检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2001年第2期21卷 137-140页

作者：刘胜旺孔宪刚陈洪岩张宝山童光志马云燕卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

应用 RT-PCR技术研究了鸡脾细胞在体外受到有丝分裂原 Con A的刺激后 ,其 Th1样淋巴因子的体外表达动态。结果表明 ,鸡脾细胞在 Con A诱导培养 1、2、3、4、8、1 2、2 4、4 8h后 ,均表达α-干扰素 m RNA,且未经有丝分裂原刺激的脾细胞... 详细信息

应用 RT-PCR技术研究了鸡脾细胞在体外受到有丝分裂原 Con A的刺激后 ,其 Th1样淋巴因子的体外表达动态。结果表明 ,鸡脾细胞在 Con A诱导培养 1、2、3、4、8、1 2、2 4、4 8h后 ,均表达α-干扰素 m RNA,且未经有丝分裂原刺激的脾细胞以及未诱导但培养了 3、8、4 8h的脾细胞 ,也表达α-干扰素 m RNA。γ-干扰素在上述诱导培养时 ,其 m RNA均发生表达 ;未经有丝分裂原刺激的脾细胞培养 3、8h时 ,也表达 γ-干扰素m RNA,但培养 4 8h时则未检测到 ;未受有丝分裂原刺激的脾细胞不表达 γ-干扰素 m RNA。鸡白细胞介素 -2m RNA仅在刺激 2、3、4、8、1 2、2 4、4 8h时表达 ,在其他情况下则未检测到。本研究还发现 1种与已报道的鸡α-干扰素序列不同的基因 ,但其体外的表达动态类似于鸡α-干扰素。上述研究表明 ,鸡 Th1样淋巴因子的体外表达类似于哺乳动物。

关键词：鸡 Th1样淋巴因子 mRNA 体外表达 RT-PCR 单克隆抗体

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表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒疫苗的遗传稳定性评价

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中国预防兽医学报 2001年第6期23卷 426-429页

作者：王云峰智海东王玫仇华吉周艳君田志军张绍杰童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了检测表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因重组鸡痘病毒 (rFPV -ILTVgB)的稳定性 ,我们对重组病毒进行 6代和 16代克隆纯化 ,对纯化后的病毒通过转瓶连续培养传 2 0代。结果发现第 6代纯化病毒 (rFPV -ILTVgB -C6)在传代过程中有... 详细信息

为了检测表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因重组鸡痘病毒 (rFPV -ILTVgB)的稳定性 ,我们对重组病毒进行 6代和 16代克隆纯化 ,对纯化后的病毒通过转瓶连续培养传 2 0代。结果发现第 6代纯化病毒 (rFPV -ILTVgB -C6)在传代过程中有白斑出现 ,说明病毒纯度不够 ;经过 16代纯化的病毒 (rFPV -ILTVgB -C16)对细胞的嗜性加强 ,病毒的效价进一步升高 ,2 0代传代后蓝斑率仍然为 10 0 % ,PCR的检测进一步证明插入的外源基因能在病毒的长期传代过程中稳定地遗传。抽取病毒细胞传代过程中的第 5 ,10 ,15 ,2 0代次的病毒翅膀内侧无血管处皮下接种 2周龄SPF鸡 ,2 0天后分为两组 ,分别用传染性喉气管炎病毒WG株和鸡痘病毒 10 2株攻击 ,结果不同代次的重组病毒均可以使免疫鸡抵抗传染性喉气管炎病毒和鸡痘病毒强毒的攻击。鸡体内病毒传代试验表明 ,重组病毒在接种部位仅存在 6天 ,之后就检测不到病毒 ,重组病毒通过SPF鸡连续传代 ,不存在病毒返祖的可能。由此可以得出一个结论 ,rFPV -ILTVgB在结构上和免疫原性上是稳定的 ,无论是在体外传代 ,还是在体内均可以稳定遗传 ,不存在因为接种重组疫苗而给免疫鸡群带来安全威胁的可能 ,完全可以作为疫苗毒株进行商品化开发。

关键词：传染性喉气管炎病毒鸡痘重组鸡痘病毒疫苗遗传稳定性

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鸡传染性支气管炎病毒中国地方分离株M基因的分子特征

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中国预防兽医学报 2001年第6期23卷 404-407页

