检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2014年第8期36卷 593-596页

作者：高明崔红玉王笑梅王云峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为研究乳酸菌载体细胞表面锚定结合展示外源蛋白,本研究将禽流感病毒(AIV)H5N1亚型血凝素HA1基因克隆于pET-28a载体中,同时PCR扩增编码S-层蛋白的锚定区域基因Slap-C,并插入HA1基因下游构建重组表达质粒pET-HA1-Slap,转化于*** BL21中进... 详细信息

为研究乳酸菌载体细胞表面锚定结合展示外源蛋白,本研究将禽流感病毒(AIV)H5N1亚型血凝素HA1基因克隆于pET-28a载体中,同时PCR扩增编码S-层蛋白的锚定区域基因Slap-C,并插入HA1基因下游构建重组表达质粒pET-HA1-Slap,转化于*** BL21中进行HA1-Slap融合蛋白的表达,SDS-PAGE检测显示表达的HA1-Slap主要以包涵体形式存在。融合蛋白经镍柱纯化、透析复性,与氯化锂处理的嗜酸乳杆菌混合孵育,SDS-PAGE和间接免疫荧光检测表明HA1-Slap锚定结合并展示于嗜酸乳杆菌细胞壁表面,并且具有良好的稳定性。本研究结果证明了嗜酸乳杆菌细胞壁表面展示AIV的HA1抗原蛋白的可行性,为新型乳酸菌载体黏膜免疫疫苗的研究奠定基础。

关键词：嗜酸乳杆菌 S-层蛋白锚定展示 HA1蛋白

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表达H7N9亚型禽流感病毒HA基因DNA疫苗对鸡免疫保护效力的研究

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中国预防兽医学报 2014年第6期36卷 467-470页

作者：单继艳刘兵柳金雄陈普成张乾义谷春阳曾显营姜永萍陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

防控H7N9禽流感病毒(AIV)疫苗研制是必要的技术储备,本研究根据A/Anhui/1/2013(H7N9)株的HA基因进行了密码子优化和全基因合成,克隆于pVAX1中构建真核表达重组质粒pVAH7,将其作为DNA疫苗进行SPF鸡的免疫保护效力评价。采用60μg/羽剂量... 详细信息

防控H7N9禽流感病毒(AIV)疫苗研制是必要的技术储备,本研究根据A/Anhui/1/2013(H7N9)株的HA基因进行了密码子优化和全基因合成,克隆于pVAX1中构建真核表达重组质粒pVAH7,将其作为DNA疫苗进行SPF鸡的免疫保护效力评价。采用60μg/羽剂量的pVAH7单次或加强免疫3周龄SPF鸡;首免7周后,以106EID50的A/Chicken/Shanghai/S1053/2013(H7N9)通过鼻腔接种途径攻毒。结果显示,pVAH7单次和加强免疫均可以有效诱导血凝抑制(HI)和中和(NT)抗体的产生。而且NT抗体水平与HI抗体水平呈正相关,并在免疫初期(3周)显著高于相对应的HI抗体水平;单次免疫组攻毒后第5 d在泄殖腔部位仍可以分离到病毒,加强免疫组鸡在攻毒后5 d则检测不到病毒,而对照组在感染后3 d^7 d均可分离到较高滴度的病毒。本研究结果表明,pVAH7能够对SPF鸡提供有效的保护作用,可以作为防制H7N9亚型禽流感的后备DNA疫苗。

关键词： H7N9禽流感病毒 DNA疫苗保护效力

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一株鹅源巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析

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中国兽医科学 2014年第2期44卷 119-123页

作者：刘红玉邵周伍林李刚殷秀辰陈玉环吴晓颖刘思国张云中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

对某种鹅场病死鹅进行剖解,肝涂片镜检后观察到革兰氏染色阴性短小杆菌,瑞氏-吉姆萨染色见两极浓染。用巴氏杆菌特异性引物进行PCR扩增,将扩增产物克隆至pMD18-T载体上,测序结果通过BLAST比对与多杀性禽巴氏杆菌的相似性为99.0%,确定其... 详细信息

