LTR基因

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猫杯状病毒新型变异株的遗传特征分析

猫杯状病毒新型变异株的遗传特征分析

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第十一届全国病毒学学术研讨会暨第六届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：刘春国刘永相刘大飞郭东春田进李志杰刘家森曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所自然疫源性人兽共患病团队兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨 150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所自然疫源性人兽共患病团队兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001

猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)是杯状病毒科、水疱疹病毒属成员之一,也是感染猫的重要病原之一,能够导致猫发生一系列严重的临床症状.FCV基因组包含一个单股正链RNA,极易产生遗传和抗原变异,这也是导致FCV毒力差异和疫苗免疫失败... 详细信息

猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)是杯状病毒科、水疱疹病毒属成员之一,也是感染猫的重要病原之一,能够导致猫发生一系列严重的临床症状.FCV基因组包含一个单股正链RNA,极易产生遗传和抗原变异,这也是导致FCV毒力差异和疫苗免疫失败的基础.因此,对FCV基因组进行分析具有重要意义.

关键词：猫杯状病毒变异株遗传特征超变区

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5株水禽细小病毒全基因组序列分析

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畜牧兽医学报 2014年第11期45卷 1837-1843页

作者：贺亦龙邵周伍林白小飞张云中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

利用PCR技术扩增鹅细小病毒(GPV)ZJ、G3和LJY毒株与番鸭细小病毒(MDPV)DK和DYL毒株全基因组。序列分析结果表明,除LJY毒株非结构基因(NS)编码626个氨基酸外,其余4株NS全长1 884bp,编码627个氨基酸;5株的结构基因(VP)全长均为2 199bp,编... 详细信息

利用PCR技术扩增鹅细小病毒(GPV)ZJ、G3和LJY毒株与番鸭细小病毒(MDPV)DK和DYL毒株全基因组。序列分析结果表明,除LJY毒株非结构基因(NS)编码626个氨基酸外,其余4株NS全长1 884bp,编码627个氨基酸;5株的结构基因(VP)全长均为2 199bp,编码732个氨基酸。GPV、MDPV NS蛋白不同毒株之间相似性分别为95.9%~99.8%和96.8%~99.0%;而GPV与MDPV NS蛋白之间相似性为88.9%~90.4%。GPV、MDPV VP蛋白不同毒株之间的相似性分别为90.2%~100.0%和96.9%~99.3%,而GPV与MDPV VP蛋白之间的相似性为79.5%~81.6%,表明GPV抗原性不同于MDPV。MDPV与GPV NS蛋白均含有4个潜在的糖基化位点;在结构蛋白区域,MDPV VP含有8个潜在的糖基化位点,而GPV为6个糖基化位点,G3与LJY毒株分别缺失582—584NTT和703—705NRT潜在的糖基化位点。5株水禽细小病毒的进化分析表明,GPV、MDPV在进化上形成两个独立的分支,各个基因片段之间未发生重组。

关键词：鹅细小病毒番鸭细小病毒 NS基因 VP基因序列分析

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猪源肠球菌新型非接合转移质粒携带lsa(E)基因

猪源肠球菌新型非接合转移质粒携带lsa(E)基因

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：张万江董志民王秋东华欣刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队吉林农业大学动物科学技术学院

【目的】获得携带lsa(E)基因肠球菌新型接合转移质粒pY13的全核酸序列,并分析lsa(E)基因在其他肠球菌中的遗传背景和传播方式。【方法】2013年从猪场分离到7猪lsa(E)阳性肠球菌菌(粪肠球菌n=5,屎肠球菌n=1,鸡肠球菌n=1),通过S1-PFGE、So... 详细信息