作者：刘胜旺贺秀瑗孔宪刚王玮童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本实验根据已经发表的鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)M蛋白基因序列设计并合成一对引物 ,利用RT_PCR扩增得到了IBV新疆分离株LX4株 (HA价为 2 7)M基因 678bp的片段 ,将该片段克隆到PUC18载体上 ,通过对所得到的重组质粒进行酶切分析、PCR鉴... 详细信息

本实验根据已经发表的鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)M蛋白基因序列设计并合成一对引物 ,利用RT_PCR扩增得到了IBV新疆分离株LX4株 (HA价为 2 7)M基因 678bp的片段 ,将该片段克隆到PUC18载体上 ,通过对所得到的重组质粒进行酶切分析、PCR鉴定 ,证明得到了含有目的基因片段的阳性重组质粒。采用Sanger’s双脱氧末端终止法对插入片段进行核苷酸序列测定 ,获得了IBV_LX4株M基因的核苷酸序列 ,利用DNASIS分析软件 ,将它与GENBANK中发表的 15株国外参考毒株相比较 ,发现核苷酸的同源性 (除D14 66和DE0 72外 )为 85 % ～92 % ,氨基酸的同源性为 83 % ～92 % ,与国内参考株 (H5 2_GD)相比分别为 90 %和 92 % ,确证我们得到的克隆片段为IBV -LX4株的M基因。且含有两个糖基化位点 ,9个高度保守的半胱氨酸 ,三个跨膜区域。

关键词：传染性支气管炎病毒 M基因分子特征鸡病毒

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表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒疫苗的安全性试验与最小免疫剂量测定

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中国预防兽医学报 2001年第6期23卷 441-444页

作者：王云峰智海东王玫仇华吉周艳君田志军张绍杰童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

将表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因的重组鸡痘病毒 (rFPV_ILTVgB)通过鸡胚成纤维细胞培养 ,加入适当的保护剂制成冻干疫苗。取 3批冻干疫苗 ,生理盐水稀释后分别经翅内侧无血管处皮下接种 14日龄和 5 0日龄SPF鸡 ,接种剂量为 5... 详细信息

将表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因的重组鸡痘病毒 (rFPV_ILTVgB)通过鸡胚成纤维细胞培养 ,加入适当的保护剂制成冻干疫苗。取 3批冻干疫苗 ,生理盐水稀释后分别经翅内侧无血管处皮下接种 14日龄和 5 0日龄SPF鸡 ,接种剂量为 5× 10 6 PFU ,接种后 3天出现局部反应 ,5天局部肿胀达到最大 ,接种鸡无其它全身反应 ,精神、食欲以及发育等均不受影响 ,说明重组病毒对试验鸡是安全的。取其中的 2 0 0 0 0 3批疫苗 ,用生理盐水作 2 10 -2 ～ 2 10 -5稀释后 ,翅内侧无血管处皮下接种 4 0日龄SPF鸡 ,免疫后 4周分别攻击传染性喉气管炎病毒WG株和鸡痘病毒 10 2株 ,结果表明 ,重组病毒对试验鸡翅内侧皮下接种能产生良好的免疫力 ,在接种剂量为 2 10 -2 ～ 2 10 -40 .1ml/鸡的范围内可以使全部试验鸡产生局部反应 ,当接种剂量为 2 10 -50 .2ml/鸡时可以使部分试验鸡 ( 5 /15 )产生局部反应 ,鸡体对重组疫苗的最小反应剂量为 2 10 -40 .1ml(相当于 10 0 0PFU)。攻毒试验结果进一步证明 ,当接种剂量为 2 10 -40 .1ml(相当于 10 0 0PFU)时可以使免疫鸡产生可靠免疫力 ,抵抗传染性喉气管炎病毒WG株强毒和鸡痘病毒 10 2株的攻击 ,降低鸡群的发病率和病死率。这些结果说明。

关键词：传染性喉气管炎鸡痘重组鸡痘病毒疫苗最小免疫剂量安全性试验

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传染性喉气管炎病毒王岗株糖蛋白gB基因在重组杆状病毒中的表达

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中国预防兽医学报 2001年第5期23卷 321-324页