对某种鹅场病死鹅进行剖解,肝涂片镜检后观察到革兰氏染色阴性短小杆菌,瑞氏-吉姆萨染色见两极浓染。用巴氏杆菌特异性引物进行PCR扩增,将扩增产物克隆至pMD18-T载体上,测序结果通过BLAST比对与多杀性禽巴氏杆菌的相似性为99.0%,确定其为多杀性巴氏杆菌。用16种常用抗菌药物的纸片法对该分离菌进行药敏试验,结果显示,该菌对四环素和万古霉素不敏感;对克林霉素、链霉素中度敏感;对内酰胺类(青霉素、氨苄西林)、大环内脂类(红霉素、克拉霉素)、喹诺酮类(环丙沙星)抗生素等高度敏感。用小白鼠和鹅进行动物回归试验,分为0.1mL/只、0.3mL/只和0.5mL/只剂量组,分别皮下接种TSB培养的病原菌,并分别在接种后6h和48h内出现死亡,死亡动物的剖检病变与巴氏杆菌感染的鹅相同,并在病变器官内分离出该病原菌。

关键词：多杀性巴氏杆菌 PCR检测耐药性分析分离鉴定

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两株H5N1高致病性禽流感病毒对小鼠的致病力研究

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中国预防兽医学报 2014年第11期36卷 834-837页

作者：郭晶李旭勇钟功勋施建忠李雁冰陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为比较2株H5N1亚型高致病性禽流感病毒(HPAIV)对哺乳动物的致病力,本研究选取了A/Anhui/2/05(AH/2/05)和A/Sichuan/81/05(SC/81/05)两株病毒,采用低剂量(10 EID50)感染小鼠模型,并就两株病毒对小鼠的致病力差异进行检测。结果表明AH/2/0... 详细信息

为比较2株H5N1亚型高致病性禽流感病毒(HPAIV)对哺乳动物的致病力,本研究选取了A/Anhui/2/05(AH/2/05)和A/Sichuan/81/05(SC/81/05)两株病毒,采用低剂量(10 EID50)感染小鼠模型,并就两株病毒对小鼠的致病力差异进行检测。结果表明AH/2/05感染后小鼠出现体重下降和神经症状,并可致死部分小鼠;SC/81/05感染小鼠后,小鼠无任何明显的症状,体重、食欲、精神状态均不受影响。AH/2/05感染后病毒可在小鼠的全身复制,病毒在小鼠体内的存活时间可以长达14 d。SC/81/05感染后病毒仅在小鼠的肺脏中复制,并且仅能够在感染后的3 d和5 d分离到病毒。病理学检测显示,AH/2/05感染后病毒存在于小鼠的各脏器细胞并且引起小鼠脏器组织的严重病理变化,而SC/81/05感染后并未对小鼠组织脏器造成明显的病理变化。本研究结果揭示了人源和禽源H5N1禽流感病毒低剂量感染对小鼠的致病差异,同时为进一步研究H5N1亚型HPAIV在哺乳动物中的感染和致病能力提供了相关的实验依据。

关键词： H5N1高致病性禽流感病毒小鼠致病力

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猪瘟病毒N^(pro)蛋白与宿主蛋白β-actin相互作用的鉴定

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中国预防兽医学报 2014年第8期36卷 602-605页

作者：冯烁李素王竞晗董泓何文瑞仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为研究与猪瘟病毒(CSFV)Npro蛋白相互作用的宿主蛋白,本研究采用酵母双杂交方法从猪外周血单个核细胞cDNA表达文库中筛选获得与Npro蛋白相互作用的宿主蛋白β-actin,经共转化试验和免疫共沉淀试验表明两者存在特异的相互作用,激光共聚... 详细信息

为研究与猪瘟病毒(CSFV)Npro蛋白相互作用的宿主蛋白,本研究采用酵母双杂交方法从猪外周血单个核细胞cDNA表达文库中筛选获得与Npro蛋白相互作用的宿主蛋白β-actin,经共转化试验和免疫共沉淀试验表明两者存在特异的相互作用,激光共聚焦试验显示两者共定位于细胞浆。本研究表明Npro蛋白与宿主细胞β-actin蛋白存在相互作用的关系。

关键词：猪瘟病毒 N^pro蛋白 β-actin 相互作用

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Asia1型口蹄疫病毒VP1蛋白进化踪迹分析

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中国预防兽医学报 2014年第8期36卷 615-619页