【目的】获得携带lsa(E)基因肠球菌新型接合转移质粒pY13的全核酸序列,并分析lsa(E)基因在其他肠球菌中的遗传背景和传播方式。【方法】2013年从猪场分离到7猪lsa(E)阳性肠球菌菌(粪肠球菌n=5,屎肠球菌n=1,鸡肠球菌n=1),通过S1-PFGE、Southem杂交、电击转化和重叠PCR等方法对lsa(E)基因的定位和基因环境进行分析;同时采用454 GS-FLX测序仪对pY13质粒进行序列全测定。【结果】最终获得了一个来自屎肠球菌全长为28489bp的pY13质粒。序列分析显示,pY13质粒携带一个新型的耐药簇,该耐药簇包含lnu(B)、lsa(E)、spw、aadE、aphA3和两个拷贝的erm(B)基因。含有该耐药基因簇的质粒可介导林克酰胺类、大环内酯类、截断侧耳素、链阳菌素、壮观霉素和卡那霉素/新霉素等药物耐药。序列分析结果显示,在耐药基因簇的形成过程中插入元件ISEfa8和IS1256可能发挥了作用。另外,以pY13质粒为模板设计了9对重叠引物,对其他6株lsa(E)基因阳性菌进行PCR扩增,结果证实这6株菌携带的lsa(E)基因均位于pY13类似质粒上。【结论】首次获得了携带lsa(E)的肠球菌质粒pY13,虽然为非接合转移性质粒,但该类型的质粒仍然在多重耐药基因簇的传播中发挥了重要作用。

关键词：耐药基因肠球菌接合转移 lsa

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肠炎沙门氏菌三种主要毒力岛基因缺失株的构建及其免疫效力研究

肠炎沙门氏菌三种主要毒力岛基因缺失株的构建及其免疫效力研究

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第十届全国免疫学学术大会

作者：吕雪莲周薇刘松艳曹俊张童利王曼宇刘思国于申业中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院

目的 :沙门氏菌病属于重要的食源性致病菌之一,经常通过污染的水和食物引起人类疾病。沙门氏菌的致病性与其毒力岛基因密切相关。因此,构建沙门氏菌单个或多个毒力岛的基因缺失株,并评估这些毒力岛对沙门氏菌致病性的影响以及在鸡体内... 详细信息

目的 :沙门氏菌病属于重要的食源性致病菌之一,经常通过污染的水和食物引起人类疾病。沙门氏菌的致病性与其毒力岛基因密切相关。因此,构建沙门氏菌单个或多个毒力岛的基因缺失株,并评估这些毒力岛对沙门氏菌致病性的影响以及在鸡体内诱导免疫应答变化是非常重要的。方法 :本实验利用改进的Red同源重组系统成功构建SPI-1、SPI-2、SPI-3三种主要毒力岛的单缺失、双缺失及三缺失菌株。结果 :敲除SPI-1后的单缺失、双缺失和三缺失菌株的侵袭力均下降,而其他缺失菌株和野生菌株相比侵袭能力差别不大;所有缺失株对细胞的粘附力均显著低于野生菌株(P<0.001)。将上述毒力岛缺失株分别接种7日龄SPF鸡,评价缺失株的致病力、定殖能力以及对鸡只的免疫效力。结果表明,毒力岛缺失菌株可以在肝脏、脾脏和盲肠中定殖,但不会引起鸡只发病,且SM6ΔSPI-1-3在脾脏和肝脏中的定殖效率低于SM6,接种第8天即被机体迅速清除;毒力岛缺失菌株产生的抗体均处于较高水平;毒力岛缺失菌株免疫后机体CD4+T和CD8+T亚群的均有明显变化。免疫后检测血清中IL-4和IFN-γ的细胞因子水平也有上升趋势,并且病理学结果表明鸡只无明显的病理改变。结论 :毒力岛缺失菌株中SM6ΔSPI-1-3有较好的免疫效果及保护效率。三种主要毒力岛缺失菌株的成功构建为阐明肠炎沙门氏菌致病机制和研发安全有效的减毒活疫苗载体奠定了良好的基础。

关键词：肠炎沙门氏菌毒力岛免疫效力活疫苗载体

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猪链球菌乳酸脱氢酶基因的原核表达及重组蛋白的反应原性研究

