检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2014年第7期36卷 547-550页

作者：霍红李业南薛遥郭立平王晓磊步志高华荣虹中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)的定量检测方法,本实验根据JEV的E基因保守序列设计一对特异性引物及探针,并以E基因重组质粒作为标准品,建立检测JEV的TaqMan荧光定量PCR方法。结果显示,该方法的灵敏度可达到10个拷贝,是常规PCR灵敏度... 详细信息

为建立猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)的定量检测方法,本实验根据JEV的E基因保守序列设计一对特异性引物及探针,并以E基因重组质粒作为标准品,建立检测JEV的TaqMan荧光定量PCR方法。结果显示,该方法的灵敏度可达到10个拷贝,是常规PCR灵敏度的100倍。该方法对其它相关猪病病毒的检测显示均为阴性。重复性试验表明该方法的组间和组内的变异系数均小于2%。通过检测未免疫猪和免疫减毒活疫苗猪在感染JEV后的病毒血症样品,将该方法与JEV传统病毒分离方法进行比较,结果表明该方法与乳鼠脑内接种方法灵敏度相同,比细胞分离方法灵敏度高。该方法可以作为临床检测JEV及评价疫苗保护效力的检测方法。

关键词：流行性乙型脑炎病毒 TaqMan荧光定量PCR 检测

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蓝舌病病毒3型VP5蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定

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中国预防兽医学报 2014年第5期36卷 387-390页

作者：孙晶孙恩成刘二战孙亮徐青元杨涛吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为制备血清3型蓝舌病病毒(BTV)VP5蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究利用pMAL-C4x原核表达系统表达、纯化的重组VP5蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,并以Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达、纯化... 详细信息

为制备血清3型蓝舌病病毒(BTV)VP5蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究利用pMAL-C4x原核表达系统表达、纯化的重组VP5蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,并以Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达、纯化的重组VP5蛋白为包被抗原,通过间接ELISA筛选出一株稳定分泌抗BTV3 VP5蛋白的MAb杂交瘤细胞株(3F2)。间接免疫荧光结果表明:MAb 3F2与BTV3、BTV5、BTV9、BTV16呈阳性反应;与BTV6、BTV7、BTV13、BTV21呈弱阳性反应;与其它BTV血清型均呈阴性反应。利用原核表达的麦芽糖结合蛋白(MBP)融合短肽对MAb 3F2识别的抗原表位进行鉴定,结果表明:该MAb识别的抗原表位为89PGERGIQMKIKEIEEE104。氨基酸序列比对结果显示该表位在不同地域来源的BTV3株间比较保守。该MAb的制备和鉴定为进一步研究VP5蛋白的结构和功能奠定了基础。

关键词：蓝舌病病毒3型 VP5蛋白单克隆抗体抗原表位

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表达H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白重组新城疫病毒的构建以及密码子优化的HA免疫增强作用

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中国预防兽医学报 2014年第8期36卷 585-589页

作者：陈曦于桂梅刘景利王金良姜永萍葛金英步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达H5N1亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白重组新城疫病毒(NDV)及比较密码子优化的HA免疫增强作用,本研究利用NDV LaSota弱毒疫苗株的反向遗传操作系统,分别构建了表达野毒型H5N1亚型AIV HA蛋白和密码子优化的HA蛋白的重组NDV,并分别命... 详细信息

为构建表达H5N1亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白重组新城疫病毒(NDV)及比较密码子优化的HA免疫增强作用,本研究利用NDV LaSota弱毒疫苗株的反向遗传操作系统,分别构建了表达野毒型H5N1亚型AIV HA蛋白和密码子优化的HA蛋白的重组NDV,并分别命名为rL-H5HA和rL-optiH5HA。对拯救的重组病毒进行RT-PCR、间接免疫荧光和western blot鉴定,结果表明,两种重组病毒均可以在BHK-21细胞中以及鸡胚成纤维细胞稳定地表达HA蛋白。此外,rL-optiH5HA在体外增殖能力及在体内刺激产生抗体均显著高于rL-H5HA。本研究表明,密码子优化的HA重组NDV具有明显的免疫增强作用。本研究为研制安全、有效的新型禽流感疫苗提供了实验依据。

关键词：禽流感病毒 HA蛋白重组新城疫病毒密码子优化

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蓝舌病病毒一步RT-PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2014年第9期36卷 712-714页

作者：冯瑜菲赵国辉徐青元杨涛孙恩成李俊平吴东来东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立蓝舌病病毒（BTV）群特异性核酸检测方法,本研究针对BTV S10基因保守区域设计并合成1对特异性引物,建立了一步RT-PCR检测方法,并分别进行了特异性试验、敏感性试验以及临床样品的检测.实验结果表明：该方法对BTV1～24型均有特异... 详细信息

为建立蓝舌病病毒（BTV）群特异性核酸检测方法,本研究针对BTV S10基因保守区域设计并合成1对特异性引物,建立了一步RT-PCR检测方法,并分别进行了特异性试验、敏感性试验以及临床样品的检测.实验结果表明：该方法对BTV1～24型均有特异性反应,而对茨城病毒（IBAV）、中山病毒（CV）和赤羽病病毒（AKAV）无交叉反应,具有良好的特异性;最低检出量为102 TCID50/mL.此外,该方法能有效的从羊的抗凝血样品中检测出BTV核酸.本研究所建立的一步RT-PCR检测方法可以用于BTV的快速检测及流行病学调查.

