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NDV La Sota、V4疫苗免疫鸡及免疫攻毒鸡的主要特异性血清抗体动态变化规律比较

中国预防兽医学报 2001年第3期23卷 199-202页

作者：孙建宏曹殿军刘培欣闫丽辉陈杰曲鲁江刘宝全中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨15001 东北农业大学动物医学院

本研究应用间接ELISA方法对新城疫LaSota和V4疫苗免疫SPF鸡及免疫后攻毒SPF鸡的血清中新城疫病毒(NDV)特异性HI抗体、IgM和IgG抗体水平的动态变化进行了检测。结果表明 ,V4较LaSota疫苗免疫鸡HI抗体提前 3天左右出现 ,但除高峰期 (1周左... 详细信息

本研究应用间接ELISA方法对新城疫LaSota和V4疫苗免疫SPF鸡及免疫后攻毒SPF鸡的血清中新城疫病毒(NDV)特异性HI抗体、IgM和IgG抗体水平的动态变化进行了检测。结果表明 ,V4较LaSota疫苗免疫鸡HI抗体提前 3天左右出现 ,但除高峰期 (1周左右 )外 ,其HI抗体水平均低于LaSota免疫鸡。LaSota疫苗免疫鸡血清中NDV特异性IgM和IgG抗体水平高于V4免疫鸡 ,IgG抗体高峰较V4免疫鸡提前约 2周出现 ,攻毒后 ,LaSota免疫鸡血清中特异性IgG和IgG回忆应答显著 ,而V4免疫鸡IgM和IgG回忆应答不明显。

关键词：新城疫血清抗体疫苗免疫鸡攻毒鸡

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检测NDV特异性IgG、IgM、IgA的间接ELISA方法的建立

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中国预防兽医学报 2001年第1期23卷 23-25页

作者：孙建宏曹殿军刘培欣闫丽辉孔宪刚刘宝全中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院

本试验以新城疫病毒 (NDV)感染的鸡胚尿囊液经差速离心 ,庶糖密度梯度离心提纯的NDV为包被抗原 ,以纯化的鸡IgG、IgM及IgA免疫兔 ,制备辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡IgG、IgM及IgA ,分别建立了检测NDV特异性IgG、IgM、IgA的间接ELISA方法 ... 详细信息

本试验以新城疫病毒 (NDV)感染的鸡胚尿囊液经差速离心 ,庶糖密度梯度离心提纯的NDV为包被抗原 ,以纯化的鸡IgG、IgM及IgA免疫兔 ,制备辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡IgG、IgM及IgA ,分别建立了检测NDV特异性IgG、IgM、IgA的间接ELISA方法 ,抗原最适包被量为 1.34μg/孔。酶标兔抗鸡IgG、IgM、IgA的最佳稀释度分别为 1∶40 0 ,1∶40 0 ,1∶10 0 ;血清样品检测IgG时 ,最适工作浓度为 1∶40 0 ,检测IgM时为 1∶5 0。该方法具有特异性强、灵敏度度、快速简便等优点 ,适合于对各类新城疫特异性抗体的动态监测和大批检测。

关键词：新城疫病毒 IgG IgM IgA 间接ELISA 检测方法

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鸡CD4蛋白基因的克隆及其mRNA在淋巴器官中的表达

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中国兽医学报 2001年第5期21卷 482-484页

作者：刘胜旺孔宪刚丁忠庆刘永刚童光志马云燕中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院

从鸡胸腺、脾脏、哈德氏腺、外周血液和法氏囊等免疫器官中分离淋巴细胞 ,应用 RT-PCR对这些免疫器官中鸡 CD4分子 m RNA的表达进行了研究。同时 ,用 RT-PCR对鸡脾淋巴细胞 CD4分子 c DNA进行了克隆和序列测定。结果表明 ,在上述器官中 ... 详细信息

从鸡胸腺、脾脏、哈德氏腺、外周血液和法氏囊等免疫器官中分离淋巴细胞 ,应用 RT-PCR对这些免疫器官中鸡 CD4分子 m RNA的表达进行了研究。同时 ,用 RT-PCR对鸡脾淋巴细胞 CD4分子 c DNA进行了克隆和序列测定。结果表明 ,在上述器官中 ,法氏囊淋巴细胞不表达鸡 CD4分子 m RNA,其他器官中均有表达。通过序列分析表明 ,本试验扩增得到的基因为编码鸡

关键词： CD4基因克隆mRNA 淋巴器官表达鸡

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重组逆转录病毒介导的neo^R基因在公鼠生殖系细胞的转移

