检索结果-内蒙古大学图书馆

本实验所用的马传染性贫血病毒（ＥＩＡＶ）Ｌ株（ＥＩＡＶ－Ｌ）是我国研制成功的ＥＩＡＶ弱毒疫苗的原始强毒株。以ＥＩＡＶ－Ｌ感染马外周血液白细胞中ＤＮＡ为模板，利用ＰＣＲ技术，分４个片段扩增ＥＩＡＶ－Ｌ前病毒ＤＮＡ，并分别克隆到载体质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ中，得到４个重组质粒ｐ２．８、ｐ２．４、ｐ３．１和ｐ１．２，经酶切鉴定后测序。对测序结果分析、拼接，得到ＥＩＡＶ－Ｌ前病毒基因组全序列。ＥＩＡＶ－Ｌ前病毒基因组全长８２３５ｂｐ，其中Ｇ＋Ｃ含量为３８％。通过使用计算机软件ＤＮＡＳＩＳ分析，ＥＩＡＶ－Ｌ与马传贫驴强毒和马传贫驴白细胞疫苗毒序列同源性分别为９８．４％和９６．９％。同源性如此接近反映了它们之间的亲缘关系，另外ＥＩＡＶ－Ｌ与驴强毒的同源性高于其与驴白细胞弱毒疫苗株的同源性，这符合驴白细胞弱毒疫苗株的衍生过程。基因组两端是长为３１６ｂｐ的ＬＴＲ，其中Ｕ３为１９７ｂｐ，Ｒ为８０ＢＰ，Ｕ５为３９ｂｐ。前病毒基因组有３个较大的开放阅读框架（ＯＲＦ），分别编码ｇａｇ、ｐｏｌ和ｅｎｖ基因。ｇａｇ基因位于７１３～１９１２位碱基之间，全长１２００ｂｐ；ｐｏｌ基因位于１７０８～５１０９位碱基之间，全长

关键词：马传染性贫血病毒 L株前病毒核替酸序列分析

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新城疫F_(48)E_9株L基因克隆与鉴定

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中国预防兽医学报 2001年第4期23卷 247-252页

作者：闫丽辉曹殿军刘培欣孙建宏中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

本实验根据已知新城疫病毒L基因序列分别设计了两对引物 ,引物 1(L1)、引物 2 (L2 )、引物 3(L3)、引物 4(L4)。以L1/L2为引物可以扩出 40 5 0bpF4 8E9株L基因的A片段 (LA) ,以L3/L4为引物可扩增出 35 0 4bpF4 8E9株L基因的B片段 (LB)... 详细信息

本实验根据已知新城疫病毒L基因序列分别设计了两对引物 ,引物 1(L1)、引物 2 (L2 )、引物 3(L3)、引物 4(L4)。以L1/L2为引物可以扩出 40 5 0bpF4 8E9株L基因的A片段 (LA) ,以L3/L4为引物可扩增出 35 0 4bpF4 8E9株L基因的B片段 (LB)。LA和LB 2个片段经特异性双酶切后用T4DNA连接酶连接成完整的F4 8E9株L基因并克隆到pMD18_T载体中 ,对克隆后L基因 5’端、3’端和连接点处的核苷酸序列进行了测定 ,经DNASIS软件分析表明为NDVL基因 ,证明我们获得了F4

关键词：新城疫病毒 L基因克隆鉴定

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CpG DNA对鸡传染性喉气管炎病毒DNA疫苗免疫效果的影响

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中国农业科学 2001年第3期34卷 342-344页

作者：孟松树李曦智海东王云峰王柳童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

将分别构建的含有鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）王岗株ｇＢｇＣ和ｇＤ基因的重组真核表达质粒及ＣＰＧＤＮＡ佐剂分组肌肉注射ＳＰＦ鸡，检测了免疫后的抗体水平，并观测了攻毒后的免疫保护效果。实验结果显示，ＣｐＧＤＮＡ佐剂... 详细信息

将分别构建的含有鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）王岗株ｇＢｇＣ和ｇＤ基因的重组真核表达质粒及ＣＰＧＤＮＡ佐剂分组肌肉注射ＳＰＦ鸡，检测了免疫后的抗体水平，并观测了攻毒后的免疫保护效果。实验结果显示，ＣｐＧＤＮＡ佐剂和ＤＮＡ疫苗联合免疫后的抗体水平比单一使用ＤＮＡ疫苗的要高，而佐剂组的发病率、死亡率均低于非佐剂组，保护率则高于非佐剂组。这表明ＣｐＧＤＮＡ佐剂增强了ＩＬＴＶＤＮＡ疫苗的免疫效果。

