检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2021年第12期43卷 1293-1298,1317页

作者：潘舒心刘艳晶麻琦陈晓涵邓国华施建忠田国彬曾显营陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为评估禽流感(H5+H7)重组杆状病毒载体三价灭活疫苗(rBH5-11株+rBH5-12株+rBH7-2株)对家禽的免疫保护效果,本研究将制备的3批疫苗接种21日龄SPF鸡,并进行疫苗的效力检测及H5和H7亚型禽流感病毒(AIV)流行株的攻毒试验;同时将该疫苗接种... 详细信息

为评估禽流感(H5+H7)重组杆状病毒载体三价灭活疫苗(rBH5-11株+rBH5-12株+rBH7-2株)对家禽的免疫保护效果,本研究将制备的3批疫苗接种21日龄SPF鸡,并进行疫苗的效力检测及H5和H7亚型禽流感病毒(AIV)流行株的攻毒试验;同时将该疫苗接种商品蛋鸡和鸭,进行免疫抗体持续期研究。疫苗免疫效力试验结果显示,3批疫苗常规剂量(0.3 mL/只)分别接种SPF鸡后3周,免疫鸡血清中针对H5亚型Re-11株和Re-12株、H7亚型H7-Re2株AIV的平均HI抗体效价为7.9 log2~8.5 log2,对照组鸡血清中针对3种抗原的HI抗体均为阴性;用H5N6、H5N1和H7N9亚型AIV分别攻毒后10 d观察期内,对照鸡均全部发病死亡,所有免疫组鸡均不发病、不排毒、不死亡,获得100%的免疫保护。流行株的效力试验结果显示,免疫后3周,接种常规剂量(0.3mL/只)疫苗鸡血清中针对3种抗原的平均HI抗体效价均在7.9 log2以上,使用2株H5N6亚型AIV、2株H5N1亚型AIV及1株H7N9亚型AIV和1株H7N2亚型AIV流行株攻毒后,各免疫组鸡均获得100%的免疫保护。抗体持续期试验结果显示,80日龄商品蛋鸡在接种2次疫苗(0.5 mL/只)3周至16周,血清中针对3种抗原的平均HI抗体效价均在6.8 log2以上;2周龄鸭接种2次疫苗(0.5 mL/只),在首次免疫后3周至14周,血清中针对3种抗原的平均HI抗体效价均在6 log2以上。上述结果首次表明,禽流感杆状病毒载体三价灭活疫苗具有良好的免疫效力,能够预防H5亚型和H7亚型禽流感(AI),商品蛋鸡和鸭按照免疫程序接种2次疫苗后能够产生持久的HI抗体。本研究为禽流感疫苗的研制提供了新思路和科学依据。

关键词：禽流感杆状病毒载体灭活疫苗 H5+H7 免疫效力

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猪圆环病毒2型病毒样颗粒的制备及其免疫原性研究

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中国兽医科学 2021年第8期51卷 1007-1014页

作者：边海桥黄立平危艳武夏德利朱红振吴洪丽于冲刘建行冯力刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

利用真核细胞表达系统制备了猪圆环病毒2型(PCV2)重组Cap蛋白,旨在探索病毒样颗粒(VLPs)的形成及其免疫原性。以pCAGGS为表达载体构建了重组质粒pCAGGS-Cap-Flag,瞬时转染293T细胞,利用Flag标签对表达的Cap蛋白进行纯化。通过电镜观察重... 详细信息

利用真核细胞表达系统制备了猪圆环病毒2型(PCV2)重组Cap蛋白,旨在探索病毒样颗粒(VLPs)的形成及其免疫原性。以pCAGGS为表达载体构建了重组质粒pCAGGS-Cap-Flag,瞬时转染293T细胞,利用Flag标签对表达的Cap蛋白进行纯化。通过电镜观察重组Cap蛋白形成的VLPs形态表明,纯化的重组Cap蛋白以VLPs形式存在,其直径约17 nm,与自然PCV2病毒粒子一致。SDS-PAGE和Western-blot鉴定表明,重组Cap蛋白为28.7 ku,分子质量符合预期,它与PCV2特异性单抗具有良好的免疫活性反应。捕获ELISA检测显示,重组Cap蛋白所组装的VLPs与纯化的自然PCV2具有相似的抗原活性。用制备的VLPs与经典的PCV2灭活疫苗分别免疫小鼠,这两种疫苗均能诱导良好的PCV2抗体应答反应,VLPs免疫组小鼠的抗体效价最高可达1∶12800,是PCV2灭活疫苗免疫组抗体效价的2倍。采用PCR检测免疫攻毒后小鼠肺组织中PCV2核酸,结果显示,VLPs免疫组和PCV2灭活疫苗免疫组均未检测到PCV2核酸,判定100%保护。本研究通过真核细胞表达系统制备的PCV2 VLPs具有与自然病毒粒子相似的形态结构,免疫小鼠可产生良好的免疫反应,可用于新型PCV2疫苗的研制。