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中国兽医学报 2001年第6期21卷 573-575页

作者：王凤阳张守峰赵君池海英孟庆文扈荣良殷震解放军军需大学军事兽医研究所吉林长春130062 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

将感染滴度为 10 6cfu/ m L、携带新霉素磷酸转移酶 (neo R)基因的重组逆转录病毒与台盼蓝、polybrene按一定比例配制成注射液 ,单侧睾丸注入 14～ 16日龄公鼠曲细精管以体内感染精原干细胞 ,进行重组逆转录病毒 -精原干细胞介导的基... 详细信息

将感染滴度为 10 6cfu/ m L、携带新霉素磷酸转移酶 (neo R)基因的重组逆转录病毒与台盼蓝、polybrene按一定比例配制成注射液 ,单侧睾丸注入 14～ 16日龄公鼠曲细精管以体内感染精原干细胞 ,进行重组逆转录病毒 -精原干细胞介导的基因转移研究。注射后 45 d,采集公鼠精液 ,进行精液品质与 PCR检测。结果表明 ,在优化的注射条件下 ,曲细精管内注射重组逆转录病毒后 ,不会干扰小鼠精子的正常发育能力 ,并能够将外源基因整合到精子基因组 ,从而首次通过重组逆转录病毒成功地实现了 neo

关键词：重组逆转录病毒 neo^R基因生殖系细胞基因转移小鼠

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含LacZ重组逆转录病毒的制备及其在NIH_3T_3细胞的表达

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中国预防兽医学报 2001年第5期23卷 329-331页

作者：王凤阳孟庆文扈荣良池海英张茂林于康震殷震解放军军需大学全军基因工程实验室吉林长春130062 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

构建了含有 3.7kbLacZ的重组逆转录病毒载体 ,转染包装细胞系PA317后 ,经G418筛选 ,得到了G418抗性的产毒细胞系 ,用收获的含有重组逆转录病毒粒子的浓缩病毒上清 ,感染NIH3T3细胞 ,经X_gal染色检测 ,发现表达了LacZ的NIH3T3细胞呈蓝色。

关键词：重组逆转录病毒 LacZ NIH3T3细胞基因表达外源基因转基因

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鸡贫血病病毒长春株VP3基因的克隆及序列分析

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中国兽医学报 2001年第6期21卷 546-548页

作者：宋秀龙章金刚常国权陈奖励中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 解放军军需大学动物科技系吉林长春130062

采用 PCR扩增方法成功克隆了鸡贫血病病毒 (CAV)长春分离株的 VP3基因 ,并进行了核苷酸序列测定。通过与 TK5 80 3、SJ1株进行序列比较 ,发现长春分离株 VP3基因与 TK5 80 3仅有 1个碱基差异 ,而氨基酸序列完全相同 ;与山东 SJ1株有 3... 详细信息

采用 PCR扩增方法成功克隆了鸡贫血病病毒 (CAV)长春分离株的 VP3基因 ,并进行了核苷酸序列测定。通过与 TK5 80 3、SJ1株进行序列比较 ,发现长春分离株 VP3基因与 TK5 80 3仅有 1个碱基差异 ,而氨基酸序列完全相同 ;与山东 SJ1株有 3个碱基差异和

关键词：鸡贫血病病毒 VP3基因基因克隆序列分布

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新城疫病毒F_(48)E_9株P基因的克隆及鉴定

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中国预防兽医学报 2001年第4期23卷 262-265页

作者：王海艳曹殿军闫丽辉刘培欣曲鲁江李红梅柴迎梅张庆玲内蒙古农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 新疆农业大学畜牧分院

根据NDVP蛋白己知基因序列设计合成了一对引物PU/PL ,利用RT_PCR扩增出了F4 8E9株P基因 12 72bp的片段 ,将该片段克隆到pMD18_TVector上 ,并对所得到的重组质粒进行酶切分析、PCR鉴定 ,结果证明我们得到了这个基因片段的阳性重组子。为... 详细信息

根据NDVP蛋白己知基因序列设计合成了一对引物PU/PL ,利用RT_PCR扩增出了F4 8E9株P基因 12 72bp的片段 ,将该片段克隆到pMD18_TVector上 ,并对所得到的重组质粒进行酶切分析、PCR鉴定 ,结果证明我们得到了这个基因片段的阳性重组子。为了更充分证实所得阳性质粒的可靠性 ,采用Sanger’s双脱氧末端终止法对阳性重组子从 5’端进行核苷酸序列测定 ,获得了F4 8E9株P基因片段 5’端的基因序列 ,利用DNASIS分析软件 ,将F4 8E9株与LaSota株的相应序列进行比较 ,其核苷酸序列同源性为 83 7%。至此 ,我们获得了F4

