检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 44-45页

作者：孟庆文曹素芳李媛金红于康震中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

拟构建绿色荧光蛋白（ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＦＰ）基因的真核表达载体ｐｃＤＮＡ_３ＧＦＰ，并观察其在ＭＤＣＫ细胞（大肾细胞系）中的表达。以Ｎｏｔ　Ⅰ切取ＧＦＰ后插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ_... 详细信息

拟构建绿色荧光蛋白（ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＦＰ）基因的真核表达载体ｐｃＤＮＡ_３ＧＦＰ，并观察其在ＭＤＣＫ细胞（大肾细胞系）中的表达。以Ｎｏｔ　Ⅰ切取ＧＦＰ后插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ_3，以ＢａｍＨⅠ鉴定方向，以ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥＴＭ将ｐｃＤＮＡ３ＧＦＰ转染至培养的ＭＤＣＫ，经Ｇ４１８筛选ｐｃＤＮＡ３ＧＦＰ阳性克隆，荧光显微镜下观察。结果证实成功构建了含ＧＦＰｃＤＮＡ的真核表达载体ｐｃＤＮＡ３ＧＦＰ，并成功转染ＭＤＣＫ，在荧光显微镜下阳性克隆细胞呈绿色。ＧＦＰ基因可在ＭＤＣＫ细胞中成功表达，并发出绿色荧光，是一良好的报告基因和筛选标记。

关键词：绿色荧光蛋白真核表达载体构建表达检测

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通用伪狂犬病病毒转移载体的构建

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 1-5页

作者：仇华吉童光志周彦君李昌文钱平孔令达中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

克隆伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）Ｂａｒｔｈａ－Ｋ６１株基因组的ＫｐｎⅠ　Ｊ片段，然后亚克隆其中的ＫｐｎⅠ－ＰｓｔⅠ片段，缺失重组质粒中的ＥｃｏＲⅠ位点和ＮｏｔⅠ－Ｈｉｎｄ Ⅲ片段；再用ＡｃｃⅠ切去３７８ｂｐ，在此缺失位置... 详细信息

克隆伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）Ｂａｒｔｈａ－Ｋ６１株基因组的ＫｐｎⅠ　Ｊ片段，然后亚克隆其中的ＫｐｎⅠ－ＰｓｔⅠ片段，缺失重组质粒中的ＥｃｏＲⅠ位点和ＮｏｔⅠ－Ｈｉｎｄ Ⅲ片段；再用ＡｃｃⅠ切去３７８ｂｐ，在此缺失位置插入来源于ｐＣＲ３－Ｕｎｉ的ＣＭＶ启动子、多克隆位点和ＢＧＨｐｏｌｙＡ信号，构建了通用ＰＲＶ转移载体ｐＢｄＴＫ－Ｕｎｉ。此转移载体为改造Ｂａｒｔｈａ－Ｋ６１株及开发二价或多价基因工程疫苗提供了有力工具。

关键词：伪狂犬病病毒 TK基因转移载体

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RT-PCR快速诊断禽流感

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 176-177页

作者：刘明于康震崔尚金孔宪刚唐秀英徐宜为中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

根据禽流感病毒ＮＰ基因的序列分析结果，设计了一对ＮＰ基因特异的引物。采用该对引物，不经病毒分离，直接从禽流感病毒感染鸡的气管、泄殖腔棉拭子和组织样品中提取核酸，ＲＴ～ＰＣＲ可以扩增出３２６ｂｐ的ＮＰ基因片段。采用... 详细信息

根据禽流感病毒ＮＰ基因的序列分析结果，设计了一对ＮＰ基因特异的引物。采用该对引物，不经病毒分离，直接从禽流感病毒感染鸡的气管、泄殖腔棉拭子和组织样品中提取核酸，ＲＴ～ＰＣＲ可以扩增出３２６ｂｐ的ＮＰ基因片段。采用该技术对１４个亚型禽流感病毒标准参考株，４个亚型１２株国内分离野毒株，ＲＴ－ＰＣＲ检测的结果都呈阳性；对新城疫病毒、传染性法氏囊病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒以及减蛋综合症病毒，ＲＴ－ＰＣＲ扩增结果都呈阴性。禽流感病毒Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ（Ｈ５Ｎ１）和Ａ／Ａｆｒｉｃａｎ　Ｓｔａｒｌｉｎｇ／Ｅｎｇｌａｎｄ（Ｈ７Ｎ１）实验感染鸡样品ＲＴ－ＰＣＲ检测与鸡胚病毒分离阳性率分别为３４／４２、３２／４２；２４／５５、２４／５５，二者符合率大于９５％。ＲＴ－ＰＣＲ最少可检测到１０ｐｇ的病毒核酸。对山东某地发病鸡场样品进行ＲＴ－ＰＣＲ检测，只用６个小时就可得出准确的诊断结果，证明ＲＴ－ＰＣＲ检测方法敏感特异，可用于禽流感的快速诊断。

关键词：禽流感病毒诊断反转录-聚合酶链式反应

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应用杆状病毒系统高效表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因

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中国预防兽医学报 2000年第4期22卷 278-281页