作者：牛银杰王靖飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为预测口蹄疫病毒（FMDV）VP1蛋白的重要功能残基,本研究利用进化踪迹及蛋白结构同源建模等方法对91株Asia 1型FMDV的VP1氨基酸序列进行分析,结果显示91个病毒株分属于B、C和D分支,2005年~2006年分离株处于另一个分支,命名为E分支。以1... 详细信息

为预测口蹄疫病毒（FMDV）VP1蛋白的重要功能残基,本研究利用进化踪迹及蛋白结构同源建模等方法对91株Asia 1型FMDV的VP1氨基酸序列进行分析,结果显示91个病毒株分属于B、C和D分支,2005年~2006年分离株处于另一个分支,命名为E分支。以10分区分析进化树,共34个组特异残基,其中140S、141S、146L、148A、149L、150A、151R、152R、153V、155N和156R分布于G-H环区域,预测它们与抗原性和受体结合特性有关;B、C、D和E 4个分支的组内特异残基分别为24S、153G、196H;59H、141P、146M、150S、169N;50I、135A和99N、127S、140S、151R,这些残基为各分支的分子标识;组特异残基35V、80L、93S、127A分布于VP1和其他结构蛋白的作用界面,可能对病毒的装配具有重要作用。本研究结果为FMDV的VP1功能研究提供了参考数据。

关键词： Asia 1型口蹄疫病毒 VP1蛋白踪迹进化分析同源建模

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猪细小病毒1型VP2蛋白的表达与单克隆抗体的制备及应用

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中国兽医科学 2014年第12期44卷 1279-1285页

作者：孙建慧黄立平危艳武吴洪丽王一平张辉刘丹陈冬杰张智慧刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪病研究室黑龙江哈尔滨150001

为研制抗猪细小病毒1型(PPV1)VP2蛋白的单克隆抗体,用重组杆状病毒表达的PPV1VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,融合后采用免疫过氧化物酶单层细胞染色试验筛选抗PPV1VP2的单克隆抗体阳性细胞株,并对单克隆抗体的腹水效价、免疫反应特性及亚类进... 详细信息

为研制抗猪细小病毒1型(PPV1)VP2蛋白的单克隆抗体,用重组杆状病毒表达的PPV1VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,融合后采用免疫过氧化物酶单层细胞染色试验筛选抗PPV1VP2的单克隆抗体阳性细胞株,并对单克隆抗体的腹水效价、免疫反应特性及亚类进行了系统鉴定。结果显示,共获得8株阳性杂交瘤细胞株,其腹水抗体效价均达1∶51 200,其中7株的重链亚类为IgG1,另1株(4A1)为IgM;6株的轻链为κ型,另2株(8D7和4A1)为λ型。这些单克隆抗体均可与PPV1感染的猪睾丸细胞呈阳性反应;Western-blot结果显示,这些单克隆抗体可与自然PPV1VP2蛋白产生良好的免疫反应。以其中1株单克隆抗体(8E4)建立了间接ELISA,通过对重组杆状病毒表达的PPV1VP2蛋白产物进行的动力学检测表明,第72小时蛋白表达量最高;对PPV1感染细胞增殖规律的测定结果显示,接种后第16小时可检测到病毒感染的阳性细胞,说明该病毒复制周期小于24h。本研究获得的单克隆抗体可用于重组VP2蛋白抗原的检测及病毒繁殖规律的研究。

关键词：猪细小病毒1型 VP2蛋白单克隆抗体

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H3N8亚型马流感病毒HA基因重组腺病毒的构建及其生物学特性的研究

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中国兽医科学 2014年第4期44卷 362-366页

作者：刘春国刘明刘飞王伟刘大飞刘彦云吕让相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院黑龙江哈尔滨150001 上海兽医研究所上海200241

为了构建表达H3N8亚型马流感病毒HA蛋白的重组腺病毒,把A/Equine/Xinjiang/3/2007(H3N8)的HA基因克隆到腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,将重组穿梭质粒pShuttle-XJ3HA电转化至BJ5183感受态细胞中,与人5型腺病毒骨架质粒同源重组,获得了... 详细信息

