检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2014年第10期36卷 751-754页

作者：郑惠文李志杰张艳萍包珂岩郑永胜刘长军王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病研究室黑龙江哈尔滨150001

最新研究发现,鸡马立克氏病病毒(MDV)基因组编码的miRNAs在肿瘤发生发展中发挥了重要的调控作用。为阐明强弱毒株编码的miRNA差异表达与病毒复制的关系,本研究采用SYBR Green荧光定量PCR方法检测了MDV CVI988疫苗株和MDV GA强毒株编码的... 详细信息

最新研究发现,鸡马立克氏病病毒(MDV)基因组编码的miRNAs在肿瘤发生发展中发挥了重要的调控作用。为阐明强弱毒株编码的miRNA差异表达与病毒复制的关系,本研究采用SYBR Green荧光定量PCR方法检测了MDV CVI988疫苗株和MDV GA强毒株编码的M4-5P、M8-3P和M12-3P 3种miRNAs在肝脏和胸腺中的动态表达特征。结果表明,强弱毒株编码的这3种miRNAs在病毒感染过程中具有明显的差异性,其中GA株编码的miRNAs表达量高于CVI988株,这是由于强弱毒株在体内的复制滴度差异造成的,表明在感染前期miRNAs的表达量与病毒载量有关。该研究为进一步研究miRNAs的功能提供了实验依据。

关键词：鸡马立克氏病病毒 miRNA 荧光定量PCR

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表达马尔堡病毒囊膜糖蛋白GP重组新城疫病毒的构建及免疫原性评估

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中国预防兽医学报 2014年第9期36卷 667-671页

作者：胡旭乐温志远宋坤王喜军陈伟业葛金英步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为研制安全、有效的抗马尔堡病毒(MARV)疫苗,本研究将人工合成的MARV GP基因利用新城疫病毒LaSota疫苗株反向遗传操作系统构建并拯救得到表达MARV糖蛋白GP的重组病毒(rLa-MARVGP),并以小鼠为动物模型对其安全性和免疫原性进行评价。West... 详细信息

为研制安全、有效的抗马尔堡病毒(MARV)疫苗,本研究将人工合成的MARV GP基因利用新城疫病毒LaSota疫苗株反向遗传操作系统构建并拯救得到表达MARV糖蛋白GP的重组病毒(rLa-MARVGP),并以小鼠为动物模型对其安全性和免疫原性进行评价。Western blot和间接免疫荧光试验表明MARV GP能够正确表达,其分子量为130 ku;动物实验结果表明rLa-MARVGP对小鼠高度安全;rLa-MARVGP免疫小鼠能够诱导产生抗MARV GP囊膜嵌合水疱性口炎病毒假病毒的特异性中和抗体。本研究表明rLa-MARVGP作为防控MARV的储备性疫苗具有潜在的应用价值。

关键词：马尔堡病毒囊膜糖蛋白重组新城疫病毒

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猪鼻支原体抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

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中国兽医科学 2014年第11期44卷 1140-1144页

作者：陈冬杰危艳武张志慧黄立平吴洪丽王一平孙建慧刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了检测猪血清中猪鼻支原体(Mhr)的抗体水平,采用脱氧胆酸钠提取Mhr膜蛋白作为包被抗原,建立了间接ELISA,并采用该方法检测了60份SPF阴性猪血清和45份Mhr阳性猪血清样品。结果显示,该方法的特异性为90.5%,敏感性为98.0%。除猪肺炎支原... 详细信息