关键词：新城疫病毒 P蛋白基因克隆

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传染性法氏囊病病毒超强毒株F9811VP_2基因的克隆及序列分析

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中国兽医学报 2001年第3期21卷 223-226页

作者：宋秀龙李春梅王笑梅陈冠春陈奖励王秀荣中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 延边大学农学院动物医学系吉林龙井133400

根据 NCBIG Gene Bank记载的传染性法氏囊病病毒超强毒 ( vv IBDV) OKYM株的核苷酸序列 ,设计并合成 1对特异性扩增 IBDV主要宿主保护性抗原 VP2 基因的引物。从 IBDV F981 1感染发病鸡法氏囊组织中提取病毒 RNA,经 RT-PCR扩增出约 1 .... 详细信息

根据 NCBIG Gene Bank记载的传染性法氏囊病病毒超强毒 ( vv IBDV) OKYM株的核苷酸序列 ,设计并合成 1对特异性扩增 IBDV主要宿主保护性抗原 VP2 基因的引物。从 IBDV F981 1感染发病鸡法氏囊组织中提取病毒 RNA,经 RT-PCR扩增出约 1 .5kb的基因片段 ,采用平端连接法将此基因片段克隆至p UC1 1 9质粒的 Sma 位点上。经核苷酸序列测定 ,并与国内外其他 vv IBDV VP2 基因序列进行比较分析 ,发现 F981 1与 OKYM在 VP2 基因上有 1 8个核苷酸不同 ,但在氨基酸序列上仅 2 1 2位存在差异 ,从而从分子生物学角度证明 F981 1为 vv IBDV。对 1 4 3～ 3 82氨基酸区域所作系统进化树分析表明 ,F981 1、G92 0 1与OKYM、UK661、HK4 6相近 ,而 F950 2、G93 0 3与 OKYM、U K661、HK4 6较远 ,说明我国存在许多不同的vv

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株基因克隆序列分析

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马传染性贫血病毒基因组部分转录图谱

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病毒学报 2001年第3期17卷 245-249页

作者：刘相冬张宝山孔宪刚王滨有孙成群刘永刚周家喜王凯波刘建华哈尔滨医科大学公共卫生学院黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

以马传贫驴白细胞弱毒和驴强毒分别接种培养细胞和试验动物 ,分别在体外和体内条件下 ,对病毒的各种转录产物进行克隆和序列分析。通过与病毒基因组的序列进行比较 ,用实验的方法绘制出了两株病毒在相应试验条件下的转录图谱 ,确定了各... 详细信息

以马传贫驴白细胞弱毒和驴强毒分别接种培养细胞和试验动物 ,分别在体外和体内条件下 ,对病毒的各种转录产物进行克隆和序列分析。通过与病毒基因组的序列进行比较 ,用实验的方法绘制出了两株病毒在相应试验条件下的转录图谱 ,确定了各拼接产物的外显子构成以及拼接供体和拼接受体位点的具体位置。发现两种病毒在外显子 3的上游拼接受体位点 (SA2 )的位置与已报道的EIAV毒株均不相同。

关键词：马传染性贫血病毒转录图谱拼接位点拼接信号病毒基因组

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伪狂犬病诊断方法研究进展

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中国兽医杂志 2001年第5期37卷 39-41页

作者：冉智光童光志重庆市畜牧兽医科学研究所重庆九龙坡400039 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(PrV)感染多种家畜、野生动物而发生的急性传染病，临床上主要表现为发热、奇痒(猪除外)、繁殖障碍和脑脊髓炎，对畜牧业特别是养猪业危害极其严重［1，2］。为正确认识和有效防制该病，研究人员在诊断上进行... 详细信息

伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(PrV)感染多种家畜、野生动物而发生的急性传染病，临床上主要表现为发热、奇痒(猪除外)、繁殖障碍和脑脊髓炎，对畜牧业特别是养猪业危害极其严重［1，2］。为正确认识和有效防制该病，研究人员在诊断上进行了深入研究，建立了许多诊断方法，现综述如下。1　动物实验　　将脑、扁桃体、流产胎儿等病料制成10倍组织悬液，接种实验动物(常用家兔)观察其临床症状以确认。有时也用1～4周龄小鼠作辅助诊断。这是古典而可靠的方法。

关键词：伪狂犬病诊断病毒分离鉴定抗原检测血清抗体检查分子诊断

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