作者：周艳君仇华吉王云峰钱平蔡雪晖柴文君翁长江童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

将猪繁殖与呼吸综合征病毒CH_la株囊膜糖蛋白 (GP5 )基因定向亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHisB中 ,与杆状病毒线性DNA(Bac_N_BlueTMDNA)共转染昆虫细胞sf9,经过三轮蚀斑纯化后 ,获得重组杆状病毒rBac_GP5。用该重组病毒感染sf9细胞... 详细信息

将猪繁殖与呼吸综合征病毒CH_la株囊膜糖蛋白 (GP5 )基因定向亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHisB中 ,与杆状病毒线性DNA(Bac_N_BlueTMDNA)共转染昆虫细胞sf9,经过三轮蚀斑纯化后 ,获得重组杆状病毒rBac_GP5。用该重组病毒感染sf9细胞后 ,应用间接免疫荧光试验、SDS_PAGE和Westernblot检测表明 ,GP5基因在杆状病毒系统中获得了高效表达 ,表达产物因糖基化程度差异 ,表观分子量有 2 2、2 5和 30kDa三种总计约占细胞蛋白总量的 2 6 .4%。

关键词：杆状病毒表达系统 GP5基因 PRRS 重组疫苗

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禽轮状病毒的分离鉴定及部分特性研究

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中国预防兽医学报 2000年第1期22卷 1-2页

作者：崔尚金王云峰邓国华于康震中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

从北京某自然腹泻的鸡场中成功地分离到一株禽轮状病毒,并经鸡胚单层肝细胞和MA104 细胞进行了传代培养,对其生物学特性作了部分研究,从而为我国禽轮状病毒的毒株鉴定。

关键词：禽轮状病毒分离鉴定

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传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白gB在重组鸡痘病毒中的表达

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中国预防兽医学报 2000年第3期22卷 205-208页

作者：张绍杰童光志王柳仇华吉倪建强孟松树于力王玫中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

本试验首先用PCR方法扩增出ILTVgB基因 ,将其克隆到质粒pUC1 1 9中 ,并进行了序列分析。将克隆的gB基因再亚克隆到禽痘病毒转移载体质粒中 ,然后 ,通过质脂体方法转染由禽痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中 ,筛选蓝色的重组病毒 ,并... 详细信息

本试验首先用PCR方法扩增出ILTVgB基因 ,将其克隆到质粒pUC1 1 9中 ,并进行了序列分析。将克隆的gB基因再亚克隆到禽痘病毒转移载体质粒中 ,然后 ,通过质脂体方法转染由禽痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中 ,筛选蓝色的重组病毒 ,并对其进行了 6轮蚀斑纯化。该重组病毒通过PCR方法鉴定证明其基因组中含有完整的鸡传染性喉气管炎gB基因。

关键词：鸡糖蛋白gB 重组鸡痘病毒 ILTV 基因表达

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鸡细胞因子研究进展

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中国预防兽医学报 2000年第6期22卷 474-476页

作者：刘胜旺孔宪刚卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

与人类和哺乳动物比较 ,以鸡为主的非哺乳动物细胞因子的研究不但在研究鸡免疫系统的发生及其免疫调节机理中具有重要作用 ,而且在与人类和哺乳动物的比较免疫学、生物发育和进化的研究中具有重要意义。本文从发现、生物学特性及分子特... 详细信息

与人类和哺乳动物比较 ,以鸡为主的非哺乳动物细胞因子的研究不但在研究鸡免疫系统的发生及其免疫调节机理中具有重要作用 ,而且在与人类和哺乳动物的比较免疫学、生物发育和进化的研究中具有重要意义。本文从发现、生物学特性及分子特征等方面对鸡白细胞介素 - 1、6、8、骨髓单核细胞生长因子、转移生长因子_β家族、肿瘤坏死因子_α。

关键词：鸡细胞因子免疫调节白细胞介素肿瘤坏死因子

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一株鸭源H5N1亚型禽流感病毒株部分基因的克隆及序列分析

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 182-183页

作者：李建伟李曦于康震中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室唐秀英田国彬邓国华崔尚金傅朝阳中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

禽流感病毒（ＡＩＶ）属正粘病毒科Ａ型流感病毒属。据其血凝素（ＨＡ）和神经氨酸酶（ＮＡ）抗原性的不同，可分为１５个ＨＡ亚型和９个ＮＡ亚型，其中Ｈ５和Ｈ７亚型的高致病力毒株可引起高致病性禽流感（ＨＰＡＩ）的发生。到目前为... 详细信息

