检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2007年第6期29卷 427-431页

作者：高玉龙高宏雷王晓艳李俊山邓小芸刘伟王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

将鸡传染性法氏囊病病毒超强毒Gx株vp2基因克隆到载体pFastBac HTA中,构建重组转座载体pFVP2,然后将其转化DH10Bac感受态大肠杆菌,将vp2基因整合到Bacmid穿梭载体中,获得重组穿梭载体BacmidVP2;通过脂质体转染将其转染Sf9昆虫细胞,获得... 详细信息

将鸡传染性法氏囊病病毒超强毒Gx株vp2基因克隆到载体pFastBac HTA中,构建重组转座载体pFVP2,然后将其转化DH10Bac感受态大肠杆菌,将vp2基因整合到Bacmid穿梭载体中,获得重组穿梭载体BacmidVP2;通过脂质体转染将其转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBacVP2。用Western blot和间接免疫荧光试验分析表明IBDV VP2蛋白在Sf9昆虫细胞获得正确表达,所表达的重组VP2蛋白分子量约50 Ku。以rBacVP2感染Sf9细胞裂解物免疫3周龄SPF鸡,在免疫后7 d可检测到ELISA抗体;免疫后14 d可检测到琼脂免疫扩散抗体。攻毒试验表明,初次免疫后14 d对IBDV超强毒株的攻击保护率为75%,2次免疫后14 d对其的攻击保护率为100%。

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒 vp2基因杆状病毒免疫原性

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A群猪轮状病毒JS株VP6基因序列分析

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黑龙江畜牧兽医 2007年第7期 27-29页

作者：高秀春时洪艳佟有恩吴波平孙东波白兴华陈建飞冯力东北农业大学生命科学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

参考GenBank中发表PRVOSU毒株VP6序列ORF两端保守区，设计1对特异引物，以PRVJS株反转录cDNA为模板，通过PCR方法获得约1．3kb的基因片段，并克隆到pMD18-T载体中进行序列测定。测序结果表明：获得了VP6的1320bp全基因序列；将其ORF与... 详细信息

参考GenBank中发表PRVOSU毒株VP6序列ORF两端保守区，设计1对特异引物，以PRVJS株反转录cDNA为模板，通过PCR方法获得约1．3kb的基因片段，并克隆到pMD18-T载体中进行序列测定。测序结果表明：获得了VP6的1320bp全基因序列；将其ORF与国内外9株PRVVP6基因的ORF进行核苷酸和氨基酸同源性比较，核苷酸同源性在77．1％～91．1％之间，氨基酸的同源性在89．7％～99．5％之间；在氨基酸系统发育进化树中，JS毒株与A131、OSU、CN86毒株亲缘关系较近．为一个进化群。

关键词： PRV VP6基因序列分析

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畜禽业 2007年第5期18卷 6-8页

作者：崔尚金戚亭岳峰雄周盛华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物国家重点实验室猪传染病学研究室黑龙江哈尔滨150001

人们越来越多地在育肥猪的呼吸道疾病中诊断出与猪圆环病毒II型相关的肺炎。很多实验室诊断的呼吸系统综合征(PRDC)病例通常是多种病毒混合感染。在美国,2000年,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)占病例的42%,PCV2占22%,猪流感病毒(SIV)占1... 详细信息

人们越来越多地在育肥猪的呼吸道疾病中诊断出与猪圆环病毒II型相关的肺炎。很多实验室诊断的呼吸系统综合征(PRDC)病例通常是多种病毒混合感染。在美国,2000年,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)占病例的42%,PCV2占22%,猪流感病毒(SIV)占19%,猪肺炎支原体占22%;我们国家现在的情况与此相似。本文介绍3个临床病例分别是PRRSV和PCV2共感染、PCV2和SIV共感染以及PCV2和猪肺炎支原体共感染。这就是今年国内的主要猪病形势,经常导致严重的临床疾病,唯一的组织学损伤是淋巴组织消退和气道纤维化,在这些损伤中大量的PCV2抗原表明PCV2在PRDC中起到重要的致病作用。去年夏季,江苏、安徽、江西、湖南、湖北、河南、山东等地的部分区域发生了以高热、呼吸困难和全身性出血为主的猪疫情。根据所收集的流行病学资料、实验室检测结果和相关动物实验,初步认为造成本次猪疫情发生的主要病原为多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus)以及猪2型圆环病毒(Porcine circovirus-2)感染,即3P综合征(3P Syndrome,以下称3P综合征)。这就是例证。PCV2感染相关的疾病经常与一种或多种病原体共发生。PCV2感染经常在PRDC暴发中出现,可能导致这些病例中损伤的严重性和持续性的原因。PCV2感染相关的损伤能够在急性呼吸系统疾病中发现,并不局限于消瘦症状。