为了检测猪血清中猪鼻支原体(Mhr)的抗体水平,采用脱氧胆酸钠提取Mhr膜蛋白作为包被抗原,建立了间接ELISA,并采用该方法检测了60份SPF阴性猪血清和45份Mhr阳性猪血清样品。结果显示,该方法的特异性为90.5%,敏感性为98.0%。除猪肺炎支原体(Mhp)外,该方法与几种猪病毒阳性血清及副猪嗜血杆菌Ⅳ型阳性参考血清均无交叉反应。对Mhr DL菌株感染的巴马猪血清抗体的检测结果显示,Mhr感染后第3天血清抗体阳转,第35天抗体水平达到高峰,抗体效价为1∶6 400。用该方法与IDEXX猪肺炎支原体抗体检测试剂盒平行检测138份现地血清样品,Mhr和Mhp的阳性检出率分别为71.0%和44.9%。用该方法对黑龙江、吉林、山东等地临床送检的457份血清的检测结果显示,Mhr阳性率为70.3%,表明我国猪群Mhr感染十分普遍。上述结果表明,本研究建立的间接ELISA具有良好的特异性和敏感性,为Mhr抗体检测提供了技术手段。

关键词：猪鼻支原体间接ELISA 抗体检测

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牛腺病毒3型六邻体蛋白的截短表达、单克隆抗体制备及初步应用

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中国预防兽医学报 2014年第6期36卷 475-478页

作者：严昊朱远茂史鸿飞王雪枝蔡红王姝马磊薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为制备牛腺病毒3型(BAV-3)的单克隆抗体(MAb),本研究采用原核表达系统截短表达了BAV-3六邻体蛋白(Hexon),并以纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合筛选出14株杂交瘤细胞株。Western blot与间接免疫荧光试验表明14株MAbs均具有良好... 详细信息

为制备牛腺病毒3型(BAV-3)的单克隆抗体(MAb),本研究采用原核表达系统截短表达了BAV-3六邻体蛋白(Hexon),并以纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合筛选出14株杂交瘤细胞株。Western blot与间接免疫荧光试验表明14株MAbs均具有良好的反应性。特异性试验表明这些MAbs与牛副流感病毒3型、牛病毒性腹泻病毒及牛传染性鼻气管炎病毒无交叉反应。免疫组化试验表明其中一株1F8亲和力最强,可以用于检测BAV-3。本研究为进一步鉴定BAV-3抗原表位及研发相应的诊断试剂奠定了基础。

关键词：牛腺病毒3型六邻体蛋白单克隆抗体特异性

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猪圆环病毒2型几种ELISA抗体检测试剂盒的比较与应用

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中国预防兽医学报 2014年第2期36卷 129-133页

作者：张志慧危艳武吴洪丽黄立平李胜斌刘建波张辉王一平刘丹刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了比较猪圆环病毒2型（PCV2）5种ELISA抗体检测试剂盒的使用效果，本研究采用IPMA法标定不同PCV2抗体效价的阳性血清50份和阴性血清30份，对这些试剂盒的敏感性、特异性及符合率进行比较。结果显示，这5种试剂盒的敏感性为74．0％～96... 详细信息

为了比较猪圆环病毒2型（PCV2）5种ELISA抗体检测试剂盒的使用效果，本研究采用IPMA法标定不同PCV2抗体效价的阳性血清50份和阴性血清30份，对这些试剂盒的敏感性、特异性及符合率进行比较。结果显示，这5种试剂盒的敏感性为74．0％～96．0％，特异性为83．3％～96．7％，符合率为77．5％～96.3％，其中以国产阻断ELISA试剂盒和Ingenasa公司的试剂盒效果最好。此外，本研究采用国产阻断ELISA试剂盒对PCV2疫苗免疫猪血清抗体检测表明，疫苗免疫21d后抗体阳性率达50％，免疫28d抗体阳性率达100％；对PCV2人工感染猪血清抗体检测显示，病毒接种后第28d抗体阳性率为30．0％，第42d阳性率为100％；对临床送检猪血清抗体检测表明，PCV2抗体阳性率介于45.0％～76．5％。本研究通过对PCV25种抗体检测试剂盒的比较及应用显示，国产阻断ELISA试剂盒可以作为检测PCV2疫苗免疫及临床感染猪血清抗体的有效方法。