关键词：传染性喉气管炎病毒 DNA疫苗 CpG DNA 免疫效果

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我国部分地区NDV的分子流行病学研究

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中国预防兽医学报 2001年第1期23卷 29-32页

作者：曹殿军郭鑫梁荣闫丽辉刘培欣闵平陈杰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

本研究根据新城疫病毒 (NDV)F基因编码区 1_374位核苷酸序列计算其遗传距离并绘制了NDV的系统发育进化树 ,将 6 8株NDV分为 9个基因型 (30株为国内分离株 ) ,其中Ⅰ～Ⅵ是早已存在的老基因型 ,Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ为新发现的基因型 ,特别是Ⅸ为... 详细信息

本研究根据新城疫病毒 (NDV)F基因编码区 1_374位核苷酸序列计算其遗传距离并绘制了NDV的系统发育进化树 ,将 6 8株NDV分为 9个基因型 (30株为国内分离株 ) ,其中Ⅰ～Ⅵ是早已存在的老基因型 ,Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ为新发现的基因型 ,特别是Ⅸ为我国特有的基因型 (F48E9、M3、HLJ_3、HeB_1P和NM_5 )。 1997～ 1999年在我国云南、广西、甘肃、陕西、新疆等地分离的YN_1P、GX_3、H1、H2、P1、GX_1、GX_2、GS_2、GS_3、SHX_2、SHX_3、SHX_6、SHX_7、XJ_2和 1991年分离的HuB_1均属于Ⅶ基因型 ,该基因型的病毒是 90年代以来引起新城疫发生的主要病原。根据遗传距离和分离年代可将此基因型进一步划分为 5个基因亚型 ,分别是Ⅶa、Ⅶb、Ⅶc、Ⅶd和Ⅶe。此外HuN_1/ 98、HLJ_4/ 95和HeH_1P属一个老的基因Ⅵ ,1979～ 1985年分离自青海的QH_1、QH_2、QH_4属于一个新的基因型—Ⅷ型。可见在我国新城疫的流行是极其复杂的 ,既有老基因型的危险 (Ⅰ～Ⅵ ) ,又有新基因型 (Ⅶ )的流行 ,更有我国独特Ⅷ和Ⅸ基因型潜伏。

关键词：新城疫病毒 F基因系统发育进化树分子流行病学中国

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新城疫LaSota、V4疫苗免疫鸡和免疫攻毒鸡的特异性IgA抗体动态变化规律比较

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中国预防兽医学报 2001年第2期23卷 5-7页

作者：曹殿军孙建宏闫丽辉刘培欣陈杰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室!哈尔滨150001

应用间接ELISA对新城疫LaSota、V4疫苗免疫鸡及免疫攻毒鸡的IgA抗体动态变化进行了测定和比较。试验表明 ,LaSota和V4免疫鸡泪液中特异性IgA均在免疫后第 5天出现 ,8天开始明显升高 ,与血清中IgG出现时间相似 ,免疫后 2 1天达到高峰。La... 详细信息

应用间接ELISA对新城疫LaSota、V4疫苗免疫鸡及免疫攻毒鸡的IgA抗体动态变化进行了测定和比较。试验表明 ,LaSota和V4免疫鸡泪液中特异性IgA均在免疫后第 5天出现 ,8天开始明显升高 ,与血清中IgG出现时间相似 ,免疫后 2 1天达到高峰。LaSota免疫鸡的泪液IgA抗体水平略高于V4免疫鸡 ;而两免疫组哈德氏腺 (HG)中的特异性IgA高峰出现较迟。免疫攻毒鸡泪液中的特异性IgA抗体水平均先呈短暂的升高 ,之后下降的趋势 ,而HG中的IgA则首先表现降低 ,之后很快升高 ,5天后趋于下降 ,两攻毒组差异不显著 ,对IgA回忆应答均不明显。

关键词：新城疫病毒 LaSota V4 IgA

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编码EIAV核输出因子蛋白Rev的cDNA克隆和序列测定

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中国预防兽医学报 2001年第4期23卷 241-243页

作者：孔宪刚张宝山周家喜刘永刚刘胜旺刘相东孙成群中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

EIAV在繁殖过程中涉及到多种转录因子的调节 ,其中Rev蛋白是病毒编码的转录后调节因子 ,决定了病毒复制由早期到晚期的过渡。Rev是非结构蛋白 ,由病毒基因组全长转录产物经多次拼接而成。本研究使用EIAV疫苗毒感染驴巨噬细胞培养物 ,在... 详细信息

