检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2021年第8期43卷 801-805,811页

作者：李明慧田井满白晓利刘丽娜李雁冰陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

2019年11月本实验室从家禽监测样品中分离鉴定到一株低致病性H5N6亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/chicken/Hebei/S1/2019(H5N6)(简称CK/HeB/S1/19)。为进一步了解其生物学特点,本实验对其全基因组测序并进行遗传演化分析,结果显示,该病毒... 详细信息

2019年11月本实验室从家禽监测样品中分离鉴定到一株低致病性H5N6亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/chicken/Hebei/S1/2019(H5N6)(简称CK/HeB/S1/19)。为进一步了解其生物学特点,本实验对其全基因组测序并进行遗传演化分析,结果显示,该病毒属于2.3.4.4h分支,碱性裂解位点为PLRESR↓GLF,属于低致病性AIV(LPAIV)。对其各基因节段分别经BLAST比对后发现,其外部基因来源于H5N6亚型AIV,内部基因完全来源于H9N2亚型AIV,推测该分离株为一株重组病毒。将CK/HeB/S1/19病毒株接种SPF鸡及BALB/c小鼠研究其致病性,结果显示,该病毒虽然能够感染鸡,但不能在鸡体内有效复制,而该病毒未经适应就可在3只小鼠的鼻甲和肺中进行复制,对小鼠呈低致病性。本研究为H5亚型AIV的检测和其感染的综合防控提供了参考依据。

关键词：禽流感病毒低致病性 H5N6 进化分析致病性

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基于病毒载体的非洲猪瘟疫苗研究进展及展望

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中国预防兽医学报 2022年第8期44卷 903-909页

作者：张新王秋霞李文霞袁梦淇赵小天杨晓柯刘兴友李永锋仇华吉河南科技学院动物科技学院河南新乡453003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 新乡学院河南新乡453003 天津农学院动物科学与动物医学学院天津300384

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由ASF病毒(ASFV)感染引起的一种急性、高度传染性、致死性动物传染病[1],临床上以高热、皮肤发绀和脏器广泛性出血为主要特征[2]。世界动物卫生组织(WOAH)将ASF列为法定报告动物疫病,我国将其列为... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由ASF病毒(ASFV)感染引起的一种急性、高度传染性、致死性动物传染病[1],临床上以高热、皮肤发绀和脏器广泛性出血为主要特征[2]。世界动物卫生组织(WOAH)将ASF列为法定报告动物疫病,我国将其列为一类动物疫病[3]。ASFV可感染所有品种和年龄的家猪和野猪,持续感染的野猪和软蜱是家猪感染ASFV的重要传染源。

关键词：高度传染性世界动物卫生组织动物传染病一类动物疫病猪瘟疫苗非洲猪瘟法定报告软蜱

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DHV-Ⅰ和DEV双重荧光定量PCR方法的建立

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中国兽医科学 2021年第2期51卷 169-175页

作者：陈肖韩刘海燕苏世博赵丽丽陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为建立快速特异的能够鉴别诊断DHV-I和DEV的荧光定量PCR方法,根据NCBI中I型鸭肝炎病毒和鸭肠炎病毒的保守序列,采用Beacon Designer 7.5软件,设计了2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针。接着,对反应条件进行优化,验证其... 详细信息

为建立快速特异的能够鉴别诊断DHV-I和DEV的荧光定量PCR方法,根据NCBI中I型鸭肝炎病毒和鸭肠炎病毒的保守序列,采用Beacon Designer 7.5软件,设计了2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针。接着,对反应条件进行优化,验证其特异性及敏感性。结果,该方法特异性好,对鹅细小病毒、番鸭细小病毒、禽流感病毒、新城疫病毒、鸭坦布苏病毒、禽网状内皮增生病毒、禽呼肠弧病毒、减蛋综合征病毒、鸭甲肝病毒3型9种病毒检测,均无荧光信号。而且其灵敏度高,对DHV-I和DEV的最小检出量均为200拷贝。利用所建立的荧光定量PCR方法对江苏徐州采集的166份肛拭子进行检测,检出I型鸭肝炎病毒13份(阳性率为7.8%),鸭肠炎病毒75份(阳性率为45%)。上述结果表明,本研究建立了灵敏度高特异性强的DHV-I和DEV双重荧光定量PCR方法。

关键词： Ⅰ型鸭肝炎病毒鸭肠炎病毒,双重荧光定量

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非洲猪瘟疫苗研究进展及其难点和突破点

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中国预防兽医学报 2021年第2期43卷 219-225页

作者：马玉腾韩玉莹金鑫李永锋仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 延边大学农学院吉林延吉133000

