检索结果-内蒙古大学图书馆

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：胡泉博崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

将纳米PCR技术引入非洲猪瘟病毒(AsFV)检测，建立了ASFV病毒高效纳米PCR检测方法。使用该方法同时检测大肠杆菌(***)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒II型(PCV-2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRsV)、猪捷申病毒(PTV-8)... 详细信息

将纳米PCR技术引入非洲猪瘟病毒(AsFV)检测，建立了ASFV病毒高效纳米PCR检测方法。使用该方法同时检测大肠杆菌(***)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒II型(PCV-2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRsV)、猪捷申病毒(PTV-8)、猪脑心肌炎病毒(EMCV)，结果只有ASFV病毒中P54基因扩增出552bp的目的片段。敏感性表明比普通PCR对照实验结果显示纳米PCR检测技术是常规PCR检测技术敏感性的1000倍以上，最低核酸拷贝数检出量可以达到101copy／V L数量级。在对中国黑龙江、吉林和河南三个省份的8个地区临床送检的69份样品进行检测，检测结果显示均为阴性，在以上三个地区均未发现ASFV病毒感染情况。

关键词：非洲猪瘟基因扩增纳米聚合酶链式反应病毒检测

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适应无血清培养的HEK293细胞的建立

适应无血清培养的HEK293细胞的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：孟其麟孙元李红梅王楠田大勇仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001 延边大学农学院动物医学系，吉林延吉 130001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

本研究采用培养液渐进替换的方法获得了一株适应无血清培养的HEK293细胞(29SF)，经检测293SF细胞具有稳定的腺病毒增殖能力与外源蛋白表达能力;平均病变时间为97.00 h，比HEK293细胞缩短12.9％;毒价达到107.48TCIDmL，比HEK293细胞提高4... 详细信息

本研究采用培养液渐进替换的方法获得了一株适应无血清培养的HEK293细胞(29SF)，经检测293SF细胞具有稳定的腺病毒增殖能力与外源蛋白表达能力;平均病变时间为97.00 h，比HEK293细胞缩短12.9％;毒价达到107.48TCIDmL，比HEK293细胞提高43.3％;并且随着代数的提高稳定性良好，连续传16代后293sF细胞状态与易感性没有发生变化。此细胞系为腺病毒的无血清生产奠定材料基础。

关键词：腺病毒无血清培养蛋白表达稳定性

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禽白血病病毒双抗体夹心ELISA方法的建立

禽白血病病毒双抗体夹心ELISA方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：负炳岭高玉龙王笑梅刘文李德龙秦立廷刘在斯吴关祁小乐王永强高宏雷中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／禽传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

为建立一种快速有效的检测禽白血病病毒的方法，以原核表达的HB09JY03(ALV-J)p27蛋白制备的单克隆抗体作为包被抗体，p27蛋白制备的多克隆抗体作为检测抗体建立了检测ALV的双抗体夹心EusA(DAs-ELISA)方法。该方法对p27的最小检出量为1.2... 详细信息

为建立一种快速有效的检测禽白血病病毒的方法，以原核表达的HB09JY03(ALV-J)p27蛋白制备的单克隆抗体作为包被抗体，p27蛋白制备的多克隆抗体作为检测抗体建立了检测ALV的双抗体夹心EusA(DAs-ELISA)方法。该方法对p27的最小检出量为1.25ng/ML，且与禽类常见的病毒(IBV，MDV，ILTV等)无交叉反应。动物感染实验结果表明该方法可在感染动物12d后有效检测泄殖腔分泌物中的ALV。利用该方法检测了491份蛋清样品和180份肛拭子样品，与PCR方法符合率分别为96.5％和93.8％。结果表明，该方法具有方便、快速、敏感等优点，该方法的建立为ALV的早期诊断及种鸡场的净化提供了有效工具。

关键词：禽白血病病毒单克隆抗体多克隆抗体双抗体夹心酶联免疫吸附测定

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鸡马立克氏病病毒分离株“LMS”基因组重复区的测定及分析

鸡马立克氏病病毒分离株“LMS”基因组重复区的测定及分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：成云张艳萍李志杰郑永胜谭成章刘长军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／禽传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

鸡马立克氏病病毒(MDv)为鸡马立克氏病的病原。本实验对一株MDV分离毒株”LMS”的基因组重复区(包括连接长重复区和短重复区的α样序列)进行了测定。LMS分离株基因组的长重复区长度为11 746 bp，α样序列为997 bp，短重复区为12 431 bp... 详细信息