禽流感病毒（ＡＩＶ）属正粘病毒科Ａ型流感病毒属。据其血凝素（ＨＡ）和神经氨酸酶（ＮＡ）抗原性的不同，可分为１５个ＨＡ亚型和９个ＮＡ亚型，其中Ｈ５和Ｈ７亚型的高致病力毒株可引起高致病性禽流感（ＨＰＡＩ）的发生。到目前为止，ＨＰＡＩ已在全世界发生数次大暴发，每一次大暴发都给当地养禽业造成巨大的经济损失。因此，多年来禽流感一直受到禽病工作者的密切关注。尤其是１９９７年香港发生了ＡＩＶ感染人的事件，在全世界引起了轩然大波，世界卫生组织投入了大量的人财物力进行禽流感方面的研究。我国的禽流感研究工作者也付出了艰苦的努力，在禽流感研究方面取得了极大的进展。我国于１９９６年从鹅体内分离到一株对鸡具有高致病力的ＡＩＶ－Ａ／Ｇｏｏｓｅ／ＧｕａｎｇＤｏｎｇ／９６（Ｈ５Ｎ１），并进行了基因克隆和测序。今年，又从鸭体内分离到一株ＡＩＶ，血凝抑制（ＨＩ）和神经氨酸酶抑制（ＮＩ）实验结果表明是Ｈ５Ｎ１亚型。我们对其核蛋白（ＮＰ）基因、基质蛋白（Ｍ）、聚合酶（ＰＢ１、ＰＢ２）基因及ＨＡ、ＮＡ基因分别进行了克隆和测序，结果表明各基因片段长度分别为：ＨＡ－１７３１ｂｐ，ＮＡ－１３７１ｂｐ，ＮＰ－１５４２ｂｐ，Ｍ－１０２０ｂｐ，ＰＢ１－２３?

关键词：禽流感病毒流感病毒群亚型 H5N1 基因

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人与动物流行性感冒病毒

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 185-188页

作者：崔尚金宋晓华王凯波于康震刘尚高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

流行性感冒病毒是引起人与动物流感的重要病原。正如世界卫生组织的一位官员所说，今后２０年很可能再次发生大范围的流感流行。鉴于此，本文综述了流感病毒结构组成和形态学、基因组结构及功能、复制、宿主范围、宿主特异性的遗传基础... 详细信息

流行性感冒病毒是引起人与动物流感的重要病原。正如世界卫生组织的一位官员所说，今后２０年很可能再次发生大范围的流感流行。鉴于此，本文综述了流感病毒结构组成和形态学、基因组结构及功能、复制、宿主范围、宿主特异性的遗传基础、传播和感染、遗传变异（转换和漂移）以及预防和治疗等方面的最新知识，以便帮助人们认识流感与禽流感，从而更好地防制该病。１概述流行性感冒病毒（以下简称流感病毒）是人类与动物呼吸道疾病的重要病原。大多数人经历过流感感染，临床症状为高热和疲劳。人们通常不需要治疗就可在一周内康复。但对于老年人和患有潜在性（心脏的，代谢的和呼吸的）疾病的人，流感传染可以致命。在挪威，在严重的流行病期间，流感在１个季度里引起大约１０００－２０００人死亡。在２０世纪，大的流感流行已经发生多次，在大的流行的间隔中还有小的流行，这表现为死亡率（包括健康的年轻的人）极大的增加。流感引起巨大的经济上的损失，除了较高的医疗保健成本外，还包括由于工作的中断而造成的劳动力的巨大的损失。流感病毒通过变异或／和基因重组一直发生变化，这使它能逃脱宿主机体以前因感染已具备的免疫。对Ａ型流感最有效的预防措施是注射疫苗预防或抗病毒药预防。由于病毒总在...

关键词：流感病毒亚型抗原性动物宿主范围编码流感病毒病流行性感冒聚合酶蛋白宿主蛋白血凝素亚单位疫苗

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传染性喉气管炎病毒(ILTV)gI-gE基因的PCR-RFLP分析

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 52-54页

作者：何召庆王云峰张绍杰孟松树童光志黄骏明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

根据ＵＳＤＡ（美国农业部）标准攻毒株ＩＬＴＶｇＩ－ｇＥ基因的序列，在ＩＬＴＶｇＩ基因、ｇＥ基因及ｇＩ－ｇＥ基因连接部的上下游分别设计了一对引物。以ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取的８株ＩＬＴＶＤＮＡ为模板，分别用这 ... 详细信息

根据ＵＳＤＡ（美国农业部）标准攻毒株ＩＬＴＶｇＩ－ｇＥ基因的序列，在ＩＬＴＶｇＩ基因、ｇＥ基因及ｇＩ－ｇＥ基因连接部的上下游分别设计了一对引物。以ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取的８株ＩＬＴＶＤＮＡ为模板，分别用这３对引物进行ＰＣＲ扩增，均获得了与预期片段大小一致的ＤＮＡ片段。然后，用４种限制性内切酶（Ａｖａ Ⅱ、ＨｉｎｆⅠ、ＤｄｅⅠ和ＨａｅⅢ）对所有ＰＣＲ产物进行ＲＦＬＰ分析。结果发现，ＨｉｎｆⅠ和ＤｄｅｌⅠ可以分别将８株ＩＬＴＶｇＥ基因的酶切图谱分为两类，ＨａｅⅢ可将８株ＩＬＴＶ的ｇＩ－ｇＥ基因连接部的酶切图谱分为两类。这表明不同的ＩＬＴＶ毒株的ｇＥ基因变异较大，而ｇＩ基因则相对比较保守。

关键词：传染性喉气管炎病毒 gI-gE基因聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析

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