检索结果-内蒙古大学图书馆

鸡传染性支气管炎病毒的遗传与变异(一)

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养禽与禽病防治 1999年第6期 6-9页

作者：江国托刘思国康丽娟刘明春步志高卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

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鸡传染性支气管炎病毒中国流行株免疫原S1基因的分子克隆、序列分析及其DNA免疫的初步

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生物工程学报 1999年第3期15卷 305-305页

作者：江国托步志高刘思国康丽娟祁贤卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001

RT-PCR扩增QD毒株的S1基因,将其5'和3'端分别进行分子修饰后插入克隆载体pUC18的BamHI/HindIII位点,在大肠杆菌中实现了目的基因的克隆;利用英国IBV毒株S1全基因核酸探针与QD毒株S1基因的重组克隆质粒分子杂交后,采用HaeIII,Pv... 详细信息

RT-PCR扩增QD毒株的S1基因,将其5'和3'端分别进行分子修饰后插入克隆载体pUC18的BamHI/HindIII位点,在大肠杆菌中实现了目的基因的克隆;利用英国IBV毒株S1全基因核酸探针与QD毒株S1基因的重组克隆质粒分子杂交后,采用HaeIII,PvuII和XbaI等限制酶对此流行毒株S1基因cDNA进行了酶切分析。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒免疫原S1基因分子克隆序列分析 DNA免疫

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猪繁殖 - 呼吸道综合征病毒(PRRSV)CH-1a株基因型鉴定

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中国兽医学报 1998年第2期18卷 118-121页

作者：仇华吉郭宝清童光志刘文兴于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

根据猪繁殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）美洲型毒株和欧洲型毒株的基因组序列设计合成了２对引物，即１００８ＰＳ／１００９ＰＲ和１０１０ＰＬＳ／１０１１ＰＬＲ。我国分离的ＣＨ－１ａ株用这２对引物均能扩增出与预期大小相符... 详细信息

根据猪繁殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）美洲型毒株和欧洲型毒株的基因组序列设计合成了２对引物，即１００８ＰＳ／１００９ＰＲ和１０１０ＰＬＳ／１０１１ＰＬＲ。我国分离的ＣＨ－１ａ株用这２对引物均能扩增出与预期大小相符的ＲＴ－ＰＣＲ产物，分别与美洲型代表株（ＶＲ－２３３２）的ＲＴ－ＰＣＲ产物大小相当。特异性试验表明，这２对引物均不能扩增其他常见的繁殖障碍相关病毒的ＲＮＡ或ＤＮＡ以及未感染的ＭＡＲＣ－１４５细胞ＲＮＡ。间接免疫荧光试验也证明，ＣＨ－１ａ株与ＰＲＲＳＶ核衣壳蛋白特异性单克隆抗体以及美洲型毒株抗血清均呈阳性反应。因此初步证实ＣＨ－１ａ株为美洲型ＰＲＲＳＶ。

关键词：猪 PRRSV RT-PCR 基因型

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传染性支气管炎病毒S_1基因DNA免疫质粒的构建及其免疫原性

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中国兽医学报 1998年第6期18卷 527-530页

作者：步志高江国托王秀荣康丽娟祁贤陈万芳卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

为探讨ＤＮＡ免疫防制传染性支气管炎（ＩＢ）的可能性，以克隆的Ｍａｓｓｃｈｕｓｅｔｅ型类Ｍ４１地方分离ＱＤ株Ｓ１基因为免疫原基因，引入终止密码后插入ＳＶ４０启动子、增强子下游和ＳＶ４０ｐｏｌｙＡ信号上游，构建了Ｓ１基因... 详细信息

为探讨ＤＮＡ免疫防制传染性支气管炎（ＩＢ）的可能性，以克隆的Ｍａｓｓｃｈｕｓｅｔｅ型类Ｍ４１地方分离ＱＤ株Ｓ１基因为免疫原基因，引入终止密码后插入ＳＶ４０启动子、增强子下游和ＳＶ４０ｐｏｌｙＡ信号上游，构建了Ｓ１基因ＤＮＡ免疫表达质粒ｐＳＶＱＤＳ１。将大量扩增并经聚乙二醇纯化的ｐＳＶＱＤＳ１溶于ＰＢＳ，以３００μｇ／只的剂量肌肉注射免疫小鼠，于４周后采集分离免疫小鼠血清进行鸡胚病毒中和试验。结果表明，ｐＳＶＱＤＳ１能够诱导产生针对传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｍ４１株的中和抗体，具有良好的免疫原性。