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由ASF病毒(ASFV)感染家猪和野猪引起的一种烈性传染病。该病发病快、病程短,病死率可高达100%[1]。ASF对养猪业危害极大,是世界动物卫生组织(World Organization for Animal Health,OIE)规定须申报... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由ASF病毒(ASFV)感染家猪和野猪引起的一种烈性传染病。该病发病快、病程短,病死率可高达100%[1]。ASF对养猪业危害极大,是世界动物卫生组织(World Organization for Animal Health,OIE)规定须申报的动物疫病。其传播方式复杂多样,可在家猪-野猪、野猪-软蜱-家猪间循环传播,并可通过直接、间接接触或短距离气溶胶在猪群中传播[2-6]。

关键词：世界动物卫生组织烈性传染病猪瘟疫苗非洲猪瘟间接接触动物疫病养猪业软蜱

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消毒技术在非洲猪瘟防控中的应用现状与问题

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中国农业科技导报 2021年第4期23卷 93-102页

作者：王巍罗玉子张丽马吉飞仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069 天津农学院动物科学与动物医学学院天津300384

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染家猪和野猪引起的一种急性出血性烈性传染病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定必须上报的动物疫病。由于目前还没有针对非洲猪瘟的有效疫苗,我国主要采取检疫、扑杀以及严格的生物安全措施... 详细信息

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染家猪和野猪引起的一种急性出血性烈性传染病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定必须上报的动物疫病。由于目前还没有针对非洲猪瘟的有效疫苗,我国主要采取检疫、扑杀以及严格的生物安全措施进行防控。消毒是生物安全防控ASF的重要手段。目前针对ASFV的灭活方式多种多样,但其灭活效果还有待进一步检验。当前的ASF分子病原学诊断技术无法确定样品的感染性,因此不能用于准确评价消毒剂对病原的杀灭效果。对ASFV的消毒技术及其作用机理、杀灭效果、优缺点、注意事项等进行了总结,并对当前消毒技术存在的问题以及检测技术的局限性进行了分析,在此基础上对ASFV的消毒剂评价技术进行了探讨,旨在为我国ASF检测技术的创新与完善以及现地防控提供参考。

关键词：非洲猪瘟病毒灭活技术诊断技术

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抗低温消毒剂“抗冻消-30”对非洲猪瘟病毒的杀灭效果

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中国预防兽医学报 2021年第9期43卷 972-977,1007页

作者：祁梦南潘力孙元殷生章仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 海南育奇药业有限公司海南定安571200

为评估抗低温消毒剂"抗冻消-30"对非洲猪瘟病毒(ASFV)的杀灭效果,本研究通过观察不同稀释度的"抗冻消-30"对细胞形态的影响,并计算相应细胞的活性确定该消毒剂对细胞的安全浓度。结果显示,"抗冻消-30"对... 详细信息

为评估抗低温消毒剂"抗冻消-30"对非洲猪瘟病毒(ASFV)的杀灭效果,本研究通过观察不同稀释度的"抗冻消-30"对细胞形态的影响,并计算相应细胞的活性确定该消毒剂对细胞的安全浓度。结果显示,"抗冻消-30"对细胞的安全浓度为≤1 g/L,细胞存活率高于95%,且形态正常。将不同浓度的ASFV报告病毒(rASFV-HLJ/2018-EGFP株)与不同浓度"抗冻消-30"在不同温度下作用30 min后,分别感染HEK293T细胞,通过倒置荧光显微镜观察,评估在不同温度下"抗冻消-30"对ASFV报告病毒的杀灭效果;将不同浓度的ASFV亲本病毒(HLJ/2018株)与不同浓度"抗冻消-30"在-30℃作用30 min后,分别感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs),一定时间后加入猪红细胞,利用倒置显微镜观察红细胞吸附现象,评估-30℃条件下,"抗冻消-30"对ASFV亲本病毒的杀灭效果。结果显示,常温和4℃时,400 g/L、160 g/L、80 g/L、40 g/L、8 g/L的"抗冻消-30"可完全杀灭106TCID50及以下浓度、105TCID50及以下浓度、1104TCID50及以下浓度、104TCID50及以下浓度、103TCID50及以下浓度的ASFV报告病毒;-20℃时,上述浓度的"抗冻消-30"可完全杀灭105TCID50及以下浓度、1104TCID50及以下浓度、103TCID50及以下浓度、103TCID50及以下浓度、102TCID50 ASFV报告病毒;-30℃和-40℃时,上述浓度的"抗冻消-30"可完全杀灭1104TCID50及以下浓度、103TCID50及以下浓度、103TCID50及以下浓度、102TCID50及以下浓度、102TCID50 ASFV报告病毒。-30℃时,400 g/L、160 g/L、80 g/L、40 g/L的"抗冻消-30"可完全杀灭1104TCID50及以下浓度、103TCID50及以下浓度、103TCID50及以下浓度、102TCID50及以下浓度的ASFV亲本病毒。本研究在细胞水平上系统评价了该消毒剂对ASFV报告病毒和亲本病毒的杀灭情况,表明"抗冻消-30"在常温和低温条件下对ASFV均具有良好的杀灭效果,可以作为防控ASF的有效消毒剂。