关键词：猪圆环病毒2型病毒样颗粒免疫原性

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CAML蛋白对流感病毒复制调控机制的初步研究

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中国预防兽医学报 2021年第2期43卷 115-120页

作者：孔凡迪王广文严娅温霞王倩赵玉辉梁立滨李俊平李呈军陈化兰姜丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为探究宿主因子钙离子信号调节亲环素配体(CAML)调控流感病毒复制的机制,本研究通过siRNA干扰技术下调CAML的表达后,利用病毒蚀斑试验检测CAML对流感病毒复制的影响,利用激光共聚焦显微镜观察CAML对流感病毒NP蛋白入核的影响,通过流式... 详细信息

为探究宿主因子钙离子信号调节亲环素配体(CAML)调控流感病毒复制的机制,本研究通过siRNA干扰技术下调CAML的表达后,利用病毒蚀斑试验检测CAML对流感病毒复制的影响,利用激光共聚焦显微镜观察CAML对流感病毒NP蛋白入核的影响,通过流式细胞仪检测CAML对流感病毒诱导的细胞凋亡的影响。瞬时过表达CAML后,利用双荧光素酶报告基因试验检测CAML对流感病毒聚合酶活性的影响。通过qRT-PCR检测流感病毒感染后对CAML mRNA转录水平的影响。结果显示:下调表达CAML可显著抑制流感病毒的复制水平,但对流感病毒NP蛋白的入核无影响;瞬时过表达CAML对流感病毒聚合酶活性无影响;下调表达CAML能够促进流感病毒诱导的细胞凋亡过程,并且流感病毒感染能够导致CAML mRNA转录水平的逐渐降低。以上结果表明:CAML可能通过抑制细胞凋亡的方式促进流感病毒复制,而不是作用于流感病毒的侵入阶段以及转录复制阶段,并且流感病毒感染对CAML的表达具有下调作用。本研究初步探究了宿主因子CAML参与流感病毒复制的分子机制,为其的深入研究奠定了基础。

关键词： CAML 流感病毒复制细胞凋亡

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猫细小病毒嵌合抗体基因在CHO-K1细胞中的稳定表达及其特性分析

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中国预防兽医学报 2021年第12期43卷 1318-1323页

作者：王文静薛雨佳陈慧宇姚楠刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为降低鼠源单克隆抗体(MAb)在猫体内引起的免疫原性,本研究针对猫细小病毒(FPV)制备具有猫源抗体恒定区基因的鼠-猫嵌合抗体。本研究首先克隆具有FPV中和活性的MAb(4F6)的重、轻链可变区基因及猫天然抗体(NAb)重、轻链恒定区基因,通过融... 详细信息

为降低鼠源单克隆抗体(MAb)在猫体内引起的免疫原性,本研究针对猫细小病毒(FPV)制备具有猫源抗体恒定区基因的鼠-猫嵌合抗体。本研究首先克隆具有FPV中和活性的MAb(4F6)的重、轻链可变区基因及猫天然抗体(NAb)重、轻链恒定区基因,通过融合PCR获得鼠-猫重组重、轻链基因片段(C_(H)/C_(L)),构建嵌合抗体表达载体(pMC-C_(H)、pMC-C_(L)),并经菌落PCR鉴定正确后转染CHO-K1细胞,并使用100μg/mL博来霉素(Zeocin)筛选,经有限稀释法将其克隆纯化后经双抗体夹心ELISA与western blot筛选出同时表达鼠-猫重组重、轻链基因的细胞株并命名为CHO-MC,将CHO-MC上清中表达的嵌合抗体纯化后调整浓度为1 mg/mL,间接ELISA检测嵌合抗体的效价,并分析其对病毒感染细胞的中和活性。结果表明,经SDS-PAGE检测鼠-猫嵌合抗体重链和轻链大小分别为55 ku和25 ku,western blot显示鼠源恒定区替换为猫源NAb的恒定区,双抗夹心ELISA显示CHO-MC细胞系在传代至15代仍能够稳定表达嵌合抗体,间接免疫荧光试验显示该嵌合抗体能够与抗猫IgG和FPV特异性结合,ELISA及中和效价分别为1:1280(0.78μg/mL)和1:16(62.5μg/mL)。本研究首次通过哺乳动物细胞表达系统表达了FPV的嵌合抗体,对治疗FPV抗体类药物的研究具有重要指导意义。

