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禽流感病毒分离株A/Chicken/Xinjiang/1/96(H14N5)NP基因序列分析

中国畜禽传染病 1998年第6期20卷 336-339页

作者：邓国华于康震中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

对ＲＴＰＣＲ扩增的禽流感病毒Ａ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｘｉｎｊｉａｎｇ／１／９６（Ｈ１４Ｎ５）分离株核蛋白基因进行了序列分析。结果表明：所克隆的基因包含了全部核蛋白阅读框架，编码区为１４９４个核苷酸。比较性研究表明，该毒... 详细信息

对ＲＴＰＣＲ扩增的禽流感病毒Ａ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｘｉｎｊｉａｎｇ／１／９６（Ｈ１４Ｎ５）分离株核蛋白基因进行了序列分析。结果表明：所克隆的基因包含了全部核蛋白阅读框架，编码区为１４９４个核苷酸。比较性研究表明，该毒株与Ａ／Ｍａｌａｒｄ／Ａｓｔｒａｋｈａｎ（Ｇｕｒｊｅｖ）／２６３／８２（Ｈ１４Ｎ５）有很高的同源性，而与人流感病毒株有较大，显示出明显的禽流感病毒特征。

关键词：禽流感病毒核蛋白基因序列分析

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猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)CH-la株N基因的分子克隆、序列测定及其比较分析

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中国畜禽传染病 1998年第4期20卷 217-220页

作者：仇华吉童光志郭宝清王柳张绍杰王玫于力刘宝全中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

根据已发表的ＰＲＲＳＶＩＡＦ－ｅｘｐ９１株的核酸序列，设计了一对特异性引物，用ＲＴ－ＰＣＲ扩增了ＰＲＲＳＶＣＨ－ｌａ株的Ｎ基因，经补平和磷酸化后，克隆到ｐＵＣ１８ＳｍａＩ位点上。经电泳分析、酶切和ＰＣＲ鉴定证实后，进... 详细信息

根据已发表的ＰＲＲＳＶＩＡＦ－ｅｘｐ９１株的核酸序列，设计了一对特异性引物，用ＲＴ－ＰＣＲ扩增了ＰＲＲＳＶＣＨ－ｌａ株的Ｎ基因，经补平和磷酸化后，克隆到ｐＵＣ１８ＳｍａＩ位点上。经电泳分析、酶切和ＰＣＲ鉴定证实后，进行序列测定。序列分析表明ＣＨ－ｌａ株与ＩＡＦ－ｅｘｐ９１株（美洲型）Ｎ基因核苷酸同一性为９３．２％，氨基酸同一性高达９６．７％，而与ＬＶ株（欧洲株）核苷酸同一性为６３％，氨基酸同一性仅为５９％。其推导氨基酸残基分子量为１３．３ｋＤａ。根据ＣＨ－ｌａ株Ｎ基因推导的氨基酸残基缺少欧洲型毒株ＬＶ特有的两个氨基酸片段，表明ＣＨ－１ａ株与ＩＡＦ－ｅｘｐ９１株同源性高于它与ＬＶ株的同源性，而且ＣＨ－１ａ株与鼠乳糖脱氢酶增高症病毒（ＬＤＶ）在进化关系上比ＬＶ株与ＬＤＶ更密切。ＣＨ－１ａ株Ｎ基因推导的氨基酸残基Ｎ－端１／２段约２６％是由Ａｒｇ、Ｌｙｓ和Ｈｉｓ这３种氨基酸组成的，其疏水性侧像图与ＬＶ株和ＶＲ－２３３２株（美洲型）几乎相同，这表明两种基因型的核衣壳蛋白（Ｎ蛋白）具有一定的保守性。由于Ｎ蛋白是ＰＲＲＳＶ所有结构蛋白中免疫原性比较强的病毒蛋白，是现行血清学试验的抗原基础，因此Ｎ基因的分子克隆为研制ＰＲＲ?

关键词：猪病生殖-呼吸道综合征 PRRSV N基因分子克隆

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中国鸡传染性支气管炎病毒的变异

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中国畜禽传染病 1998年第6期20卷 321-323页

作者：江国托刘思国康丽娟步志高王秀荣卢景良王永坤中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

同ＩＢＶ参考株比较，中国ＩＢＶ流行株血清型内和血清型间在基因型和组织嗜性上均已发生变异；研究首次表明ＩＢＶ血清型、基因型及组织嗜性间存在有规律的相关性；病毒免疫原Ｓ１基因的点突变在一定程度上可影响病毒的免疫原性。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒变异

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禽流感病毒A/***/Eng-Q/983/79/(H7N1)血凝素基因的全序列分析

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中国畜禽传染病 1998年第5期20卷 257-259页

作者：陈化兰于康震中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

对反转录－聚合酶链反应扩增克隆的Ｈ７亚型禽流感病毒（ＡＩＶ）Ａ／Ａｆｒｉ．Ｓｔａｒ／Ｅｎｇ－Ｑ／９８３／７９／（Ｈ７Ｎ１）的血凝素（ＨＡ）基因进行了核苷酸序列分析。结果，克隆的ＨＡ基因共１７０７ｂｐ，包括完整的阅读框... 详细信息

