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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 8-11页

作者：金红李媛于康震宋晓华何倩妮谷登峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 新疆畜牧科学院兽医研究所乌鲁木齐830000

本研究以牛布氏杆菌抗独特型抗体Ｆ９为免疫原免疫小鼠，对小鼠体液免疫与细胞免疫的变化以及攻毒后Ｆ９对小鼠的保护情况进行了研究。阻断ＥＬＩＳＡ试验证明所制备的Ｆ９具有与布氏杆菌Ｓ_(85)Ａ抗原某一决定簇相似结构的“内影像”... 详细信息

本研究以牛布氏杆菌抗独特型抗体Ｆ９为免疫原免疫小鼠，对小鼠体液免疫与细胞免疫的变化以及攻毒后Ｆ９对小鼠的保护情况进行了研究。阻断ＥＬＩＳＡ试验证明所制备的Ｆ９具有与布氏杆菌Ｓ_(85)Ａ抗原某一决定簇相似结构的“内影像”。以Ｆ９为疫苗免疫小鼠的血清凝集试验及ＴＡＮＡＥ^+细胞检测结果均证明：Ｆ９能够诱导小鼠产生布氏杆菌凝集抗体并能使小鼠外周血淋巴细胞产生对布氏杆菌Ｓ_(85)Ａ抗原的敏感性应答，但Ｆ９组不如布氏杆菌Ｓ１９号疫苗组明显。说明Ｆ９能够刺激机体产生体液反应并能非特异性地增强细胞免疫。但攻毒试验结果又证明，Ｆ９组虽然出菌检出率在绝对数值上略小于健康对照组，但差异不显著，几乎不能对小鼠提供有效保护。

关键词：布氏杆菌抗独特型抗体疫苗

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禽流感病毒重组核蛋白在琼扩诊断中的应用

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 25-27页

作者：邓国华邓国华唐秀英田国彬于康震于康震中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心哈尔滨150001

利用杆状病毒表达禽流感病毒型特异性抗原－核蛋白，并就重组核蛋白作为禽流感琼扩诊断抗原地特异性和敏感性及作为抗原的其它特性进行了研究，并与普通全病毒琼扩抗原进行了应用比较试验，对３５４份现地可疑血清样品进行了检测，结果... 详细信息

利用杆状病毒表达禽流感病毒型特异性抗原－核蛋白，并就重组核蛋白作为禽流感琼扩诊断抗原地特异性和敏感性及作为抗原的其它特性进行了研究，并与普通全病毒琼扩抗原进行了应用比较试验，对３５４份现地可疑血清样品进行了检测，结果表明：该抗原可以特异性地定性检测出所有１５个禽流感病毒亚型的抗血清，与普通全病毒琼扩抗原的检测结果一致，但沉淀线更细密、清晰，保存方便；与我国广泛流行的１５种禽类其它病原体的抗血清没有任何交叉反应，表明该重组核蛋白作为禽流感琼扩抗原特异、敏感、生物安全性更可靠和生产成本更低廉，有利于进一步扩大禽流感疫情调查范围和加大监测力度。

关键词：重组核蛋白琼扩抗原检测

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禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)全基因克隆及序列分析

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中国预防兽医学报 2000年第3期22卷 232-235页

作者：张建林于康震陈化兰唐秀英田国斌中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心哈尔滨150001

本研究用无特定病原体 (SPF)鸡胚增殖禽流感病毒鹅体分离株A/Goose/Guangdong/1/96 (H5N1) (GD1/96 ) ,提取病毒基因组总RNA ,运用反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)技术分别扩增该病毒分离株的 8个基因片段的cDNA ,分别克隆后进行序列测定... 详细信息

本研究用无特定病原体 (SPF)鸡胚增殖禽流感病毒鹅体分离株A/Goose/Guangdong/1/96 (H5N1) (GD1/96 ) ,提取病毒基因组总RNA ,运用反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)技术分别扩增该病毒分离株的 8个基因片段的cDNA ,分别克隆后进行序列测定。序列分析结果表明 ,所扩增到的 8个片段均包含相应的病毒基因的完整开放阅读框架。GD1/96株与 1997年香港禽流感事件中的 4株香港流感病毒分离株 (分别来自人、鸡、鸭和鹅 )的HA基因的高度同源性说明它们可能起源于同一种系 ,但NS基因的差异说明它们分属于不同的基因群系。GD1/96株与香港流感病毒分离株的核苷酸和推导的氨基酸序列的同源性较低 ( 6 3.9%～ 98.1%) ,而香港流感病毒分离株之间的核苷酸和氨基酸序列的同源性很高 ( 96 .5 %～ 10 0 %) ,且香港各流感病毒分离株的NA均缺失 5 7个核苷酸 ( 19个氨基酸 )残基。因此 ,内地H5N1分离株GD1/96与

