检索结果-内蒙古大学图书馆

专家系统在动物健康及疾病管理中的应用

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预防兽医学进展 2001年第4期3卷 57-61页

作者：王靖飞姜永萍王洪斌东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

专家系统(Expert system,ES)是一个智能计算机程序系统,其内部含有大量的某个领域专家水平的知识与经验,能够利用人类专家的知识和解决问题的方法来处理该领域的问题.

关键词：专家系统动物健康疾病管理

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表达禽流感病毒血凝素基因的重组禽痘病毒的构建

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中国农业科学 2000年第5期33卷 86-90页

作者：陈化兰马文军于康震中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室!哈尔滨150001

为构建表达禽流感病毒 ( AIV)血凝素 ( HA)基因的重组禽痘病毒 ,将禽痘病毒启动子LP2 EP2驱动的 H7亚型 AIV HA基因 c DNA和大肠杆菌 Lac Z基因插入禽痘病毒疫苗株 F- 0 1 7的复制非必需区。经蓝斑筛选后 ,对重组病毒又进行了 3次蚀斑... 详细信息

为构建表达禽流感病毒 ( AIV)血凝素 ( HA)基因的重组禽痘病毒 ,将禽痘病毒启动子LP2 EP2驱动的 H7亚型 AIV HA基因 c DNA和大肠杆菌 Lac Z基因插入禽痘病毒疫苗株 F- 0 1 7的复制非必需区。经蓝斑筛选后 ,对重组病毒又进行了 3次蚀斑克隆。以不同代次重组禽痘病毒核酸为模板 ,利用 H7亚型 AIV HA基因特异的引物进行聚合酶链式反应 ,均扩增出 1条特异的1 .7kb DNA条带。收集不同代次的重组禽痘病毒细胞培养物进行免疫斑点试验 ,均检测到 HA蛋白 ,表明 H7AIV HA在重组禽痘病毒中获得了成功表达。该重组禽痘病毒的构建为 AIV病毒活载体疫苗的研制奠定了基础

关键词：禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒

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新城疫F48E9病毒体外诱导的鸡T淋巴细胞程序性死亡

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中国农业科学 2000年第1期33卷 85-89页

作者：刘胜旺陈洪岩孔宪刚刘永刚卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所!兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

应用流式细胞仪及DNA琼脂糖凝胶电泳技术研究了我国鸡新城疫标准强毒F48E9株体外诱导鸡T淋巴细胞的程序性死亡现象。同时,对其灭活毒以及从该毒株提取的囊膜蛋白诱导鸡T淋巴细胞的程序性死亡现象进行了观察,并以健康SPF鸡胚尿囊液作为... 详细信息

应用流式细胞仪及DNA琼脂糖凝胶电泳技术研究了我国鸡新城疫标准强毒F48E9株体外诱导鸡T淋巴细胞的程序性死亡现象。同时,对其灭活毒以及从该毒株提取的囊膜蛋白诱导鸡T淋巴细胞的程序性死亡现象进行了观察,并以健康SPF鸡胚尿囊液作为对照。结果发现,F48E9株及其灭活毒体外均可诱导鸡T淋巴细胞发生程序性死亡,而从病毒中提取的囊膜蛋白及SPF鸡胚尿囊液无此特性。新城疫F48E9株体外诱导鸡T淋巴细胞程序性死亡这一现象初步表明,新城疫强毒F48E9株感染鸡T淋巴细胞数量的减少和功能的降低以及由此所致的感染鸡免疫功能的降低可能和病毒诱导鸡T淋巴细胞发生程序性死亡有关。

关键词：新城疫F48E9病毒鸡T淋巴细胞程序性死亡

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鸡传染性喉气管炎病毒王岗株gC和gD基因的克隆及序列分析

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中国兽医学报 2000年第2期20卷 108-111页

作者：孟松树郭鑫张绍杰王柳仇华吉王玫童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

根据已发表的传染性喉气管炎病毒 ( ILTV) SA-2株的核酸序列 ,设计了 1对引物 ,以 ILTV中国王岗株 DNA为模板 ,PCR法扩增出 1条 1 .3 9kb的基因片段 ,将扩增产物插入到真核表达质粒 p CRTM 3 -Uni,得到重组质粒 p TA-g D。另将克隆到 p ... 详细信息

根据已发表的传染性喉气管炎病毒 ( ILTV) SA-2株的核酸序列 ,设计了 1对引物 ,以 ILTV中国王岗株 DNA为模板 ,PCR法扩增出 1条 1 .3 9kb的基因片段 ,将扩增产物插入到真核表达质粒 p CRTM 3 -Uni,得到重组质粒 p TA-g D。另将克隆到 p Bluescript SK质粒中的 g C基因酶切后 ,插入到 p CRTM 3 -Uni载体 ,得到重组质粒 p TA-g C。经电泳分析、酶切、PCR鉴定后 ,进行序列测定。序列分析表明 ,ILTV王岗株 g C基因的编码序列与 SA-2株的核苷酸同一性为 99%,而王岗株 g D基因的编码序列在其 C端多了 1 7个核苷酸 ,其余部分的同一性为 97%。鉴于 g C、g D基因在诱导机体产生对 ILTV的免疫应答中的作用 ,g C、g D基因的克隆及其真核表达质粒的构建 ,为