作者：张绍杰倪健强孟松树王柳仇华吉王云峰童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

将克隆到pUC119中的传染性喉气管炎病毒 (ILTV)糖蛋白gB基因 ,通过EcoRI位点亚克隆到杆状病毒转移载体pVL1393中 ,构建成重组杆状病毒转移载体rpVLgB。将rpVLgB转移载体质粒与杆状病毒DNA(Bac_N_BlueDNA)共转染Sf9昆虫细胞 ,经 3轮蚀斑... 详细信息

将克隆到pUC119中的传染性喉气管炎病毒 (ILTV)糖蛋白gB基因 ,通过EcoRI位点亚克隆到杆状病毒转移载体pVL1393中 ,构建成重组杆状病毒转移载体rpVLgB。将rpVLgB转移载体质粒与杆状病毒DNA(Bac_N_BlueDNA)共转染Sf9昆虫细胞 ,经 3轮蚀斑纯化 ,获得重组病毒并命名为rpVL_ILTVgB。PCR方法鉴定证明gB基因正确插入到杆状病毒基因组中 ,直接免疫荧光试验和Dot_ELISA结果均表明gB基因在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中获得表达 ,表达的gB蛋白将作为鸡传染性喉气管炎的亚单位疫苗和诊断抗原。

关键词：传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB 重组杆状病毒基因鸡病毒

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马传染性贫血病毒转录调控

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中国预防兽医学报 2001年第6期23卷 477-479页

作者：周家喜孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

马传染性贫血病毒转录调控需要细胞因子、病毒蛋白及病毒RNA及DNA顺式作用元件之间复杂的相互作用。这些调控因素正在不断被发现和鉴定 ,并进一步研究其功能和复杂的相互作用。本文旨在阐述马传染性贫血病毒转录调控过程中涉及的各种调... 详细信息

马传染性贫血病毒转录调控需要细胞因子、病毒蛋白及病毒RNA及DNA顺式作用元件之间复杂的相互作用。这些调控因素正在不断被发现和鉴定 ,并进一步研究其功能和复杂的相互作用。本文旨在阐述马传染性贫血病毒转录调控过程中涉及的各种调控因素及其相互作用机制。

关键词：转录调控 DNA结合蛋白长未端重复序列马传染性贫血病毒

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鸡传染性支气管炎病毒核蛋白基因的克隆及在杆状病毒系统中的表达

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中国预防兽医学报 2001年第6期23卷 401-403页

作者：刘胜旺孔宪刚王玮高磊童光志谷守林中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

利用反转录_聚合酶链式反应 (ReverseTranscription_polymeraseChainReaction ,PT_PCR)技术扩增鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)中国地方分离株的核蛋白基因 ,并对其序列进行了测定 ,结果表明该病毒株核蛋白基因长度为 12 3 0bp ,编码蛋白由... 详细信息

利用反转录_聚合酶链式反应 (ReverseTranscription_polymeraseChainReaction ,PT_PCR)技术扩增鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)中国地方分离株的核蛋白基因 ,并对其序列进行了测定 ,结果表明该病毒株核蛋白基因长度为 12 3 0bp ,编码蛋白由4 0 9个氨基酸残基组成。与已发表的参考毒株进行核苷酸同源性比较 ,发现与澳大利亚群毒株的亲缘关系最为密切。在此基础上 ,本实验构建了杆状病毒重组转移载体pBlue_N ,将其与线性化的杆状病毒DNA共转染Sf9昆虫细胞 ,经过三轮蚀斑纯化和PCR鉴定 ,获得重组杆状病毒rBac_N。SDS_PAGE分析和Westernblot检测的结果表明核蛋白基因在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞内获得表达 ,融合蛋白表达量占细胞蛋白总量的 19.4

关键词：鸡传染性支气管炎病毒核蛋白基因序列重组杆状病毒表达

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我国禽流感防制研究进展

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中国兽医学报 2001年第1期21卷 103-106页

作者：于康震付朝阳崔尚金步志高唐秀英中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

行性感冒(简称禽流感,avian influenza,AI)是由A型流感病毒引起的禽类烈性传染病,被国际兽疫局定为A类传染病,并被列入国际生物武器公约动物类传染病名单.禽流感可表现为亚临床、轻度呼吸系统疾病、产蛋下降及急性致死性疾病等多种形式... 详细信息