鸡马立克氏病病毒(MDv)为鸡马立克氏病的病原。本实验对一株MDV分离毒株”LMS”的基因组重复区(包括连接长重复区和短重复区的α样序列)进行了测定。LMS分离株基因组的长重复区长度为11 746 bp，α样序列为997 bp，短重复区为12 431 bp。在LMS分离株基因组重复区内，预测存在43个开放阅读框(ORF)，与已报道的毒株序列相比存在5个变异较大的ORF。重复区的遗传进化分析表明，LMS分离株与国内814株，欧洲pC12．130株亲缘关系较近。LMS分离株在短重复区潜伏相关转录本(Latency—associated transcripts，LATs)编码序列的预测转录起始位点位置存在缺失;LMS分离株在仅样序列内存在一个新的短重复序列。LMS分离株基因组重复区的测定有助于研究国内MDV流行毒株的分子遗传特征。

关键词：鸡马立克氏病病毒基因组重复区序列测定序列分析

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2株猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离及其基因测序

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长江大学学报（自科版）（中旬） 2012年第11期9卷 24-29页

作者：张枫李江南尹曼曼郭东伟刘琴芳王朝翁长江熊涛长江大学生命科学学院湖北荆州434025 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

2006年，我国爆发了高致病性猪繁殖与呼吸综合征（HP—PRRSV），给养猪业造成了严重的经济损失，该HP-PRRSV在Nsp2区有30个氨基酸的不连续缺失。分子流行病学调查证实，目前我国流行的PRRSV毒株主要是HP—PRRSV毒株。2011年，从山东某... 详细信息

2006年，我国爆发了高致病性猪繁殖与呼吸综合征（HP—PRRSV），给养猪业造成了严重的经济损失，该HP-PRRSV在Nsp2区有30个氨基酸的不连续缺失。分子流行病学调查证实，目前我国流行的PRRSV毒株主要是HP—PRRSV毒株。2011年，从山东某猪场成功分离到2株PRRSV，分别命名为PRRSV-SDA2和PRRSV—SDA3；基因测序结果显示PRRSV-SDA2全长为15349bp，PRRSV-SDA3全长为15350bp。通过与涵盖欧洲型和北美型的24个毒株全基因比对，发现这2个毒株均属于北美型HP—PRRSV，与HuN4毒株的同源性最高，均高达99．5％，其NSP2蛋白的482和533～561位缺失了30个氨基酸。成功分离的SDA2和SDA32个HP—PRRSV及完成的基因测序，为构建HP—PRRSV毒株的感染性克隆奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP—PRRSV) 分离与鉴定基因测序 NSP2

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猪细小病毒非结构蛋白NS2和NS3基因的克隆与原核表达

猪细小病毒非结构蛋白NS2和NS3基因的克隆与原核表达

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：王晓玲蔺文成胡峰王朝刘朝霞周顺毕克东崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001 青岛农业大学动物科技学院，山东青岛 266109 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001 青岛农业大学动物科技学院，山东青岛 266109

通过重叠延伸PCR(SOE-PcR)方法扩增猪细小病毒BQ-C株的NS2、NS3基因，并将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)上，分别构建出重组表达质粒pEToNS2、pET-NS3。用不同浓度的IPTG进行诱导表达，***分析表明pET-NS2重组蛋白在IPTG浓度为1．2 m... 详细信息

通过重叠延伸PCR(SOE-PcR)方法扩增猪细小病毒BQ-C株的NS2、NS3基因，并将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)上，分别构建出重组表达质粒pEToNS2、pET-NS3。用不同浓度的IPTG进行诱导表达，***分析表明pET-NS2重组蛋白在IPTG浓度为1．2 mM、温度为37℃、诱导4 h时表达量最大，分子量为25 ku;pET-NS3重组蛋白在IPTG浓度为1 mM、温度为37℃、诱导4h时表达量最大，融合蛋白的分子质量为19．4ku。对表达的可溶性蛋白，用钴柱亲和层析纯化得到了NS2、NS3的重组蛋白，western blot鉴定表明，重组蛋白具有反应原性。本研究为猪细小病毒的自然免疫、发病机制、病毒复制、免疫机理等研究工作奠定了基础，未见以前有所报道。

关键词：猪细小病毒非结构蛋白基因克隆原核表达

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腺病毒/日本脑炎病毒复制子嵌合载体的构建

腺病毒/日本脑炎病毒复制子嵌合载体的构建

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：李红梅孙元亓文宝孟其麟田大勇廖明仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001 华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室，广东广州 510642 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001 华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室，广东广州 510642

日本脑炎病毒(JEV)复制子被证实是一种有前景的DNA疫苗栽体，但因其不稳定和递送效率低使得免疫效力不理想。本研究的目的是利用人复制缺陷型腺病毒(AdV)这个高效的递送系统来递送JEV复制子从而构建一个嵌合载体。将之前构建的含有增强... 详细信息