关键词：抗低温消毒剂抗冻消-30 非洲猪瘟病毒杀灭效果

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鸭源新城疫强毒株对番鸭细胞因子及Toll样受体mRNA表达的影响

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中国兽医科学 2021年第1期51卷 90-97页

作者：张莉莉陈玉秋侯雨彤韩宗玺马得莹东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为研究人工感染鸭源新城疫强毒株(Md/CH/LGD/1/2005)诱导番鸭细胞因子及Toll样受体基因的表达情况,选用80只15日龄SPF番鸭,随机分为攻毒组和对照组,每组各40只,攻毒组以滴鼻点眼的方式接种1×107.0EID50鸭源基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)... 详细信息

为研究人工感染鸭源新城疫强毒株(Md/CH/LGD/1/2005)诱导番鸭细胞因子及Toll样受体基因的表达情况,选用80只15日龄SPF番鸭,随机分为攻毒组和对照组,每组各40只,攻毒组以滴鼻点眼的方式接种1×107.0EID50鸭源基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)Md/CH/LGD/1/2005,对照组接种灭菌的磷酸盐缓冲液。分别在攻毒后36 h、72 h、7 d和25 d剖杀10只番鸭,采集每只番鸭的骨髓、脾、盲肠扁桃体、哈德氏腺和法氏囊样品,通过Real-time RT-PCR方法检测组织中NDV载量、细胞因子和Toll样受体基因的表达。结果显示,除哈德氏腺外,其余各组织中病毒含量在攻毒后72 h达到最高,对照组各组织中均未检测到病毒含量。与对照组相比,经NDV感染后,IL-1β在攻毒36 h的法氏囊和攻毒7 d的哈德氏腺中表达量显著上调(P<0.05);IL-2、IL-6、IL-18和IL-20在攻毒7 d的脾内表达显著上调(P<0.05)。TLR3、TLR15和TLR21均在法氏囊内高表达(P<0.05),且表达趋势相同,对NDV感染的应答可能具有协同效应。TLR5在骨髓、脾、盲肠扁桃体和法氏囊内显著上调(P<0.05);TLR7在攻毒7 d的骨髓和法氏囊内表达上调(P<0.05)。结果表明,感染NDV后番鸭可能通过TLR相关的信号转导通路诱导宿主免疫抗性基因的表达,调控机体的抗病毒免疫应答反应。

关键词：鸭源新城疫强毒鸭细胞因子 Toll样受体

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非洲猪瘟病毒A137R蛋白的表达动力学与亚细胞定位分析

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中国兽医科学 2021年第12期51卷 1525-1532页

作者：孙茂文周萍萍王涛李永锋潘力韩玉孙元杨玉莹仇华吉长江大学动物科学学院湖北荆州434023 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了探究非洲猪瘟病毒(ASFV)A137R蛋白的表达动力学与亚细胞定位,本研究构建了原核表达质粒pGEX-6p-1-A137R,表达与纯化了A137R蛋白,并制备了针对该蛋白的多克隆抗体。经间接免疫荧光试验(IFA)分析,抗体效价达1∶25600;Western-blotting... 详细信息

为了探究非洲猪瘟病毒(ASFV)A137R蛋白的表达动力学与亚细胞定位,本研究构建了原核表达质粒pGEX-6p-1-A137R,表达与纯化了A137R蛋白,并制备了针对该蛋白的多克隆抗体。经间接免疫荧光试验(IFA)分析,抗体效价达1∶25600;Western-blotting和IFA证实,该多克隆抗体具有良好的反应性和特异性。利用该抗体分析了ASFV感染原代猪肺泡巨噬细胞中A137R蛋白的表达动力学及其亚细胞定位,发现A137R蛋白为晚期蛋白,主要定位于细胞质,且与ASFV的结构蛋白p72共定位。本研究为进一步解析ASFV A137R蛋白的功能奠定了基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 A137R蛋白原核表达多克隆抗体

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基于单个B淋巴细胞扩增技术筛选马传染性贫血病毒的囊膜蛋白单克隆抗体

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中国预防兽医学报 2022年第3期44卷 307-313页

作者：张佳琦王亚玉郭兴林跃智廖化新王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马传染病和慢病毒病研究创新团队黑龙江哈尔滨150069 暨南大学生命科学技术学院细胞生物学系广东广州510632