关键词：基因工程嵌合抗体猫细小病毒哺乳动物表达系统

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伪狂犬病病毒感染对小鼠脑组织免疫蛋白酶体表达影响的研究

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中国预防兽医学报 2021年第1期43卷 65-70页

作者：胡薇刘强张永莉马泽林肖菲张险峰何希君中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

在炎症反应或在氧化应激的情况下,机体内的蛋白酶体会转变成免疫蛋白酶体,从而在炎症类疾病中发挥作用。为了研究免疫蛋白酶体在伪狂犬病毒(PRV)感染中的作用,本研究随机将25只C57BL/6小鼠分成5组,5只/组,1组对照组,4组实验组:分别为感... 详细信息

在炎症反应或在氧化应激的情况下,机体内的蛋白酶体会转变成免疫蛋白酶体,从而在炎症类疾病中发挥作用。为了研究免疫蛋白酶体在伪狂犬病毒(PRV)感染中的作用,本研究随机将25只C57BL/6小鼠分成5组,5只/组,1组对照组,4组实验组:分别为感染5 d(5 dpi)组、感染7 d(7 dpi)组、感染9 d(9 dpi)组和感染11 d(11 dpi)组。将PRV Bartha株以6.8×10^(4) TCID50的剂量经后肢皮下注射感染小鼠,每天观察其临床症状。在感染后的11 d内,小鼠出现了被毛凌乱、体重减轻和轻微的神经症状。于感染后的第5 d、7 d、9 d和11 d颈椎脱臼迫杀各组小鼠后采集脑组织,经荧光定量PCR方法检测小鼠脑组织的病毒拷贝数。结果显示,在小鼠脑组织检测出了PRV,且9 dpi组小鼠病毒的拷贝数高达4.93×10^(6)拷贝/μL;小鼠脑组织病理切片可见,小鼠产生了非化脓性脑炎,脑组织出现血管套现象并伴有炎性细胞的浸润;经荧光定量PCR方法检测各组小鼠脑组织免疫蛋白酶体亚基和促炎性细胞因子的转录水平。结果显示,各感染组小鼠脑组织免疫蛋白酶体亚基LMP2、LMP7以及LMP10的转录水平均明显上调,其中LMP2亚基的转录水平最高,与对照组相比9 dpi组小鼠脑组织LMP2亚基的转录水平上调了332倍(p<0.001);各感染组小鼠促炎性细胞因子IFN-γ、IL-6、IL-1β和TNF-α的转录水平也均上调,其中9 dpi组小鼠的IFN-γ转录水平与对照组相比上调了1420倍(p<0.01)。Western blot结果显示,各感染组小鼠脑组织免疫蛋白酶体亚基LMP2、LMP7和LMP10均被诱导表达。上述结果表明PRV Bartha株感染小鼠后,会诱发其脑组织炎症和免疫蛋白酶体的表达,且随着感染时间的延长(5 dpi~9 dpi),小鼠脑组织炎性因子与免疫蛋白酶体亚基的转录水平和蛋白表达水平均呈增加趋势。本实验为研究免疫蛋白酶体在PRV致病机理中的作用奠定了基础,并为进一步研究疱疹病毒诱发的中枢神经系统炎症反应提供了参考依据。

关键词：免疫蛋白酶体伪狂犬病毒脑炎促炎性细胞因子

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同时检测多杀性巴氏杆菌及其荚膜A型的双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

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中国预防兽医学报 2021年第5期43卷 501-506页

作者：刘本金郑亚婷许腾林姜骞刘家森康洪涛田进郭东春曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为建立可以同时检测多杀性巴氏杆菌(Pm)及其荚膜A型的快速敏感检测方法,本研究在建立的Pm kmt1基因的荧光定量PCR基础上,设计了该菌capA基因特异性引物和Taq Man探针,经优化反应条件建立了双重Taq Man荧光定量PCR检测方法。本实验从荚膜... 详细信息