对反转录－聚合酶链反应扩增克隆的Ｈ７亚型禽流感病毒（ＡＩＶ）Ａ／Ａｆｒｉ．Ｓｔａｒ／Ｅｎｇ－Ｑ／９８３／７９／（Ｈ７Ｎ１）的血凝素（ＨＡ）基因进行了核苷酸序列分析。结果，克隆的ＨＡ基因共１７０７ｂｐ，包括完整的阅读框架；同源性分析表明该毒株起源于欧亚群系；ＨＡ裂解位点只有一个碱性氨基酸，显示典型的低致病力特征。Ｈ７亚型ＡＩＶＨＡ基因的克隆成功为分子诊断和基因工程疫苗的研制奠定了基础。

关键词： H7亚型流感病毒血凝素基因序列分析家禽

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禽流感RT-PCR诊断法的建立

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中国畜禽传染病 1998年第2期20卷 105-107页

作者：崔尚金陈化兰唐秀英邓国华田国斌于康震中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

根据禽流感病毒（ＡＩＶ）Ａ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｂｒｅｓｌｉｎ／１９０２（Ｈ７Ｎ７）株的血凝素（ＨＡ）基因参考序列设计合成一对Ｈ７ＨＡ特异引物，并应用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取病毒ＲＮＡ，建立了逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－... 详细信息

根据禽流感病毒（ＡＩＶ）Ａ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｂｒｅｓｌｉｎ／１９０２（Ｈ７Ｎ７）株的血凝素（ＨＡ）基因参考序列设计合成一对Ｈ７ＨＡ特异引物，并应用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取病毒ＲＮＡ，建立了逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＡＩＶＲＮＡ的方法。应用此法对鸡胚培养的ＡＩＶ尿囊液、ＳＰＦ感染鸡粪便进行了检测，并与琼脂扩散试验和电镜技术作了对比。特异性试验以新城疫病毒（ＮＤＶ）、传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）、传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、减蛋综合征病毒（ＥＤＳ－７６Ｖ）等的感染鸡胚尿囊液作为对照。结果表明，ＡＩＶ尿囊液ＲＴ－ＰＣＲ全部阳性，ＳＰＦ感染鸡粪便８７份，ＲＴ－ＰＣＲ检出６９份阳性，样品处理浓缩后琼脂扩散检出１１份，电镜检测了２３份样品，仅检出２份阳性。非特异性对照样品经ＲＴ－ＰＣＲ检测全部阴性。将ＡＩＶ感染鸡胚尿囊液作１０倍系列连续稀释，可检出稀释度为１０－２的病毒尿囊液。ＲＴ－ＰＣＲ最早检出时间为感染后第３天，而琼扩和电镜均是７天。该法具有高度的特异性和灵敏性，且节约时间（只需８小时左右）。

关键词：禽 RT-PCR 诊断流行性感冒

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表达传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组鸡痘病毒的构建及其免疫保护性研究

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中国畜禽传染病 1998年第2期20卷 65-67页

作者：沈瑞忠王笑梅陈忠斌李雁冰于康震中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

以脂质体转染技术构建了表达鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２基因的重组鸡痘病毒ＦＰＶ－ＶＰ２，该病毒在鸡胚成纤维细胞及鸡体内均能稳定产生子代病毒，经翅皮下５×１０５ＰＦＵ／羽免疫１日龄ＳＰＦ鸡，免疫后４周以１... 详细信息

以脂质体转染技术构建了表达鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２基因的重组鸡痘病毒ＦＰＶ－ＶＰ２，该病毒在鸡胚成纤维细胞及鸡体内均能稳定产生子代病毒，经翅皮下５×１０５ＰＦＵ／羽免疫１日龄ＳＰＦ鸡，免疫后４周以１００ＬＤ５０／羽ＩＢＤＶ超强毒株Ｇ株攻毒，获得了５／６的保护，但不能有效预防临床发病及法氏囊受损萎缩。实验结果证明了ＶＰ２是ＩＢＤＶ的宿主保护性抗原，提示Ｔ细胞介导的免疫可能在ＩＢＤＶ的免疫中起着较为重要的作用。本研究为ＩＢＤＶ重组病毒疫苗研制进行了有益探索。

关键词：鸡痘病毒疫苗重组技术 IBDV 免疫保护性

来源：评论

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鸡传染性支气管炎病毒中国流行株免疫原基因的分子克隆与基因分型

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中国免疫学杂志 1998年第1期14卷 57-60页

作者：江国托刘思国步志高祁贤康丽娟卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室南京农业大学动物医学系东北农业大学生物工程系

从我国华中、华东、华南、华北、东北及西北等地分离鸡传染性支气管炎病毒流行株，经病毒的病原性、形态结构、理化特性、病毒抗原的特异性检测、组织嗜性、结构多肽及血清型分析等多方面的鉴定，对来源于我国不同地区的流行毒株免疫原... 详细信息