马传染性贫血病毒(EIAV)囊膜蛋白(Env)是参与病毒感染过程中的关键蛋白,由表面蛋白(Gp90)及跨膜蛋白(Gp45)组成,Env蛋白在介导病毒粘附、细胞间融合、疾病传播等方面发挥重要作用。为了通过单个B淋巴细胞扩增技术获得Env特异性单克隆抗... 详细信息

马传染性贫血病毒(EIAV)囊膜蛋白(Env)是参与病毒感染过程中的关键蛋白,由表面蛋白(Gp90)及跨膜蛋白(Gp45)组成,Env蛋白在介导病毒粘附、细胞间融合、疾病传播等方面发挥重要作用。为了通过单个B淋巴细胞扩增技术获得Env特异性单克隆抗体(MAb),本研究利用密码子优化后的Gp90基因构建了重组质粒pcDNA3.1-s-gp90-His,按常规方法将该重组质粒免疫小鼠6次后分离脾细胞,利用荧光激活细胞分选(FACS)技术分离免疫小鼠脾细胞中可识别Gp90的单个B淋巴细胞,结果显示,本研究从2×10^(8)个小鼠脾细胞中获得890个识别Gp90的单个B淋巴细胞。通过特异性引物以单个B淋巴细胞的基因组cDNA为模板扩增抗体重链(Ig VH)和轻链(Ig VL)的可变区基因,利用重叠延伸PCR方法分别将重链(Ig VH)和轻链(Ig VL)可变区基因克隆至pcDNA3.1中,测序鉴定结果显示分别正确构建了27对匹配的pcDNA3.1-VH和pcDNA3.1-VL表达质粒,将这27对匹配的表达质粒分别按照pcDNA3.1-VH:pcDNA3.1-VL=1:1的比例共转染至HEK293F细胞,收获细胞上清,经Protein A纯化获得Gp90 MAb。通过ELISA和western blot两种方法对纯化的Gp90 MAb进行鉴定,结果显示获得了27株可匹配的抗体基因对,经表达后有4株MAb可与Gp90蛋白结合,且可以识别Gp90蛋白的天然构象。本研究首次采用单个B淋巴细胞扩增技术对Gp90 MAb进行了筛选,获得的Gp90 MAb为Env蛋白检测方法的研究提供了物质基础,同时为深入研究Env蛋白的功能奠定了基础。

关键词：马传染性贫血病毒囊膜蛋白单个B淋巴细胞扩增单克隆抗体

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高增殖猪流感重组病毒GX1659/PR8的制备与鉴定

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中国预防兽医学报 2021年第10期43卷 1103-1107页

作者：宋祖晨孟飞张丹丹王飞飞刘雅茹陈艳乔传玲陈化兰杨焕良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

为构建一株具有高复制能力的流感病毒疫苗株,本研究利用反向遗传技术以PR8的6个内部基因为骨架,以一株H3N2亚型低致病力猪流感病毒(SIV)GX1659株的HA和NA表面基因为供体,构建了pBD-GX1659-HA和pBD-GX1659-NA重组质粒,转染293T细胞并接种... 详细信息

为构建一株具有高复制能力的流感病毒疫苗株,本研究利用反向遗传技术以PR8的6个内部基因为骨架,以一株H3N2亚型低致病力猪流感病毒(SIV)GX1659株的HA和NA表面基因为供体,构建了pBD-GX1659-HA和pBD-GX1659-NA重组质粒,转染293T细胞并接种SPF胚,经血凝试验、测序筛选获得了一株重组病毒GX1659/PR8。该重组病毒在鸡胚传20代,血凝价均能达到8 log2以上。每5代病毒的全基因组经PCR和测序鉴定,结果显示,PCR产物均无任何缺失或突变,表明GX1659/PR8具有遗传稳定性。分别利用100 EID_(50)剂量的GX1659和GX1659/PR8感染鸡胚,在不同时间测定鸡胚尿囊液的血凝效价和EID_(50),绘制其生长曲线。结果显示,GX1659和GX1659/PR8分别在接种后60 h和48 h时血凝效价达到峰值,GX1659/PR8效价滴度明显高于亲本病毒GX1659。利用亲本病毒GX1659与重组病毒GX1659/PR8的抗原和阳性血清进行交叉HI试验,测定HI效价及交叉HI效价并对抗原性进行分析。结果显示,亲本病毒GX1659与重组病毒GX1659/PR8抗原性无明显差异。本研究拯救出一株具有稳定遗传性和高增殖性能的H3亚型重组病毒GX1659/PR8,为H3N2亚型流感病毒疫苗株的构建奠定了重要基础。

关键词： H3N2流感病毒 PR8 反向遗传技术生物学特性疫苗株

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