关键词：猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒比较和应用

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蓝舌病病毒反向遗传操作系统的建立

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中国预防兽医学报 2014年第2期36卷 85-89页

作者：杨涛徐青元孙恩成冯瑜菲李俊平孙亮孙晶吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立蓝舌病病毒(BTV)的反向遗传操作系统,本研究构建了分别表达血清1型BTV SZ97/1株VP1、VP3、VP4、VP6、VP7、NS1和NS2蛋白的7个真核表达质粒,同时又构建了含有SZ97/1株BTV的全部10个基因节段的T7聚合酶体外转录重组质粒。并利用T7 ... 详细信息

为建立蓝舌病病毒(BTV)的反向遗传操作系统,本研究构建了分别表达血清1型BTV SZ97/1株VP1、VP3、VP4、VP6、VP7、NS1和NS2蛋白的7个真核表达质粒,同时又构建了含有SZ97/1株BTV的全部10个基因节段的T7聚合酶体外转录重组质粒。并利用T7 RNA聚合酶对酶切线性化的10个体外转录质粒进行体外转录,制备BTV全部10个基因的体外转录RNA。将已构建的7个真核表达质粒和体外转录获得的RNA产物依次共转染BHK-21细胞,拯救出含有分子标记的BTV。本研究首次在我国建立了BTV的反向遗传操作系统,为我国深入开展该病毒致病机理、传播机制、基因组功能的研究以及新型疫苗的研发奠定了基础。

关键词：蓝舌病蓝舌病病毒反向遗传学

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蓝舌病病毒3型VP5蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定

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中国预防兽医学报 2014年第5期36卷 387-390页

作者：孙晶孙恩成刘二战孙亮徐青元杨涛吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为制备血清3型蓝舌病病毒(BTV)VP5蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究利用pMAL-C4x原核表达系统表达、纯化的重组VP5蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,并以Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达、纯化... 详细信息

为制备血清3型蓝舌病病毒(BTV)VP5蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究利用pMAL-C4x原核表达系统表达、纯化的重组VP5蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,并以Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达、纯化的重组VP5蛋白为包被抗原,通过间接ELISA筛选出一株稳定分泌抗BTV3 VP5蛋白的MAb杂交瘤细胞株(3F2)。间接免疫荧光结果表明:MAb 3F2与BTV3、BTV5、BTV9、BTV16呈阳性反应;与BTV6、BTV7、BTV13、BTV21呈弱阳性反应;与其它BTV血清型均呈阴性反应。利用原核表达的麦芽糖结合蛋白(MBP)融合短肽对MAb 3F2识别的抗原表位进行鉴定,结果表明:该MAb识别的抗原表位为89PGERGIQMKIKEIEEE104。氨基酸序列比对结果显示该表位在不同地域来源的BTV3株间比较保守。该MAb的制备和鉴定为进一步研究VP5蛋白的结构和功能奠定了基础。

关键词：蓝舌病病毒3型 VP5蛋白单克隆抗体抗原表位

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鸡马立克氏病病毒疫苗株对强毒株的复制抑制作用

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中国预防兽医学报 2014年第1期36卷 7-10页

作者：郑永胜张艳萍李志杰郑惠文谭成章刘长军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为研究鸡马立克氏病(MD)疫苗株对强毒株体内复制的抑制作用,本研究依据鸡MD病毒(MDV)R-LORF2基因序列设计引物和探针,建立特异性定量检测MDV流行强毒株L-CY的荧光定量PCR方法,并且应用该方法对CVI988疫苗株免疫后不同时间间隔L-CY株攻... 详细信息