关键词：传染性支气管炎病毒 S1基因 DAN免疫家畜

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新城疫病毒糖蛋白致病作用的研究

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中国兽医杂志 1998年第4期24卷 8-10页

作者：卢景良曹殿军王莉林张莹中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

本实验以分子生物学和现代免疫学方法，对新城疫病毒（ＮＤＶ）中国毒株Ｆ４８Ｅ９和ＬａＳｏｔａ等毒株的糖蛋白的致病作用进行了探讨。结果表明，ＮＤＶＦ和ＨＮ蛋白为糖蛋白，强弱毒株之间Ｆ蛋白裂解位点的氨基酸序列有明显的不同，... 详细信息

本实验以分子生物学和现代免疫学方法，对新城疫病毒（ＮＤＶ）中国毒株Ｆ４８Ｅ９和ＬａＳｏｔａ等毒株的糖蛋白的致病作用进行了探讨。结果表明，ＮＤＶＦ和ＨＮ蛋白为糖蛋白，强弱毒株之间Ｆ蛋白裂解位点的氨基酸序列有明显的不同，并决定了毒株的毒力。但ＮＤＶ的致病作用尚需ＨＮ、Ｆ蛋白的协同作用，单一的Ｆ或ＨＮ蛋白不能构成ＮＤＶ的致病作用。

关键词：新城疫发病机理单克隆抗体瞬时表达

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新城疫油苗免疫鸡血清IgG抗体含量及T细胞亚类的观察

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中国免疫学杂志 1998年第1期14卷 65-67页

作者：刘胜旺李一经曹殿军卢景良陈立君中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨市血液病研究所

采用间接ＥＬＩＳＡ方法和流式细胞分检仪（ＦＡＣｓ）检测了人工免疫新城疫油苗后，雏鸡血清中ＩｇＧ抗体含量及胸腺、脾脏和外周血中Ｔ淋巴细胞亚类的变化规律。实验表明，用新城疫油苗免疫后，雏鸡外周血中ＩｇＧ抗体含量明显升高。... 详细信息

采用间接ＥＬＩＳＡ方法和流式细胞分检仪（ＦＡＣｓ）检测了人工免疫新城疫油苗后，雏鸡血清中ＩｇＧ抗体含量及胸腺、脾脏和外周血中Ｔ淋巴细胞亚类的变化规律。实验表明，用新城疫油苗免疫后，雏鸡外周血中ＩｇＧ抗体含量明显升高。其脾脏和外周血中ＣＤ３＋Ｔ和ＣＤ４＋Ｔ细胞逐增，而ＣＤ８＋Ｔ细胞数量则减少。雏鸡胸腺中各亚类Ｔ细胞的变化不明显。提示在新城疫油苗免疫中，体液免疫和细胞免疫都起作用，而且二者具有一定的相关性。

关键词：新城疫油苗 IgG 抗体 T细胞亚类

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鸡新城疫病毒HN基因在重组鸡痘病毒中的表达及其保护性的研究

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中国免疫学杂志 1998年第1期14卷 61-64页

作者：曹殿军刘惠莉王莉林闵平张莹卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室东北农业大学

利用重组表达质粒ＨＮ－ＰＥＦＬ－２９与鸡痘病毒ＦＰ９共转染鸡胚成纤维细胞，经蚀斑筛选，结合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，获得含有外源ＨＮ基因的纯化重组病毒。将筛选到的重组病毒经４次传代，细胞可见明显病变。免疫荧光检测结合Ｗｅ... 详细信息