关键词：猪猪圆环病毒Ⅱ型猪繁殖与呼吸综合征病毒猪流感病毒猪呼吸道疾病综合征

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鸡马立克病病毒814株gE、gI、gp82基因的克隆及序列分析

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动物医学进展 2007年第3期28卷 26-30页

作者：张艳萍刘长军秦运安张晓巍张颖中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

从感染鸡马立克病病毒血清Ⅰ型(MDVⅠ)814株的鸡胚成纤维细胞(CEF)中提取病毒总DNA,以其为模板,根据GenBank中MDVⅠGA株基因组gE、gI、gp82基因序列,设计并合成3对特异性引物,用PCR方法分别扩增了814株的gE、gI、gp82基因,并将扩增的基... 详细信息

从感染鸡马立克病病毒血清Ⅰ型(MDVⅠ)814株的鸡胚成纤维细胞(CEF)中提取病毒总DNA,以其为模板,根据GenBank中MDVⅠGA株基因组gE、gI、gp82基因序列,设计并合成3对特异性引物,用PCR方法分别扩增了814株的gE、gI、gp82基因,并将扩增的基因片段克隆到pMD18-T载体中,进行序列测定,应用DNA Star软件分析814株gE、gI、gp82基因核苷酸序列,并与已发表的MDVⅠ毒株序列进行了比较。结果表明,不同MDVⅠ毒株的gE、gI、gp82基因同源性很高,814株与已发表的MDVⅠ毒株的gE、gI、gp82基因核苷酸序列同源性分别在99.4%、98.9%和99.6%以上。

关键词：鸡马立克病病毒基因序列分析

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR鉴别诊断方法的建立

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR鉴别诊断方法的建立

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第三次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：郝晓芳周艳君田志军韦天超安同庆彭金美华荣虹童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001

2006年5月以来,我国部分猪场爆发一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染性疾病,经病原分离及分子流行病学分析证明是由一种带有nsp2部分缺失的对猪呈高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的。本实验参考GenBank发表的以... 详细信息

2006年5月以来,我国部分猪场爆发一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染性疾病,经病原分离及分子流行病学分析证明是由一种带有nsp2部分缺失的对猪呈高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的。本实验参考GenBank发表的以及本实验室分离鉴定PRRSV的nsp2基因序列,在紧靠上述nsp2缺失区的两端的保守区设计并合成了一对引物,建立了一种PRRSV的RP-PCR检测方法。该方法扩增高致病性PRRSV基因组获得230bp的片段,扩增经典型PRRSV时则获得320bp的片段,通过RT-PCR产物大小可将二者区分开来。通过大量临床病料的检测,配合PCR产物测序验证,结果表明该方法简便、快速、特异,可以鉴别高致病性PRRSV,为进一步的PRRS流行病学研究提供了重要的技术手段。

关键词：高致病性传染病猪繁殖与呼吸综合征病毒病原分离基因缺失 RT-PCR检测鉴别诊断

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR鉴别诊断方法的建立

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR鉴别诊断方法的建立

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：郝晓芳周艳君田志军韦天超安同庆彭金美华荣虹童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001

2006年5月以来，我国部分猪场爆发一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染性疾病，经病原分离及分子流行病学分析证明是由一种带有nsp2部分缺失的对猪呈高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的。本实验参考GenBank发表的... 详细信息