为研究鸡马立克氏病(MD)疫苗株对强毒株体内复制的抑制作用,本研究依据鸡MD病毒(MDV)R-LORF2基因序列设计引物和探针,建立特异性定量检测MDV流行强毒株L-CY的荧光定量PCR方法,并且应用该方法对CVI988疫苗株免疫后不同时间间隔L-CY株攻毒鸡体内不同组织的强毒载量进行动态的定量检测。结果显示,免疫后7 d和14 d攻毒鸡体内不同组织强毒载量显著低于单独攻毒鸡;而同时免疫和攻毒组鸡中强毒载量无明显降低。在免疫后7 d攻毒组中,法氏囊中的强毒载量始终稳定在低水平,但羽髓和肾脏中的强毒载量自攻毒后21 d开始明显上升。结果表明,至少要在感染L-CY株14 d前免疫,CVI988疫苗株才能有效抑制强毒株在体内的复制。此外,当免疫后7 d攻毒时,在羽髓或肾脏等非免疫器官中,疫苗病毒不能持续抑制强毒复制,最终导致疫苗不能提供有效的保护。本研究为MD免疫机制的进一步研究提供了依据。

关键词：马立克氏病病毒病毒载量荧光定量PCR 抑制作用

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猪流行性乙型脑炎病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立

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中国预防兽医学报 2014年第7期36卷 547-550页

作者：霍红李业南薛遥郭立平王晓磊步志高华荣虹中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)的定量检测方法,本实验根据JEV的E基因保守序列设计一对特异性引物及探针,并以E基因重组质粒作为标准品,建立检测JEV的TaqMan荧光定量PCR方法。结果显示,该方法的灵敏度可达到10个拷贝,是常规PCR灵敏度... 详细信息

为建立猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)的定量检测方法,本实验根据JEV的E基因保守序列设计一对特异性引物及探针,并以E基因重组质粒作为标准品,建立检测JEV的TaqMan荧光定量PCR方法。结果显示,该方法的灵敏度可达到10个拷贝,是常规PCR灵敏度的100倍。该方法对其它相关猪病病毒的检测显示均为阴性。重复性试验表明该方法的组间和组内的变异系数均小于2%。通过检测未免疫猪和免疫减毒活疫苗猪在感染JEV后的病毒血症样品,将该方法与JEV传统病毒分离方法进行比较,结果表明该方法与乳鼠脑内接种方法灵敏度相同,比细胞分离方法灵敏度高。该方法可以作为临床检测JEV及评价疫苗保护效力的检测方法。

关键词：流行性乙型脑炎病毒 TaqMan荧光定量PCR 检测

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牛病毒性腹泻病毒E0蛋白的表达与多克隆抗体制备

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黑龙江畜牧兽医 2014年第3期 4-8,207页

作者：王雪枝朱远茂史鸿飞严昊蔡红王姝马磊薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室哈尔滨150001

为了制备BVDV的E0蛋白兔源多克隆抗体,试验采用大肠杆菌对E0蛋白进行了表达,根据已发表的BVDV的VEDEVAC株的全基因组序列设计1对扩增E0的引物,经RT-PCR扩增出长约680 bp的E0基因片段,然后将目的基因克隆到pET-30a载体上,经酶切鉴定获得... 详细信息

为了制备BVDV的E0蛋白兔源多克隆抗体,试验采用大肠杆菌对E0蛋白进行了表达,根据已发表的BVDV的VEDEVAC株的全基因组序列设计1对扩增E0的引物,经RT-PCR扩增出长约680 bp的E0基因片段,然后将目的基因克隆到pET-30a载体上,经酶切鉴定获得阳性重组质粒后进行测序,再将测序正确的阳性重组质粒转化BL21表达菌,经扩大培养及IPTG诱导后获得以包涵体形式存在的重组E0蛋白,经亲和层析法纯化后进行Western-blot检测,同时以纯化的E0蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并对E0多克隆抗体进行了中和试验和免疫荧光检测。结果表明:E0蛋白具有良好的反应性;E0多克隆抗体的病毒中和试验测定其中和抗体效价达到1∶128,具有良好的反应性和特异性。说明制备的重组E0蛋白多克隆抗体可以用于BVDV的检测。

关键词：牛病毒性腹泻病毒 E0蛋白家兔多克隆抗体 RT—PCR Western—blot IFA

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