关键词：禽流感病毒分离株全基因克隆序列分析

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新城疫病毒F48E9株及东北地区流行株F基因遗传变异分析

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中国兽医学报 2000年第2期20卷 117-120页

作者：曹殿军苑纯秀郭鑫闵平孔宪刚卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

采用异硫氰酸胍 /酚 /氯仿抽提一步法 ,提取新城疫病毒 ( NDV) F4 8E9株及 2个东北地区分离株 DB3、DB5基因组 RNA,并以其为模板经反转录合成 F基因 c DNA第 1链 ,再利用 PCR技术分段扩增出 F基因的c DNA。F4 8E9、DB3和 DB5株 F基因的 ... 详细信息

采用异硫氰酸胍 /酚 /氯仿抽提一步法 ,提取新城疫病毒 ( NDV) F4 8E9株及 2个东北地区分离株 DB3、DB5基因组 RNA,并以其为模板经反转录合成 F基因 c DNA第 1链 ,再利用 PCR技术分段扩增出 F基因的c DNA。F4 8E9、DB3和 DB5株 F基因的 c DNA经酶切修饰后 ,插入 p UC1 9的多克隆位点中 ,转化感受态 *** DH5α。经相对分子质量比较、酶切分析及 PCR等鉴定方法筛选出 F4 8E9、DB3和 DB5株 F基因的阳性克隆。然后采用 Sanger′s双脱氧末端终止法对阳性重组子进行核苷酸序列测定 ,证实分别获得了 F4 8E9、DB3和 DB5株 F基因的全长 c DNA。利用 DNASIS及 MEGA分析软件 ,将上述 3个毒株的 F基因序列与基他 1 1株有代表性的 NDV的相应序列进行比较分析 ,并绘制了 1 4株 NDV F基因的系统发育进化树。结果表明 ,F4 8E9和 DB3株在核苷酸序列上相对独立于 Toyoda等所分的 A、B、C组 ,单独成为一组 ;DB5株与B1 Hitchner株同属 B组 ,说明它们具有较高的同源性。同时也证明我国有不同基因型的毒株在流行。从进化的角度来看 ,NDV各毒株间确实存在遗传变异 ,但

关键词： NDV F基因克隆序列分析系统发育进化树

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禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)HA基因序列分析

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中国预防兽医学报 2000年第1期22卷 25-30页

作者：贾永清陈化兰邓国华唐秀英田国斌于康震刘保全东北农业大学动物医学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

采用RT_PCR技术,以A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)RNA为模板,扩增了1.73kb 的HA 全基因cDNA。将HAcDNA克隆后进行了序列测定,测序结果表明所扩增的1728 个核苷酸片段包含了完整的HA基因的开放阅读框架和上下游引物序列、蛋白质合成的... 详细信息

采用RT_PCR技术,以A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)RNA为模板,扩增了1.73kb 的HA 全基因cDNA。将HAcDNA克隆后进行了序列测定,测序结果表明所扩增的1728 个核苷酸片段包含了完整的HA基因的开放阅读框架和上下游引物序列、蛋白质合成的起始密码子和终止密码子。核苷酸序列比较分析结果表明:A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1) 与A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)有11 个核苷酸差异,同源率99.4% ;与A/HongKong/156/97(H5N1) 有25 个核苷酸差异,同源率98.6 % ;与A/Chicken/HongKong/258/97 (H5N1) 有30 个核苷酸差异,同源率98.3% ;它们的氨基酸序列同源率依次分别为99 .2 % 、98.6% 和98.1% 。受体结合位点的氨基酸序列完全一致;HA裂解位点氨基酸序列也完全一致,各有5 个碱性氨基酸插入。这说明上述4 个流感病毒分离株可能来自同一个祖先,具有相同的毒力和相似的生物学特性。

关键词：禽流感病毒 HA 基因序列分析

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基因工程疫苗的研究进展

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 192-194页

作者：李媛金红于康震程浩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 吉林市畜牧兽医工作总站吉林132000

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牛流行热病毒JB76H株G蛋白基因核苷酸序列分析

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中国预防兽医学报 2000年第1期22卷 43-47页

作者：金红李媛于康震严隽端刘宝全中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院

通过反转录_聚合酶链反应(RT_PCR),从中国北京分离株牛流行热病毒JB76H 基因组RNA中扩增出主要保护性抗原糖蛋白G的cDNA。采用Sanger’s 双脱氧末端终止法测定cDNA 片段的核苷酸序列,并推导出氨基酸序列。G基因全长为1872 个碱基,单一... 详细信息