日本脑炎病毒(JEV)复制子被证实是一种有前景的DNA疫苗栽体，但因其不稳定和递送效率低使得免疫效力不理想。本研究的目的是利用人复制缺陷型腺病毒(AdV)这个高效的递送系统来递送JEV复制子从而构建一个嵌合载体。将之前构建的含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的J1三V复制子插入到经过改造后带有SwaI位点的的pShuttle-CMV载体中，再将来自pCI载体的嵌合内含子插入JEV复制子中，得到转移载体DSh-JEV-In-EGFP，经SwaI线形化后转化BJ5183感受态细胞，将所得重组腺粒经PacI线形化后转染HEK293细胞。传代直至出现细胞病变，得到含有表达EGFP的JEV复制子的重组腺病毒，命名为rAdV-JEV-In-EGFP。结果表明，pSh-JEV-In-EGFP在细菌中传20代仍然保持稳定，EGFP蛋白在rAdV-JEV—In—EGFP感染的HEK293细胞中稳定、高效地表达。腺病毒／日本脑炎病毒复制子嵌合载体有望用于开发能同时预防日本脑炎和其它传染性疾病的二价疫苗。

关键词：日本脑炎病毒复制子腺病毒嵌合载体内含子稳定性

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种鸡禽肺病毒感染的血清学调查

种鸡禽肺病毒感染的血清学调查

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第三届(2012)中国白羽肉鸡产业发展大会暨第二届全球肉鸡产业论坛

作者：贠炳岭 YUN Bing-ling LIU Zai-si 刘在斯 WU Guan 吴关 LI Jiukuan 李久宽 QIN Li-tin 秦立廷 QI Xiao-le 祁小乐 WANG Yong-qiang 王永强 GAO Hong-lei 高宏雷高玉龙 GAO Yu-long WANG Xiao-mei 王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 Division of Avian Infectious Diseases State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology Harbin Vete

禽肺病毒(Avian pneumovirus,APV)感染火鸡称为火鸡支气管炎(TRT),能够感染火鸡上呼吸道,并继发细菌感染。除感染火鸡以外,APV与鸡的肿头综合征(SHS)有关,能够引起蛋鸡产蛋量短期下降和轻微呼吸道症状。许多国家对该病毒都有报道。为明... 详细信息

禽肺病毒(Avian pneumovirus,APV)感染火鸡称为火鸡支气管炎(TRT),能够感染火鸡上呼吸道,并继发细菌感染。除感染火鸡以外,APV与鸡的肿头综合征(SHS)有关,能够引起蛋鸡产蛋量短期下降和轻微呼吸道症状。许多国家对该病毒都有报道。为明确该病对中国家禽的影响,收集2011年-2012年黑龙江、吉林、河北、山东、湖北等地区种鸡群的血清。通过禽肺病毒抗体检测,发现种鸡群中普遍存在禽肺病毒感染,多个鸡群血清阳性率达到100％。

关键词：禽肺病毒抗体检测血清学流行病学调查

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禽白血病病毒双抗体夹心ELISA方法的建立

禽白血病病毒双抗体夹心ELISA方法的建立

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第三届(2012)中国白羽肉鸡产业发展大会暨第二届全球肉鸡产业论坛

作者：贠炳岭 YUN Bing-ling LIU Wen 刘文 LI De-long 李德龙 QIN Li-ting 秦立廷 L1U Zai-si 刘在斯 WU Guan 吴关 QI Xiao-le 祁小乐 WANG Yong-qiang 王永强 GAO Hong-lei 高宏雷高玉龙 GAO Yu-long WANG Xiao-mei 王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 Division of Avian Infectious Diseases State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology Harbin Vete

本文为建立一种快速有效的检测禽白血病病毒的方法,以原核表达的HLJ09MDJ-1(ALV-J)p27蛋白制备的单克隆抗体作为包被抗体,p27蛋白制备的多克隆抗体作为检测抗体建立了检测ALV的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法.该方法对p27的最小检出量... 详细信息

本文为建立一种快速有效的检测禽白血病病毒的方法,以原核表达的HLJ09MDJ-1(ALV-J)p27蛋白制备的单克隆抗体作为包被抗体,p27蛋白制备的多克隆抗体作为检测抗体建立了检测ALV的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法.该方法对p27的最小检出量为1.25ng/ML,且与禽类常见的病毒(IBV,MDV,ILTV等)无交叉反应.动物感染实验结果表明该方法可在感染动物12天后有效检测泄殖腔分泌物中的ALV.利用该方法检测了491份蛋清样品和180份肛拭子样品,与PCR方法符合率分别为96.5％和93.8％.结果表明,该方法具有方便、快速、敏感等优点,该方法的建立为ALV的早期诊断及种鸡场的净化提供了有效工具.

关键词：禽白血病病毒早期诊断抗体检测双抗体夹心法

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新城疫疫苗的研究进展

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现代农业科技 2012年第2期 325-327页

作者：杨煦刘玉芬刘怀然哈尔滨师范大学生命科学与技术学院黑龙江哈尔滨150025 东北农业大学农业生物功能基因重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室

综述了常规疫苗和基因工程疫苗2种类型新城疫疫苗的研究进展,分析新城疫疫苗的发展方向,以促进新城疫疫苗的研究。

关键词：新城疫病毒疫苗研究进展

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