关键词： gC基因 gD基因克隆序列分析鸡 ILTV 基因免疫

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鸡γ-干扰素基因的分子克隆与序列测定

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中国兽医学报 2000年第3期20卷 228-230页

作者：刘胜旺陈洪岩孔宪刚张宝山马云燕童光志卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

应用逆转录 -聚合酶链式反应 ( RT-PCR)技术 ,从 Con A诱导培养 2 4 h的鸡脾淋巴细胞中扩增得到了大小约 50 0 bp的基因 ,将其平端连接到 p UC1 9质粒上 ,进行质粒 PCR和 Eco RI、Hind 双酶切鉴定后 ,筛选阳性重组克隆。序列分析表明 ... 详细信息

应用逆转录 -聚合酶链式反应 ( RT-PCR)技术 ,从 Con A诱导培养 2 4 h的鸡脾淋巴细胞中扩增得到了大小约 50 0 bp的基因 ,将其平端连接到 p UC1 9质粒上 ,进行质粒 PCR和 Eco RI、Hind 双酶切鉴定后 ,筛选阳性重组克隆。序列分析表明 ,该基因阅读开放框架由 4 92个核苷酸组成 ,与马和人γ-干扰素基因序列的同源性分别为 3 5%和 3 2 %,与鸡型干扰素基因的同源性仅为 1 5%,与国外报道的鸡 γ-干扰素基因序列完全一致。表明鸡脾淋巴细胞受到有丝分裂原刺激后 ,其 γ-干扰素基因 m RNA发生了表达 ,试验成功地克隆得到了鸡

关键词： γ-干扰素淋巴细胞鸡基因克隆序列分析

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马传染性贫血野毒辽宁株前病毒全基因组核苷酸序列测定

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 46-51页

作者：刘红全王柳童光志杨志彪仇华吉孔宪刚智海东李昌文中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

采取马传染性贫血病毒（ＥＩＡＶ）辽宁野毒株（Ｌ株）感染马的血液，分离白细胞。提取白细胞中的ＤＮＡ，并以此为模板，利用ＰＣＲ技术分四个片段扩增ＥＩＡＶ前病毒ＤＮＡ。将其分别克隆到载体质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ中... 详细信息

采取马传染性贫血病毒（ＥＩＡＶ）辽宁野毒株（Ｌ株）感染马的血液，分离白细胞。提取白细胞中的ＤＮＡ，并以此为模板，利用ＰＣＲ技术分四个片段扩增ＥＩＡＶ前病毒ＤＮＡ。将其分别克隆到载体质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ中，经酶切鉴定后测序。对测序结果分析、拼接，得到ＥＩＡＶ　Ｌ株前病毒基因组全序列。

关键词：马传贫辽宁野毒前病毒核苷酸序列

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PRRSV核衣壳蛋白基因在杆状病毒中的表达

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中国兽医学报 2000年第5期20卷 434-437页

作者：王云峰仇华吉周彦君张绍杰郭宝清倪健强童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农牧学院国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

根据已发表的猪生殖 -呼吸道综合征病毒 ( PRRSV) CH-1 a分离株核衣壳 ( N)蛋白基因核苷酸序列和杆状病毒转移载体 p Blue-Bac-His B多角体蛋白阅读框架 ,设计合成了 1对特异性引物 P7S1 /P7R1。应用PCR对重组质粒 p UC1 8-ORF7扩增 ,... 详细信息

根据已发表的猪生殖 -呼吸道综合征病毒 ( PRRSV) CH-1 a分离株核衣壳 ( N)蛋白基因核苷酸序列和杆状病毒转移载体 p Blue-Bac-His B多角体蛋白阅读框架 ,设计合成了 1对特异性引物 P7S1 /P7R1。应用PCR对重组质粒 p UC1 8-ORF7扩增 ,获得了 CH-1 a株 N基因的片段。经 Hind 和 Bgl 双酶切 ,将其定向克隆到同样双酶切的 p Blue-Bac-His B的 PH启动子下游 ,获得转移载体 p Blue-Bac-His B-ORF7。将转移载体p Blue-Bac His B-ORF7与苜蓿银蚊夜蛾多核型多角体病毒 ( Ac MNPV,简称杆状病毒 )线性化 DNA ( Bac-N-Blue TMDNA)共转染 Sf9细胞 ,经过蓝斑筛选和蚀斑纯化 ,获得重组病毒 r Bac7。经用引物 P7S1 /P7R1和杆状病毒多角体蛋白基因通用引物 PCR鉴定 ,证明目的基因已插入到杆状病毒中。将重组病毒接种于对数生长期的 Sf9细胞 ,分别于感染后 2 4、4 8、72、96、1 2 0 h收集感染细胞 ,经 SDS-PAGE和 Western blot分析 ,结果表明 ,细胞接种重组病毒 2 4 h即开始表达重组蛋白 ,至 96h达到峰值 ,占整个细胞蛋白的 8.4 % ,此后开始下降。表达产物为融合蛋白 ,大小约 2 0 0 0 0。将重组病毒感染的 Sf9细胞用抗 PRRSV N蛋白的单克隆抗体SDOW-1 7进行间接免疫荧光试验。