利用重组表达质粒ＨＮ－ＰＥＦＬ－２９与鸡痘病毒ＦＰ９共转染鸡胚成纤维细胞，经蚀斑筛选，结合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，获得含有外源ＨＮ基因的纯化重组病毒。将筛选到的重组病毒经４次传代，细胞可见明显病变。免疫荧光检测结合Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹表明该重组子表达产物主要位于细胞膜上，以糖基化（７４ｋＤ）和非糖基化（６８ｋＤ）２种形式存在，表达产物具有类似于天然ＮＤＶＨＮ蛋白的红细胞吸附活性及神经氨酸酶活性，且这２种活性均可被ＮＤＶＨＮ特异性单抗所抑制。对该表达产物的免疫活性研究表明：用重组病毒免疫４周龄ＳＰＦ鸡的ＥＬＩＳＡ抗体水平和血凝抑制效价均高于ＦＰＶ接种组，但低于ＬａＳｏｔａ弱毒活疫苗接种组。以ＮＤＶ强毒株Ｆ４８Ｅ９攻毒发现：接种重组病毒１０６ｐｆｕ／只时，保护力可达８０％，而１０４ｐｆｕ／只时，保护率仅为６０％，这表明该重组病毒对雏鸡具有一定的保护作用，且该保护作用与接种剂量有一定的相关性。

关键词：新城疫病毒 HN基因重组禽痘病毒

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ST_1肠毒素基因的合成、克隆及其融合蛋白的高效表达

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中国畜禽传染病 1998年第4期20卷 221-222页

作者：刘兴汉王莉林张绍杰初晓白中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

用ＤＮＡ合成仪合成了编码ＳＴ１肠毒素第５８到７２位氨基酸残基的ＤＮＡ片段，并将其与表达融合蛋白的载体ＰＧＥＭＥＸ－１重组，转化受体菌ＪＭ１０９（ＤＥ－３）。筛选出的重组克隆经过１ＰＴＧ４小时诱导，ＳＴ１融合蛋白的产量... 详细信息

用ＤＮＡ合成仪合成了编码ＳＴ１肠毒素第５８到７２位氨基酸残基的ＤＮＡ片段，并将其与表达融合蛋白的载体ＰＧＥＭＥＸ－１重组，转化受体菌ＪＭ１０９（ＤＥ－３）。筛选出的重组克隆经过１ＰＴＧ４小时诱导，ＳＴ１融合蛋白的产量超过超过细菌蛋白总量的４０％，最高达５９．９％。

关键词： ST1肠毒素基因重组融合蛋白高效表达

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重组牛白细胞介素-2生物活性单位的测定及其理化性质的分析

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中国畜禽传染病 1998年第2期20卷 79-82页

作者：金红李祥瑞于康震中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

本研究对大肠杆菌表达的重组牛白细胞介素－２的生物活性单位进行了测定。以已标定的人白细胞介素－２为标准品，ＭＴＴ比色法测出重组牛白细胞介素－２的生物活性单位约为４×１０６ｕ／Ｌ菌液。同时，以ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法测出表... 详细信息

本研究对大肠杆菌表达的重组牛白细胞介素－２的生物活性单位进行了测定。以已标定的人白细胞介素－２为标准品，ＭＴＴ比色法测出重组牛白细胞介素－２的生物活性单位约为４×１０６ｕ／Ｌ菌液。同时，以ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法测出表达的重组牛白细胞介素－２分子量约为１５．５ＫＤ。理化性质分析结果表明，重组牛白细胞介素－２生物活性酸碱适应范围约为２～１０；对胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的作用敏感，而对核酸酶的作用则不敏感；重组牛白细胞介素－２对温度变化敏感，表现为不耐高温。

关键词：重组牛白细胞介素-2 生物活性理化性质

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H14亚型禽流感病毒核蛋白基因的扩增与克隆

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中国畜禽传染病 1998年第3期20卷 132-135页

作者：邓国华于康震中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

本研究直接从浓缩的鸡胚尿囊液中提取Ｈ１４禽流感病毒的ＲＮＡ，并根据已发表的Ａ型流感病毒株的核苷酸序列，设计一对引物，采用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术成功地扩增了ＡＩＶ的核蛋白（ＮＰ）基因，以ｐＵＣ１１９为... 详细信息

本研究直接从浓缩的鸡胚尿囊液中提取Ｈ１４禽流感病毒的ＲＮＡ，并根据已发表的Ａ型流感病毒株的核苷酸序列，设计一对引物，采用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术成功地扩增了ＡＩＶ的核蛋白（ＮＰ）基因，以ｐＵＣ１１９为载体，以大肠杆菌ＪＭ８３为受体菌，并通过限制性分析证实。

关键词： RT-PCR 核蛋白基因禽流感病毒克隆

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