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石河子大学学报（自然科学版） 2015年第2期33卷 188-191页

作者：高明明王淑杰王俊金家民张璐刘永刚李爱东陶冶李莉姜成刚王刚申红石河子大学动物科技学院石河子832003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断及技术服务中心哈尔滨150001 北京市畜牧总站北京100107

为了验证双向电泳筛选出的7型猪链球菌WH分离株免疫相关蛋白乳酸脱氢酶的反应原性,本实验采用克隆表达的方法对其进行研究。根据质谱鉴定的NCBI登录号查找乳酸脱氢酶基因序列,并设计特异性引物,对乳酸脱氢酶基因进行扩增,克隆入p ET30a... 详细信息

为了验证双向电泳筛选出的7型猪链球菌WH分离株免疫相关蛋白乳酸脱氢酶的反应原性,本实验采用克隆表达的方法对其进行研究。根据质谱鉴定的NCBI登录号查找乳酸脱氢酶基因序列,并设计特异性引物,对乳酸脱氢酶基因进行扩增,克隆入p ET30a载体,构建重组质粒p ET30a-LDH,测序后转化入大肠埃希氏菌中。用IPTG进行诱导重组菌,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。SDS-PAGE分析结果显示表达的重组融合蛋白相对分子量为41ku;Western blot分析结果显示该重组蛋白可与7型猪链球菌WH分离株多克隆抗体发生特异性血清学反应。这表明表达的重组LDH蛋白具有良好的反应原性,为预防和控制猪链球菌病提供有效的疫苗候选分子奠定基础。

关键词：猪链球菌乳酸脱氢酶反应原性原核表达

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2009-2011年环洞庭湖区主要活禽批发市场低致病禽流感监测情况

2009-2011年环洞庭湖区主要活禽批发市场低致病禽流感监测情况

引用

2015年中国微生物学会学术年会

作者：黄建龙王昌建邓国华谭丹范仲鑫何世成朱春霞汪洪冰刘道新湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙 410014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001 湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙 410014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001

目的了解环洞庭湖区主要活禽批发市场低致病性禽流感病毒的分布和流行情况,为该地区活禽批发市场低致病性禽流感的防控措施提供一些依据.方法对在活禽批发市场上采集的拭子样品先由尿囊腔接种SPF鸡胚,然后用血凝试验(HA)测定所收集的...

目的了解环洞庭湖区主要活禽批发市场低致病性禽流感病毒的分布和流行情况,为该地区活禽批发市场低致病性禽流感的防控措施提供一些依据.方法对在活禽批发市场上采集的拭子样品先由尿囊腔接种SPF鸡胚,然后用血凝试验(HA)测定所收集的尿囊液,对HA测定有滴度的再进行血凝抑制试验(HI)和RT-PCT方法相结合鉴定病毒的亚型.结果 2009年-2011年冬春季节,我们在环洞庭湖地区主要活禽批发市场上共分离到627株低致病性禽流感病毒,总的分离率为22.2％,其中鸭拭子低致病性禽流感病毒的分离率最高,达到24.6％,其次是鸡拭子,达到21.5％,鹅拭子为11％.在所监测的5家活禽批发市场中共分离到H3、H4、H6、H9、H10型和H11等6种亚型的低致病性禽流感病毒,其中H9、H6和H4亚型比较高,其分离率分别可达到11％、6.3％和3.4％.结论活禽批发市场中低致病性禽流感隐性带毒的情况普遍存在,其发生禽流感疫情的威胁较大.建议整顿规范市场经营管理,特别是要建立活禽交易市场定期休市制度.