关键词：猪生殖-呼吸道综合征病毒杆状病毒表达 PRRSU

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伪狂犬病病毒(PrV)糖蛋白gE基因在重组杆状病毒中的表达

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中国预防兽医学报 2000年第3期22卷 213-215页

作者：倪建强张绍杰冉智光仇华吉王柳孟松树王玫童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

应用PCR方法扩增出 1 .8Kb的伪狂犬病毒糖蛋白gE基因 ,克隆到pUC1 1 9中形成重组质粒pRZE。经测序鉴定后再将gE基因定向亚克隆到杆状病毒转移载体pVL1 392中 ,形成重组质粒pVLgE。将pVLgE与杆状病毒线性DNA(BAC_N_BlueDNA)共转染Sf9昆... 详细信息

应用PCR方法扩增出 1 .8Kb的伪狂犬病毒糖蛋白gE基因 ,克隆到pUC1 1 9中形成重组质粒pRZE。经测序鉴定后再将gE基因定向亚克隆到杆状病毒转移载体pVL1 392中 ,形成重组质粒pVLgE。将pVLgE与杆状病毒线性DNA(BAC_N_BlueDNA)共转染Sf9昆虫细胞 ,经三轮蚀斑纯化 ,获得重组病毒rpVLgE。通过PCR方法鉴定证明gE基因正确插入到杆状病毒基因组中 ,直接免疫荧光试验和WesternBlot结果表明gE基因在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中获得高效表达。表达的gE蛋白将作为伪狂犬病强毒和gE基因缺失弱毒疫苗鉴别诊断ELISA方法的抗原。

关键词：糖蛋白E 猪伪狂犬病 PrV 基因表达杆状病毒

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外源基因在甲醇酵母Pichia pastoris中的表达策略

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 179-180页

作者：钱平仇华吉童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

甲醇酵母Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ表达系统是近几年发展起来的一个真核表达系统，在其乙醇氧化酶ＡＯＸ１基因启动子的控制下，某些外源基因（如ＴＮＦ、ＥＧＦ等）的表达量可达克每升以上。虽然该系统是一种优良的表达系统，... 详细信息

甲醇酵母Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ表达系统是近几年发展起来的一个真核表达系统，在其乙醇氧化酶ＡＯＸ１基因启动子的控制下，某些外源基因（如ＴＮＦ、ＥＧＦ等）的表达量可达克每升以上。虽然该系统是一种优良的表达系统，但有许多因素影响外源基因在其中的表达，包括外源基因的拷贝数及整合到酵母染色体的位置和方式、ｍＲＮＡ的５’和３’非翻译区（ＵＴＲ）、转录起始密码子的上下文、外源基因Ａ＋Ｔ的组成与转录和翻译的阻断、密码子的偏爱性、信号肽的特性、产物的稳定性、宿主菌的生理特性、培养基成分和培养条件等。在应用该表达系统过程中，这些因素都需加以考虑。本文将就这些因素作一概述和讨论，以有利于提高外原基因在该系统中的表达水平。

关键词： Pichia pastoris表达系统表达策略

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马传贫病毒白细胞弱毒疫苗毒株反转录酶基因克隆及序列分析比较

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中国预防兽医学报 2000年第2期22卷 99-101页

作者：张宝山刘永刚卢景良孔宪刚刘胜旺杨威马云燕中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

本实验从商品化马传贫弱毒疫苗培养物提纯马传贫疫苗毒病毒粒子并抽提病毒RNA后 ,采用RT_PCR方法扩增并首次克隆了马传贫驴强毒反转录酶 (RTase)基因。经核苷酸序列测定得出反转录酶基因全长 1 6 6 8bp ,编码 5 5 6个氨基酸。通过与已... 详细信息

本实验从商品化马传贫弱毒疫苗培养物提纯马传贫疫苗毒病毒粒子并抽提病毒RNA后 ,采用RT_PCR方法扩增并首次克隆了马传贫驴强毒反转录酶 (RTase)基因。经核苷酸序列测定得出反转录酶基因全长 1 6 6 8bp ,编码 5 5 6个氨基酸。通过与已发表其它马传贫病毒反转录酶基因序列比较 ,发现在氨基酸和核苷酸水平差异率分别为 1 4 .0 %和 1 6 .6 %。变异氨基酸随机分布于整个基因上 ,无明显规律。在反转录病毒高度保守的酶基因上发现这样大的差异 ,展示出马传贫驴强毒作为马传贫弱毒疫苗亲本毒株的独特分子特性。

关键词：马传贫驴强毒反转录酶基因克隆序列分析 EIAV

来源：评论

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