通过反转录_聚合酶链反应(RT_PCR),从中国北京分离株牛流行热病毒JB76H 基因组RNA中扩增出主要保护性抗原糖蛋白G的cDNA。采用Sanger’s 双脱氧末端终止法测定cDNA 片段的核苷酸序列,并推导出氨基酸序列。G基因全长为1872 个碱基,单一的开放阅读框架编码623 个氨基酸的多肽。将测得的序列与澳大利亚六个分离株进行比较,发现我国分离株与澳大利亚分离株间同源性为91% ,低于澳大利亚各分离株之间的同源性(98% ～99% ) 。同时氨基酸序列比较结果也显示,我国分离株与澳大利亚分离株间同源性(93.9% )低于澳大利亚各分离株之间的同源性(96% ～98 %) 。

关键词：牛流行热病毒核苷酸序列 JB76H株 G蛋白

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间接免疫荧光抗体法对鸡传染性支气管炎病毒进行抗原定位

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 82-85页

作者：刘思国尹训南李广兴康丽娟江国托孔宪刚刘忠贵卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院

应用间接免疫荧光抗体（ＩＦＡ）法对ＩＢＶ感染后ＳＰＦ鸡不同脏器进行了跟踪检测。结果发现，在ＩＢＶ感染后的第７天，在气管、肾脏、脾脏、肺脏和肝脏等组织细胞中均不同程度地出现特异性的荧光。表明在感染的初期，ＩＢＶ具有广泛... 详细信息

应用间接免疫荧光抗体（ＩＦＡ）法对ＩＢＶ感染后ＳＰＦ鸡不同脏器进行了跟踪检测。结果发现，在ＩＢＶ感染后的第７天，在气管、肾脏、脾脏、肺脏和肝脏等组织细胞中均不同程度地出现特异性的荧光。表明在感染的初期，ＩＢＶ具有广泛的组织嗜性；在感染的第１０天，只有肾脏、气管或肺脏中呈现荧光，而以肾脏中的荧光最强，特异性荧光持续时间最长的是肾脏，可达１４天，病毒存在于肾小管间质内浸润的淋巴细胞和巨噬细胞胞浆中。实验结果证实，ＩＦＡ方法具有直观、特异等特点，在抗原定位上具有独特的优点。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒间接免疫荧光抗体法抗原定位

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鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)王岗株糖蛋白gB基因序列比较分析

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中国兽医学报 2000年第6期20卷 544-547页

作者：张绍杰孟松树仇华吉王柳倪键强何召庆王玫童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学内蒙古呼和浩特010018

根据已经发表的鸡传染性喉气管炎病毒 ( ILTV) SA2 株的 g B基因序列 ,设计了 1对引物 ,通过 PCR扩增了 ILTV王岗株的 g B基因 ,并克隆到 p UC1 1 9质粒的 Eco R 位点中 ,经酶切鉴定证实后 ,进行了序列测定。结果表明 ,g B基因长 2 6 1 ... 详细信息

根据已经发表的鸡传染性喉气管炎病毒 ( ILTV) SA2 株的 g B基因序列 ,设计了 1对引物 ,通过 PCR扩增了 ILTV王岗株的 g B基因 ,并克隆到 p UC1 1 9质粒的 Eco R 位点中 ,经酶切鉴定证实后 ,进行了序列测定。结果表明 ,g B基因长 2 6 1 9bp,包含完整的阅读框架。序列比较分析表明 ,ILTV王岗株的 g B基因核苷酸序列与英国的 Throne882和美国的 6 32 2个强毒株的 g B基因序列完全一致 ,而与澳大利亚 SA2 疫苗株g B基因核苷酸同一性为 99.8% ,氨基酸的同一性为 98.4 %。与澳大利亚 SA2 疫苗株 g B基因核苷酸和氨基酸序列比较发现 ,ILTV 3个强毒株 (王岗株 ,Throne 882株和 6 32株 ) g B基因的核苷酸序列在第 89位上均缺失 1个碱基 G,而在第 1 0 2位核苷酸处又插入了 1个碱基 A,从而引起了在氨基酸序列中第 2 9～ 32位 5个氨基酸的移码突变。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因序列分析

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反义技术研究简述

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中国预防兽医学报 2000年第2期22卷 159-160页

作者：崔尚金宋晓华于康震刘尚高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业大学动物医学院北京100094

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