行性感冒(简称禽流感,avian influenza,AI)是由A型流感病毒引起的禽类烈性传染病,被国际兽疫局定为A类传染病,并被列入国际生物武器公约动物类传染病名单.禽流感可表现为亚临床、轻度呼吸系统疾病、产蛋下降及急性致死性疾病等多种形式.世界各地历次由特定毒株引起的禽流感的暴发和流行,均招致禽只的大量死亡和生产性能急剧下降,造成了巨大的经济损失[1].1997年香港H5N1和1999年内地和香港H9N2禽流感感染人事件的发生,更突出地显示了禽流感的公共卫生意义.

关键词：禽流行性感冒流行病学诊断技术疫苗防制中国

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应用重组N蛋白-ELISA检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的研究

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中国兽医杂志 2001年第3期37卷 3-5页

作者：王云峰周艳君仇华吉钱平蔡雪晖柴文君童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

利用昆虫杆状病毒表达系统表达的猪繁殖与呼吸综合征重组 N蛋白作为抗原 ,包被聚苯乙烯微量反应板 ,建立了猪繁殖与呼吸综合征重组 N蛋白 - EL ISA诊断方法。试验证明 ,该方法对其他 8种猪疫病阳性血清均无交叉反应 ,对标准阳性样品的... 详细信息

利用昆虫杆状病毒表达系统表达的猪繁殖与呼吸综合征重组 N蛋白作为抗原 ,包被聚苯乙烯微量反应板 ,建立了猪繁殖与呼吸综合征重组 N蛋白 - EL ISA诊断方法。试验证明 ,该方法对其他 8种猪疫病阳性血清均无交叉反应 ,对标准阳性样品的检出率为 10 0 %。具有敏感性高。

关键词：猪繁殖呼吸综合征 ELISA 重组N蛋白抗体检测诊断

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病毒性繁殖障碍:养猪业面临的新课题

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中国兽医杂志 2001年第3期37卷 49-50页

作者：仇华吉童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

当前，由于现代兽医防疫技术和饲养管理措施的广泛应用，一些严重威胁养猪业发展的烈性传染病(如猪瘟等)已在全球范围内基本得到遏制，有些国家甚至已经消灭了几种重要疫病(如伪狂犬病等)。但随着集约化养猪业的发展，那些原本不太引入... 详细信息

当前，由于现代兽医防疫技术和饲养管理措施的广泛应用，一些严重威胁养猪业发展的烈性传染病(如猪瘟等)已在全球范围内基本得到遏制，有些国家甚至已经消灭了几种重要疫病(如伪狂犬病等)。但随着集约化养猪业的发展，那些原本不太引入注目的疾病其危害性逐渐显现出来，这就是繁殖障碍、呼吸障碍和消化障碍等3大类疾病，其中以流产、木乃伊和死产为主要特征的繁殖障碍，给现代养猪业提出了严峻挑战。1 病毒性疾病：引起繁殖障碍的主要原因繁殖障碍是一类综合征候群，包括：不育、空怀、屡配不孕和反复发情、胚胎死亡和消溶、死胎、木乃伊胎和畸形胎、流产、死产和产弱仔等等，广义上也包括公猪的生殖机能异常(生殖道感染、性欲丧失、精液异常等)。本文旨在讨论母猪繁殖障碍的有关问题。导致母猪繁殖障碍的因素主要有两类：第一类是引起生殖道原发性感染的病原，占流产、木乃伊和死产的30%～40%左右，第二类是毒素、环境和营养等非传染性因素，约占60%～70%［1］。见表1。尽管非传染性因子占重要比例，但传染性因子(尤其是病毒)更加令人关注。据认为，引起母猪繁殖障碍的病毒有十几种，其中影响较大的有伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)和猪瘟病毒(HCV)［2］。这些病毒虽然理化性质不一，临床症状各异，但它们均可通过胎盘感染胎儿，进而影响其发育和存活，感染结局主要取决于病毒特性以及感染母猪所处的妊娠阶段。

关键词：猪群病毒性疾病繁殖障碍

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