2006年5月以来，我国部分猪场爆发一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染性疾病，经病原分离及分子流行病学分析证明是由一种带有nsp2部分缺失的对猪呈高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的。本实验参考GenBank发表的以及本实验室分离鉴定的PRRSV的nsp2基因序列，在紧靠上述nsp2缺失区的两端的保守区设计并合成了一对引物，建立了一种PRRSV的RT-PCR检测方法。该方法扩增高致病性PRRSV基因组获得230bp的片段，扩增经典型PRRSV时则获得320bp的片段，通过RT-PCR产物大小可将二者区分开来。通过大量临床病料的检测，配合PCR产物测序验证，结果表明该方法简便、快速、特异，可以鉴别高致病性PRRSV，为进一步的PRRS流行病学研究提供了重要的技术手段。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒基因缺失鉴别诊断

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流行性乙型脑炎病毒E蛋白结构域Ⅲ的抗原表位鉴定与功能研究

流行性乙型脑炎病毒E蛋白结构域Ⅲ的抗原表位鉴定与功能研究

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第三次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：闫丽萍华荣虹亓文宝童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨 150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001 华南农业大学兽医学院广东广州510642

流行性乙型脑炎病毒(JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒.E蛋白是该病毒的主要结构蛋白.E蛋白在介导病毒与宿主细胞的吸附,融合;决定病毒的血凝活性、细胞嗜性以及决定病毒毒力和诱导宿主产生保护性免疫反应中起重要作用.E蛋白结构域... 详细信息

流行性乙型脑炎病毒(JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒.E蛋白是该病毒的主要结构蛋白.E蛋白在介导病毒与宿主细胞的吸附,融合;决定病毒的血凝活性、细胞嗜性以及决定病毒毒力和诱导宿主产生保护性免疫反应中起重要作用.E蛋白结构域Ⅲ(EⅢ)是诱导中和抗体的重要区域.为确定乙型脑炎EⅢ的抗原表位,本实验首先克隆了JEV疫苗株SA14-14-2的EⅢ区域,并用pGEX-6P-1载体进行融合表达,免疫印迹分析表明,该融合蛋白能被抗JEV血清识别.为了进一步对该结构域进行抗原表位作图,设计了14个覆盖该区域且部分重叠的短肽.将各短肽与GST进行融合表达与纯化.短肽融合蛋白经JEV阳性血清免疫印迹和ELISA免疫反应性扫描分析,结果鉴定出E39(<'305>TEKFSFAKNPVDTGHG<'320>)、E45-1(<'355>VTVNPFVATSSA<'366>)、E48-1(<'377>PFGDSYIV<'384>)和E49(<'385>VGRGDKQINHHWHKAG<'400>)四个线性抗原表位.分别将4个抗原表位融合蛋白免疫小鼠,制备各抗原表位单因子血清,结果经体外病毒中和试验表明E39为具有病毒中和活性的抗原表位.本试验结果为进一步分析JEV E蛋白结构与功能以及诊断试剂和表位疫苗的研究提供了重要工作基础.

关键词：流行性乙型脑炎病毒 E蛋白结构域Ⅲ 抗原表位鉴定免疫印迹表位疫苗

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乙型脑炎病毒E蛋白结构域Ⅲ的抗原表位鉴定

乙型脑炎病毒E蛋白结构域Ⅲ的抗原表位鉴定

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：闫丽萍华荣虹亓文宝童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001 华南农业大学兽医学院广东广州510642

流行性乙型脑炎是一种由蚊虫传播的病毒性人兽共患病，乙型脑炎病毒是该病毒的病原E蛋白是乙型脑炎病毒的主要结构蛋白，它在病毒的吸附、融合、血凝、细胞趋向性、病毒毒力和诱导保护性免疫反应中起重要作用。而E蛋白结构域Ⅲ是诱导中... 详细信息