关键词：

来源：评论

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H9N2亚型禽流感病毒疫苗候选株的构建

引用

中国预防兽医学报 2014年第7期36卷 571-573页

作者：王增冯华朋朱鹏阳邬丽曾显营邓国华施建忠陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为研制H9N2亚型禽流感病毒疫苗,本研究以具有良好抗原性的代表病毒株A/chicken/Hunan/S933/2008(H9N2)(HuN33)为HA和NA基因的供体,以A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)的6个内部基因为骨架,利用反向遗传操作技术,救获了一株重组H9N2亚型禽... 详细信息

为研制H9N2亚型禽流感病毒疫苗,本研究以具有良好抗原性的代表病毒株A/chicken/Hunan/S933/2008(H9N2)(HuN33)为HA和NA基因的供体,以A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)的6个内部基因为骨架,利用反向遗传操作技术,救获了一株重组H9N2亚型禽流感病毒疫苗候选株Re-9。该疫苗候选株既具有很好的抗原性又具有较高的鸡胚增殖特性,从而为有效防控H9N2亚型禽流感的流行提供了技术储备。

关键词： H9N2 禽流感病毒反向遗传疫苗候选株

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表达水疱性口炎病毒G基因重组新城疫病毒的构建及免疫原性研究

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中国预防兽医学报 2014年第4期36卷 255-259页

作者：李晓芳张敏敏葛金英温志远王喜军陈伟业步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

水疱性口炎是由水疱性口炎病毒（VSV）引起的人兽共患性传染病，在我国尚无可用疫苗。为研制安全有效的水疱性口炎疫苗，本研究以新城疫病毒（NDV）LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统为基础，构建并拯救出表达VSV糖蛋白（GP）的重组病毒... 详细信息

水疱性口炎是由水疱性口炎病毒（VSV）引起的人兽共患性传染病，在我国尚无可用疫苗。为研制安全有效的水疱性口炎疫苗，本研究以新城疫病毒（NDV）LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统为基础，构建并拯救出表达VSV糖蛋白（GP）的重组病毒（rLa-VSV-G）。间接免疫荧光、激光共聚焦、western blot等试验证明VSV-GP在重组病毒中正确表达；体外致病试验结果表明，rLa-VSV-G保持了LaSota亲本株的低致病性和高滴度的鸡胚生长特性；rLa-VSV-G接种4周龄～5周龄BALB／c雌性小鼠后，可以诱导显著的VSV中和抗体反应。本研究表明，重组病毒rLa-VSV—G具有作为防控VSV储备性疫苗的潜力。

关键词：水疱性口炎病毒糖蛋白重组新城疫病毒免疫原性

来源：评论

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鹅细小病毒鹅胚成纤维细胞适应病毒株的培育及序列分析

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中国预防兽医学报 2014年第11期36卷 898-900页

作者：邱娜刘明白小飞邵周伍林赵健张云中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为培育高滴度的鹅细小病毒(GPV)细胞适应病毒株,本研究将原代鹅胚成纤维细胞(GEF)进行连续传代培养,并传至31代次,传代的GEF具有典型的成纤维细胞形态,培养48 h后形成单层细胞。选取不同代次的GEF接种GPV YN分离株,并在GEF中连续传代至... 详细信息

为培育高滴度的鹅细小病毒(GPV)细胞适应病毒株,本研究将原代鹅胚成纤维细胞(GEF)进行连续传代培养,并传至31代次,传代的GEF具有典型的成纤维细胞形态,培养48 h后形成单层细胞。选取不同代次的GEF接种GPV YN分离株,并在GEF中连续传代至F20代,病毒滴度由102.5TCID50/0.1 m L达到106.16TCID50/0.1 m L,表明GPV已适应GEF,并在感染GEF后的72 h产生明显细胞病变。对细胞适应毒F20和亲本病毒F0代进行基因序列比对结果显示,F20与F0存在133个核苷酸差异位点,主要集中在5'和3'非编码区。氨基酸序列共出现22个变异位点,主要集中在VP3蛋白中。这些变异与病毒对细胞培养的适应过程有关,其机理有待进一步研究。

关键词：鹅细小病毒鹅胚成纤维细胞系病毒/细胞适应

来源：评论

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