为建立可以同时检测多杀性巴氏杆菌(Pm)及其荚膜A型的快速敏感检测方法,本研究在建立的Pm kmt1基因的荧光定量PCR基础上,设计了该菌capA基因特异性引物和Taq Man探针,经优化反应条件建立了双重Taq Man荧光定量PCR检测方法。本实验从荚膜A型Pm C48-1菌株中扩增了capA基因,构建了重组质粒pMDcapA;以pMD-capA重组质粒为标准品,建立的标准曲线在9.83×10^(3)拷贝/μL~9.83×10^(9)拷贝/μL内与Ct值具有良好的线性关系,相关系数(R^(2))为0.9873,扩增效率(E)为1.032。建立的双重荧光定量PCR方法可以同时检测Pm及其荚膜A型,而对B型、D型Pm、鸭疫里默氏杆菌、支气管败血波氏杆菌等细菌检测结果均为阴性,具有较强的特异性;对重组质粒标准品的检测灵敏度为10^(1)拷贝/μL,高于常规PCR检测方法(10^(3)拷贝/μL)100倍具有较高的敏感性;组内和组间重复性试验的变异系数均小于2%,具有较好的重复性。本实验建立的双重荧光定量PCR方法可以同时快速敏感地检测Pm及其荚膜A型,对于其临床和实验室的快速诊断具有重要意义。

关键词：多杀性巴氏杆菌 TaqMan探针荧光定量PCR

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中国预防兽医学报 2021年第6期43卷 651-657页

作者：刘桐潘巧谨瑾曾金红李媛徐青元辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为筛选并鉴定免疫反应原性良好的牛支原体(***)蛋白,本研究提取*** TJ株脂质相关膜蛋白(LAMPs),通过AKTA分子筛筛选,将*** LAMPs分为5组,经dot blot试验鉴定各组LAMPs的免疫反应原性,并经蛋白质谱分析其蛋白组分。结果显示,5组LAMPs中有... 详细信息

为筛选并鉴定免疫反应原性良好的牛支原体(***)蛋白,本研究提取*** TJ株脂质相关膜蛋白(LAMPs),通过AKTA分子筛筛选,将*** LAMPs分为5组,经dot blot试验鉴定各组LAMPs的免疫反应原性,并经蛋白质谱分析其蛋白组分。结果显示,5组LAMPs中有1组膜蛋白反应原性较好,且结合蛋白匹配度得分的排名顺序和基因注释,选定P48、DnaK和L-LDH为候选蛋白。将该3种蛋白经原核表达、纯化及western blot检测其反应原性;并进一步分别以该3种重组蛋白为包被抗原,采用ELISA方法(rP48-ELISA、rDnaK-ELISA、rL-LDH-ELISA)检测并利用Graphpad prism 8软件分析并计算该3种方法的特异性、敏感性及其与牛鼻支原体、丝状支原体丝状亚种SC型、牛病毒性腹泻病毒、口蹄疫病毒、牛传染性鼻气管炎病毒阳性血清的交叉反应性。Western blot结果显示,3种重组蛋白均能与***阳性血清反应,反应原性较好;ELISA结果显示,rP48-ELISA、rDnaK-ELISA、rL-LDH-ELISA方法的特异性分别为96%、94%和98%,敏感性分别为98%、92%和94%。交叉反应性试验结果显示,*** rDnaK和rL-LDH均能与牛鼻支原体阳性血清发生交叉反应,而*** rP48与牛其他临床常见呼吸道病原阳性血清均无交叉反应,表明其具有作为检测*** ELISA方法候选包被抗原的潜力。本研究为进一步筛选***亚单位疫苗抗原及快速诊断方法的候选抗原奠定实验基础。

关键词：牛支原体膜蛋白分子筛免疫反应原性

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H7N9禽流感荧光报告病毒的构建及初步应用

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中国预防兽医学报 2021年第3期43卷 231-238页