EIAV在繁殖过程中涉及到多种转录因子的调节 ,其中Rev蛋白是病毒编码的转录后调节因子 ,决定了病毒复制由早期到晚期的过渡。Rev是非结构蛋白 ,由病毒基因组全长转录产物经多次拼接而成。本研究使用EIAV疫苗毒感染驴巨噬细胞培养物 ,在病毒增殖早期提取总RNA ,反转录后使用EIAV特异引物扩增病毒基因组拼接产物。将扩增产物克隆后经过核苷酸序列分析 ,通过与基因组全序列的比较。

关键词：马传贫病毒 Rev蛋白拼接 cDNA克隆序列分析核输出因子

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鸡IL-15基因的分子克隆及其有关特性的研究

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中国预防兽医学报 2001年第4期23卷 255-258页

作者：刘胜旺孔宪刚马云燕童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

实验应用聚合酶链式反应技术从鸡脾淋巴细胞中克隆得到了白细胞介素_15基因 ,序列分析表明与已发表的鸡白细胞介素_15基因完全一致。核苷酸序列和推导的氨基酸序列与牛的最接近 ,同源性分别为 46 %和 31%。与哺乳动物白细胞介素_15序列... 详细信息

实验应用聚合酶链式反应技术从鸡脾淋巴细胞中克隆得到了白细胞介素_15基因 ,序列分析表明与已发表的鸡白细胞介素_15基因完全一致。核苷酸序列和推导的氨基酸序列与牛的最接近 ,同源性分别为 46 %和 31%。与哺乳动物白细胞介素_15序列类似 ,有 4个高度保守的半胱氨酸残基。同时本研究也用此方法对鸡脾脏、法氏囊、胸腺、哈德氏腺和盲肠扁桃体等淋巴器官的淋巴细胞中鸡白细胞介素_15mRNA的表达进行了研究 ,结果表明这些器官的淋巴细胞均表达mRNA。本实验还用有丝分裂原ConA对鸡脾淋巴细胞进行活化 ,观察活化的淋巴细胞表达白细胞介素_15mRNA的情况。

关键词：鸡白细胞介素-15 基因克隆生物学活性

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马传染性贫血病病毒驴白细胞弱毒疫苗株前病毒全基因组核苷酸序列分析

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中国预防兽医学报 2001年第3期23卷 161-166页

作者：杨志彪王柳童光志孔宪刚仇华吉宁波大学中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

马传染性贫血病病毒 (EIAV)是马传染性贫血病 (简称马传贫 ,EIA)的病原。我国的EIAV弱毒疫苗是迄今为止世界上唯一投入应用的慢病毒疫苗 ,成功地控制了我国EIA的流行。本研究从EIAV弱毒疫苗株 (DLA)感染的驴白细胞中提取前病毒DNA ,以... 详细信息

马传染性贫血病病毒 (EIAV)是马传染性贫血病 (简称马传贫 ,EIA)的病原。我国的EIAV弱毒疫苗是迄今为止世界上唯一投入应用的慢病毒疫苗 ,成功地控制了我国EIA的流行。本研究从EIAV弱毒疫苗株 (DLA)感染的驴白细胞中提取前病毒DNA ,以提取的前病毒DNA为模板 ,利用PCR技术分 3个片段扩增EIAV前病毒 ,这 3个片段覆盖全部前病毒DNA。将这 3个片段分别克隆到载体质粒pBluescrtiptsK中 ,得到 3个重组质粒P2 .8,P2 .4,P4.1,经酶切鉴定后 ,测序。对测序结果分析、拼接 ,得到EIAV驴白细胞弱毒疫苗株前病毒基因组全序列。EIAVDLA株前病毒基因组全长 82 6 6bp。基因组两端是长为334bp的LTR ,其中U3为 2 14bp ,R为 81bp ,U5为 39bp。前病毒基因组有 3个较大的开放阅读框架 (ORF) ,分别编码gag、pol和env基因。gag基因位于 732～ 1931位碱基之间 ,全长 12 0 0bp ;pol基因位于 172 7～ 5 12 8位碱基之间 ,全长 34 0 2bp ;env基因位于5 32 4～ 7912之间 ,长为 2 5 89bp。此外前病毒还有 3个小的ORF ,S1位于 5 132～ 5 2 84位碱基之间 ,长为 15 3bp ;S2位于 5 2 98～ 5 5 0 1位碱基之间 ,长为 2 0 4bp ;S3位于 72 5 8～ 76 5 9位碱基之间 ,长为 40 2bp。本研究结果为进一步确定EIAV的基因功能、揭示马传贫疫苗毒的致弱?

关键词：马传染性贫血病毒驴白细胞弱母疫苗株前病毒核苷酸序列分析基因组

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