为了构建表达H3N8亚型马流感病毒HA蛋白的重组腺病毒,把A/Equine/Xinjiang/3/2007(H3N8)的HA基因克隆到腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,将重组穿梭质粒pShuttle-XJ3HA电转化至BJ5183感受态细胞中,与人5型腺病毒骨架质粒同源重组,获得了重组腺病毒质粒pAd-XJ3HA。该质粒线性化后转染AD293细胞,包装重组腺病毒rAd-XJ3HA。通过PCR、间接免疫荧光试验(IFA)和Western-blot鉴定,证明HA基因已整合到腺病毒载体基因组中,并能够有效表达。该重组腺病毒在AD293细胞上连续传15代后仍表现出良好的遗传稳定性。马流感病毒HA基因重组腺病毒的成功构建为我国马流感重组病毒活载体疫苗的研究提供了技术储备。

关键词：马流感病毒 H3N8亚型 HA基因重组腺病毒生物学特性

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B19和B21单倍型鸡NK细胞受体B-NK19和B-NK21的多克隆抗体制备及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第12期30卷 1274-1277页

作者：杨超张晓娜许峰铭文辉强廉传江陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学研究团队黑龙江哈尔滨150001

目的利用大肠杆菌系统表达对多种禽病存在敏感性差异的B19和B21单倍型鸡NK细胞抑制性受体B-NK基因,并制备其多克隆抗体。方法分别提取B19和B21鸡外周血淋巴细胞总RNA,采用反转录PCR法扩增B-NK基因(分别命名为B-NK19和B-NK21),克隆至pET-... 详细信息

目的利用大肠杆菌系统表达对多种禽病存在敏感性差异的B19和B21单倍型鸡NK细胞抑制性受体B-NK基因,并制备其多克隆抗体。方法分别提取B19和B21鸡外周血淋巴细胞总RNA,采用反转录PCR法扩增B-NK基因(分别命名为B-NK19和B-NK21),克隆至pET-30a原核表达载体中,经酶切和PCR鉴定构建重组质粒。转入到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE分析外源蛋白的表达。将含有与组氨酸(His)标签融合表达的外源蛋白胶条切下,多点皮下免疫新西兰兔,分别制备B-NK19和B-NK21特异性多克隆抗体。利用Western blot法鉴定其组织相容性复合体(MHC)单倍型特异性。结果成功构建了原核表达重组质粒pET-B-NK19和pET-B-NK21,利用IPTG在37℃诱导4 h后目的蛋白获得表达,免疫5次后收获兔多克隆抗体,Western blot表明B-NK19和B-NK21蛋白存在免疫学交叉反应和部分特异性。结论对多种禽病具有敏感性差异的MHC单倍体型B19和B21鸡的NK细胞抑制性受体B-NK蛋白存在抗原反应交叉性,其多克隆抗体具有部分特异性。

关键词：鸡NK细胞受体 B-NK B19单倍型 B21单倍型多克隆抗体

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表达H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白重组新城疫病毒的构建以及密码子优化的HA免疫增强作用

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中国预防兽医学报 2014年第8期36卷 585-589页

作者：陈曦于桂梅刘景利王金良姜永萍葛金英步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达H5N1亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白重组新城疫病毒(NDV)及比较密码子优化的HA免疫增强作用,本研究利用NDV LaSota弱毒疫苗株的反向遗传操作系统,分别构建了表达野毒型H5N1亚型AIV HA蛋白和密码子优化的HA蛋白的重组NDV,并分别命... 详细信息

为构建表达H5N1亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白重组新城疫病毒(NDV)及比较密码子优化的HA免疫增强作用,本研究利用NDV LaSota弱毒疫苗株的反向遗传操作系统,分别构建了表达野毒型H5N1亚型AIV HA蛋白和密码子优化的HA蛋白的重组NDV,并分别命名为rL-H5HA和rL-optiH5HA。对拯救的重组病毒进行RT-PCR、间接免疫荧光和western blot鉴定,结果表明,两种重组病毒均可以在BHK-21细胞中以及鸡胚成纤维细胞稳定地表达HA蛋白。此外,rL-optiH5HA在体外增殖能力及在体内刺激产生抗体均显著高于rL-H5HA。本研究表明,密码子优化的HA重组NDV具有明显的免疫增强作用。本研究为研制安全、有效的新型禽流感疫苗提供了实验依据。

关键词：禽流感病毒 HA蛋白重组新城疫病毒密码子优化

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