作者：于晓菲万晓朋李继清姜永萍中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为实现对H7N9禽流感病毒(AIV)感染过程的动态可视化示踪,本研究构建了重组报告质粒pHH21-NS-Venus、pHH21-NS-Apple 和包含 H7N9 AIV CK/SD008 株的 8 个基因节段的重组质粒 pHH21-PB2-627E、pHH21-PB2-627K(来自 CK/SD008-627K 株)、pHH21-PB1、pHH21-PA、pHH21-HA、pHH21-NA、pHH21-NP、pHH21-M。上述质粒均经测序鉴定。利用12质粒反向遗传操作系统,构建2株荧光报告病毒SD008-627EVenus、SD008-627E-Apple,及E627K 对哺乳动物嗜性的 2株荧光报告病毒 SD008-627K-Venus、SD008-627KApple。将这4株报告病毒感染A549细胞后在荧光显微镜下均可见相应荧光且病毒主要定位在细胞核中;将其中两株报告病毒SD008-627E-Venus/Apple经鸡胚传2代,2株SD008-627K-Venus/Apple在小鼠体内传3代后均感染A549细胞,经倒置荧光显微镜观察均可见相应荧光。上述结果表明4株报告病毒正确构建,且其可以在鸡胚或者小鼠体内传代(即SD008-627K-Venus/Apple为小鼠适应性报告病毒)。将4株报告病毒与亲本病毒分别感染C57BL/6小鼠,进行小鼠致病性试验。结果显示,报告病毒SD008-627E-Venus/Apple与其亲本病毒SD008-627E的MLD_(50)均>5 log_(10)EID_(50)/mL,且均对小鼠不致死;报告病毒SD008-627K-Venus/Apple与其亲本病毒SD008-627K的MLD_(50) 分别为1.6 log_(10)EID_(50)/mL、2.3 log_(10)EID_(50)/mL 和 1.8 log_(10)EID_(50)/mL;报告病毒 SD008-627E-Venus/Apple 与其亲本病毒SD008-627E感染小鼠的鼻甲、肺、脑、脾和肾的病毒滴度均<10^(2) EID_(50)/mL;SD008-627K-Venus/Apple及其亲本病毒SD008-627K的鼻甲和肺的病毒滴度均>10^(6) EID_(50)/mL,脑、脾和肾的病毒滴度均<102EID_(50)/mL。上述结果表明,构建的4株报告病毒均未改变亲本病毒对小鼠的致病性。利用噬斑试验,将报告病毒SD008-627K-Venus感染MDCK细胞,结果可见其能够引起细胞病变和表达荧光蛋白且荧光斑数量与噬斑数量相近。分别将报告病毒SD008-627K-Venus感染小鼠,3 d后取其肺脏研磨后制备单细胞悬液,经流式细胞术检测肺脏细胞表面的CD45分子及CD11b分子。结果显示,SD008-627K-Venus主要感染实质细胞(CD45^(-)),很少感染免疫细胞(CD45^(+));且小鼠肺部免疫细胞(CD45^(+))增多,其中趋化的免疫细胞中主要为单核巨噬细胞和中性粒细胞(CD11b^(+))。表明,报告病毒SD008-627K-Venus能够用于追踪小鼠体内病毒感染的细胞,并能够对感染细胞粗略分类。本研究构建了 4株H7N9报告病毒,可用于H7N9 AIV感染及致病机理相关的研究,为该类病毒的相关研究提供了有力工具。

关键词： H7N9 报告病毒荧光蛋白

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宿主分子Tyro3对猪瘟病毒复制的影响及其与E2蛋白相互作用的研究

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中国预防兽医学报 2021年第11期43卷 1184-1191页

作者：屈亮郑光来于少雄仇华吉李素中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

本研究室前期研究发现受体酪氨酸激酶家族(TAM)成员Mertk为猪瘟病毒(CSFV)的侵入因子。为研究TAM受体家族另外两个成员Tyro3及Axl对CSFV复制的影响,本研究设计并合成了针对Tyro3、Mertk、Axl的siRNA(siTyro3、siMertk、siAxl)和一条无关... 详细信息