从我国华中、华东、华南、华北、东北及西北等地分离鸡传染性支气管炎病毒流行株，经病毒的病原性、形态结构、理化特性、病毒抗原的特异性检测、组织嗜性、结构多肽及血清型分析等多方面的鉴定，对来源于我国不同地区的流行毒株免疫原Ｓ１基因进行了分子克隆及基因分型；ＲＴ－ＰＣＲ扩增病毒Ｓ１基因，将Ｓ１基因５′和３′端分别进行分子修饰之后插入克隆载体ｐＵＣ１８的ＢａｍＨⅠ／ＨｉｎｄⅢ位点，在Ｅｃｏｌｉ中实现了目的基因的克隆；利用英国病毒株Ｓ１全基因核酸探针与流行株Ｓ１基因的重组克隆质粒分子杂交及目的基因５′端高变区核苷酸序列分析鉴定后，采用ＨａｅⅢ、ＰＶＵⅡ和ＸｂａⅠ等限制性核酸内切酶酶切分析不同流行株Ｓ１基因ｃＤＮＡ。结果表明，我国流行的鸡传染性支气管炎病毒分为６个主要的基因型；试验发现除与Ｍ４１和澳大利亚Ｔ株相近基因型毒株之外，我国流行的毒株存在明显的分子水平的变异，这与病毒血清型鉴定的结果一致，鸡传染性支气管炎病毒中国流行毒株免疫原基因Ｓ１的分子克隆及基因分型为该病毒分子流行病学及病毒遗传变异的主要分子基础的深入研究奠定了基础。

关键词：鸡病传染性支气管炎分子克隆基因分 IB病毒

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一种快速鉴定重组转化子的方法

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生物技术 1998年第6期8卷 41-44,5页

作者：金红李媛邓国华于康震中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

对于重组DNA的鉴定往往需要两至三天甚至更长的时间。尤其是对那些既无筛选标志，插入DNA片段又与原载体大小差别甚大的重组转化子的鉴定，更加耗时费力。该研究利用PCR方法，建立了一种从转化子菌落中直接鉴定重组DNA的方法，使这一过... 详细信息

对于重组DNA的鉴定往往需要两至三天甚至更长的时间。尤其是对那些既无筛选标志，插入DNA片段又与原载体大小差别甚大的重组转化子的鉴定，更加耗时费力。该研究利用PCR方法，建立了一种从转化子菌落中直接鉴定重组DNA的方法，使这一过程缩短为半天，减少了不必要的人力和物力耗费。

关键词：基因重组技术多聚酶链反应 PCR

来源：评论

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HVT非必需基因区鉴定及含MDVgB基因重组病毒的构建

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自然科学进展（国家重点实验室通讯） 1998年第6期8卷 755-758页

作者：赵晓岩刘长军李曦田志军原野徐宜为中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

以火鸡疱疹病毒(HVT)约8.0kb的BamHⅠDNA克隆片段中的B9mHⅠHindⅢ亚克隆片段为同源序列,将大肠杆菌β-半乳糖苷酶(LacZ)基因作为报告基因,通过同源重组,获得了表达LacZ基因产物的重组HVT(LacZ-rHVT)。经体内、体外传代表明重组病毒中的... 详细信息

以火鸡疱疹病毒(HVT)约8.0kb的BamHⅠDNA克隆片段中的B9mHⅠHindⅢ亚克隆片段为同源序列,将大肠杆菌β-半乳糖苷酶(LacZ)基因作为报告基因,通过同源重组,获得了表达LacZ基因产物的重组HVT(LacZ-rHVT)。经体内、体外传代表明重组病毒中的LacZ基因表达稳定;同时证明该亚克隆片段属于HVT复制的非必需基因。在此基础上,将Ⅰ型马立克氏病毒(MDV)糖蛋白B(gB)基因插入该亚克隆片段中,构建了含gB基因的HVT转移载体质粒(pHMDVgB)。将pHMDVgB与LacZ-rHVT DNA重组,通过病毒蚀斑的颜色筛选,获得了含MDVgB基因的重组HVT(MDVgB-rHVT)。采用PCR扩增及Dot blot杂交检测证实MDV的gB基因已插入到HVT基因组中。

关键词： MDVgB基因火鸡疱疹病毒重组病毒疫苗 HVT

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甲醛对马立克氏病琼扩抗原的影响

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中国畜禽传染病 1998年第4期20卷 246-246页

作者：李维义李媛熊永忠中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

甲醛对马立克氏病琼扩抗原的影响李维义李媛熊永忠＊（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，哈尔滨１５０００１）甲醛作为一种灭活剂，被人们广泛用于抗原和疫苗的生产。目前许多禽用灭活疫苗都是用甲醛来灭活... 详细信息

甲醛对马立克氏病琼扩抗原的影响李维义李媛熊永忠＊（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，哈尔滨１５０００１）甲醛作为一种灭活剂，被人们广泛用于抗原和疫苗的生产。目前许多禽用灭活疫苗都是用甲醛来灭活。在甲醛灭活过程中，对被灭活的生物...

关键词：马立克氏病琼扩抗原甲醛

来源：评论

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