流行性乙型脑炎是一种由蚊虫传播的病毒性人兽共患病，乙型脑炎病毒是该病毒的病原E蛋白是乙型脑炎病毒的主要结构蛋白，它在病毒的吸附、融合、血凝、细胞趋向性、病毒毒力和诱导保护性免疫反应中起重要作用。而E蛋白结构域Ⅲ是诱导中和抗体的重要区域。为了分析鉴定乙型脑炎E蛋白结构域Ⅲ的抗原表位，首先克隆并用pGEX-6P-1载体融合表达了乙型脑炎病毒疫苗株sA14-14-2的该区域，通过免疫印迹分析表明，该区域融合蛋白能被JEV阳性血清所识别。为了对这一区域进行抗原表位作图，进一步设计了一套14个覆盖该区域的部分重叠短肽，并进行了GST融合表达，用JEV阳性血清对14个融合蛋白进行免疫印迹和ELISA免疫反应性分析，鉴定出4个线性抗原表位E39(305TEKFSFAKNPVDTGHG320)、FA5-1(355VTVNPFVATSSA 366)、E48-l(377PFGDSYIV384)、E49(385VGRGDKQINHHWHKAG400)。本试验结果对进一步分析乙脑病毒E蛋白结构与功能以及诊断试剂和表位疫苗的研究有重要意义。

关键词：乙型脑炎病毒抗原表位人兽共患病免疫反应

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山羊IL-2基因的克隆、表达及其多克隆抗血清的制备

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中国比较医学杂志 2007年第8期17卷 I0060-I0060页

作者：海岗刘胜旺陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

应用RT-PCR方法从山羊外周血淋巴细胞中克隆了山羊白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)基因并测序,将编码山羊白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)成熟蛋白的基因亚克隆至原核表达载体pET30a(+)上,构建重组质粒并进行确证性测定。然后将重... 详细信息

应用RT-PCR方法从山羊外周血淋巴细胞中克隆了山羊白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)基因并测序,将编码山羊白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)成熟蛋白的基因亚克隆至原核表达载体pET30a(+)上,构建重组质粒并进行确证性测定。然后将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG于37℃诱导培养。表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在。SDS-PAGE分析显示,表达的山羊IL-2融合蛋白分子量约为18kD。包涵体被6mol/L盐酸胍裂解后,通过ProBondTM蛋白纯化试剂盒纯化。用所获得的重组山羊IL-2纯化产物经3次肌内注射新西兰白兔,制备了兔抗山羊IL-2多克隆血清,并用Western blot进行了证明。本次试验成功地表达、纯化了山羊IL-2融合蛋白,并制备了抗山羊IL-2多克隆抗血清,为下一阶段关于山羊IL-2重组蛋白生物学特性及其应用的研究打下了坚实的基础。

关键词：山羊IL-2 融合蛋白原核表达抗血清

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中国2000-2004年鸡传染性支气管炎病毒地方分离株核蛋白基因的遗传变异分析

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中国病毒学 2006年第6期21卷 575-580页

作者：张庆霞韩宗玺邵昱昊陈建飞荣骏弓刘胜旺孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

对2000-2004年从中国9个省市分离到的13株IBV的核蛋白基因片段进行序列测定及分析的结果表明,13株IBV分离株核蛋白基因均含有一个长1230bp的ORF,但存在基因突变现象。与GenBank中的42株参考毒株核蛋白基因序列进行比较和分析,系统进化... 详细信息

对2000-2004年从中国9个省市分离到的13株IBV的核蛋白基因片段进行序列测定及分析的结果表明,13株IBV分离株核蛋白基因均含有一个长1230bp的ORF,但存在基因突变现象。与GenBank中的42株参考毒株核蛋白基因序列进行比较和分析,系统进化关系显示55株IBV毒株分属于9个群。第Ⅰ-Ⅲ群主要包括美国、日本、荷兰等国家以及中国的部分IBV分离株和疫苗株。其中本研究中的CK/CH/LHN/00I可能为一株分离的疫苗毒,CK/CH/LSD/03I、CK/CH/LDL/01I可能为重组毒。而中国近十年来分离的IBV毒株主要分布在第Ⅵ-Ⅷ群中,此3群内IBV毒株之间N蛋白推导氨基酸同源性为88.3%～100%,与其他各群之间同源性为62.3%～95.1%。因此,此基因型的IBV毒株可能在中国已有较长时期的存在且发生了较大程度的变异。其中第Ⅵ群中两株韩国分离株与中国IBV分离株具有较近的亲缘关系。以上结果表明,中国大多数IBV分离株在N基因进化关系上较为独立,与国外毒株相比,和韩国毒株进化关系密切。此外,中国IBV毒株基因重组现象更加普遍,尤其是疫苗毒和野毒之间的重组。

关键词：传染性支气管炎病毒核蛋白基因遗传变异

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