本研究室前期研究发现受体酪氨酸激酶家族(TAM)成员Mertk为猪瘟病毒(CSFV)的侵入因子。为研究TAM受体家族另外两个成员Tyro3及Axl对CSFV复制的影响,本研究设计并合成了针对Tyro3、Mertk、Axl的siRNA(siTyro3、siMertk、siAxl)和一条无关siRNA(siNC),将这3种siRNA分别转染PK-15细胞,24 h后以MOI 0.01感染CSFV-SM,48 h后经荧光定量PCR检测各分子的表达以及CSFV基因拷贝数。荧光定量PCR结果显示,3种siRNA分子均能够下调PK-15细胞中Tyro3、Axl和Mertk的转录水平,且下调Mertk、Tyro3后CSFV基因组拷贝数均极显著降低,下调Axl后CSFV基因组拷贝数却无显著变化。因此选择siTyro3转染PK-15细胞后以MOI 0.01CSFV-SM感染PK-15细胞,通过荧光定量PCR及间接免疫荧光试验(IFA)检测siTyro3的转录水平以及CSFV的复制情况,结果显示,Tyro3基因的转录水平、CSFV基因组拷贝数及病毒滴度均显著降低,表明下调Tyro3的表达能够抑制CSFV的复制。按常规方法包装制备Tyro3慢病毒Lenti-Tyro3-HA,将其转导PK-15细胞,传10代后每代均经荧光显微镜观察,并将第10代转导细胞分别经荧光定量PCR和western blot鉴定。结果可见转导的细胞每代均发出绿色荧光,荧光定量PCR和western blot结果显示,第10代转导细胞中Tyro3基因的转录水平极显著上升,且可检测到Tyro3的特异性条带。表明获得了稳定表达Tyro3蛋白的PK-15细胞系PK-Tyro3-HA。将CSFV-SM分别以MOI 1和0.1感染PK-Tyro3-HA细胞系后经荧光定量PCR检测,结果显示CSFV基因组拷贝数分别升高了1.5倍(MOI 1)和2.3倍(MOI 0.1),表明过表达Tyro3后能够促进细胞中CSFV的复制。将不同剂量的兔源Tyro3多克隆抗体(pAb)与PK-15细胞共孵育,封闭PK-15细胞表面Tyro3表位后感染rCSFV-Rluc,经海肾荧光素酶检测,结果显示,20μg/mL和40μg/mL的Tyro3 pAb孵育细胞后再感染rCSFV-Rluc组的海肾荧光素酶活性显著降低,表明Tyro3 pAb能够抑制CSFV的复制。将pCAGGS-Tyro3-HA分别与pCAGGS-E2-Flag、pCAGGS-Erns-Flag共转染HEK293T细胞48 h后,进行免疫共沉淀试验,结果显示Tyro3与CSFV E2囊膜糖蛋白存在相互作用。综上,本研究首次证实Tyro3通过与CSFV E2囊膜糖蛋白的相互作用促进CSFV在PK-15细胞中的复制,为进一步揭示CSFV与宿主细胞的相互作用提供参考依据。

关键词： Tyro3 TAM受体猪瘟病毒

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基因Ⅶ型新城疫病毒融合前构象F蛋白的表达及结构分析

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中国兽医科学 2021年第4期51卷 475-482页

作者：陈林娜孙军峰李乐师乾凯邸涛刘添仪赵冉张春玮韩宗玺刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

目前,新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)的融合前构象是未知的,为获得具有融合前构象的NDV F蛋白,本研究对基因Ⅶ型NDV CK/CH/LHLJ/1/06株的F基因胞外区编码序列进行了修饰和密码子优化,将其克隆至真核表达载体中构建获得了重组质粒pCAG-opti... 详细信息

目前,新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)的融合前构象是未知的,为获得具有融合前构象的NDV F蛋白,本研究对基因Ⅶ型NDV CK/CH/LHLJ/1/06株的F基因胞外区编码序列进行了修饰和密码子优化,将其克隆至真核表达载体中构建获得了重组质粒pCAG-optiF。通过SWISS-MODEL网站对蛋白结构进行预测,结果显示,质粒pCAG-optiF编码的蛋白能够形成与人呼吸道合胞体病毒F蛋白融合前构象相似的结构。将质粒pCAG-optiF转染至鸡源细胞LMH中,通过间接免疫荧光试验证实构建的蛋白在鸡源细胞中成功表达。将质粒p CAG-optiF转染悬浮培养的Expi293F细胞,表达并纯化获得重组蛋白roptiF。SDS-PAGE电泳结果显示获得了与预期大小相符的蛋白。Western-blotting结果显示,表达的roptiF蛋白能够与NDV CK/CH/LHLJ/1/06株的抗血清反应。进一步通过负染色电子显微镜观察roptiF蛋白结构,结果显示,roptiF蛋白具有典型的F蛋白融合前构象的结构特征。本研究成功获得了具有融合前构象的基因Ⅶ型NDV F蛋白,并且该蛋白能够与抗NDV的血清反应,本研究结果为研制新型NDV疫苗奠定了基础。

关键词：新城疫病毒基因Ⅶ型 F蛋白融合前构象

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