关键词：蓝舌病病毒分子诊断 bluetongue virus (BTV)

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蓝舌病病毒8型VP2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定

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中国预防兽医学报 2014年第4期36卷 318-322页

作者：席娜赵国辉孙恩成秦永丽孙亮魏天徐青元杨涛孙晶刘二战钱爱东吴东来吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为制备蓝舌病病毒03TV）8型VP2蛋白的单克隆抗体（MAb）TL鉴定其抗原表位，本研究采用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达并纯化的重组VP2蛋白免疫BALB／c小鼠，三免后取小鼠脾淋巴细胞与SP2／0细胞进行融合，并以纯化的重组VP2蛋白为... 详细信息

为制备蓝舌病病毒03TV）8型VP2蛋白的单克隆抗体（MAb）TL鉴定其抗原表位，本研究采用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达并纯化的重组VP2蛋白免疫BALB／c小鼠，三免后取小鼠脾淋巴细胞与SP2／0细胞进行融合，并以纯化的重组VP2蛋白为包被抗原，通过间接ELISA筛选出两株能够稳定分泌抗BTV8VP2蛋白的MAbs杂交瘤细胞株（2G4和387）。间接免疫荧光结果表明：2G4和387与BTV8均呈阳性反应，与BTV1～7、BTV9-24、茨城病毒、中山病毒以及赤羽病毒均呈阴性反应。Westernblot结果显示，2G4和387均能够识别BTV8及BTV8重组VP2蛋白。Ig亚类鉴定2G4和387均为IgG1／κ链。利用原核表达的96条覆盖VP2全长的麦芽糖结合蛋白（MBP）融合短肽对MAbs的抗原表位进行鉴定，结果表明：MAb2G4识别的抗原表位为捌LCRLLSTIGRKMCNTE^296。本研究结果为BTV8型特异性检测方法的建立及VP2蛋白结构和功能的研究奠定了基础。

关键词：蓝舌病病毒8型 VP2蛋白真核表达单克隆抗体抗原表位

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西尼罗病毒NS1与E基因重组腺病毒的构建及免疫原性研究

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中国预防兽医学报 2014年第11期36卷 881-884页

作者：刘二战赵国辉孙恩成崔焕忠杨涛徐青元孙晶孙亮席娜魏天吴东来吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为构建串联表达西尼罗病毒(WNV)NS1和E基因的重组腺病毒,本研究利用口蹄疫病毒具有自我切割功能的2A蛋白的编码序列将NS1和E基因串联,构建穿梭载体p Shuttle-WNV-NS1-2A-E,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒DNA,经脂质体转染AD293细胞,... 详细信息

为构建串联表达西尼罗病毒(WNV)NS1和E基因的重组腺病毒,本研究利用口蹄疫病毒具有自我切割功能的2A蛋白的编码序列将NS1和E基因串联,构建穿梭载体p Shuttle-WNV-NS1-2A-E,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒DNA,经脂质体转染AD293细胞,在细胞内完成病毒粒子的组装制备重组腺病毒。通过间接免疫荧光和western blot检测表明:重组腺病毒中的外源基因表达的融合蛋白NS1-2A-E可以自我裂解为NS1和E蛋白。将构建的重组腺病毒免疫小鼠,结果表明该重组病毒可以诱导机体产生良好的体液免疫应答。本实验为WNV重组腺病毒活载体疫苗的研制奠定了基础。

关键词：西尼罗病毒 NS1 E 重组腺病毒体液免疫

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蓝舌病病毒VP7蛋白竞争抑制群特异性构象抗原表位的初步鉴定

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中国预防兽医学报 2014年第1期36卷 63-66页

作者：魏天徐青元耿宏伟冯瑜菲杨涛孙恩成席娜刘二战钱爱东邸英华吴东来吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 吉林省长春皓月清真肉业股份有限公司吉林长春130000

为鉴定蓝舌病病毒（BTV）的单克隆抗体（MAb）所识别的VP7蛋白竞争抑制群特异性构象抗原表位，本研究采用噬菌体展示技术对BTVVP7蛋白构象抗原表位氨基酸进行筛选，通过质粒定点突变技术对编码筛选获得的氨基酸区域的基因进行突变，同... 详细信息

为鉴定蓝舌病病毒（BTV）的单克隆抗体（MAb）所识别的VP7蛋白竞争抑制群特异性构象抗原表位，本研究采用噬菌体展示技术对BTVVP7蛋白构象抗原表位氨基酸进行筛选，通过质粒定点突变技术对编码筛选获得的氨基酸区域的基因进行突变，同时利用ELISA法验证该氨基酸区域突变后对BTVvP7蛋白抗原性的影响。结果表明被BTVMAb4H7所识别的BTVVP7蛋白竞争抑制群特异性构象抗原表位由175FQG177、185YL186和278WH279组成，其中aal75～aal77和aal85～aal86为该抗原表位的关键性氨基酸，本研究初步阐明了BTvVP7蛋白竞争抑制特异性的分子基础，对VP7蛋白功能研究和建立BTV群特异性检测方法具有重要意义。

关键词：蓝舌病病毒 VP7蛋白构象表位

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流行性乙型脑炎病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立

流行性乙型脑炎病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：霍红李业南薛遥郭立平王晓磊步志高华荣虹中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立流行性乙型脑炎病毒(JEV)的定量检测方法,本实验根据JEV的E基因保守序列设计一对特异性引物及探针,并以E基因重组质粒作为标准品,建立检测JEV的TqMan荧光定量PCR方法.结果显示,该方法的灵敏度可达到10个拷贝,是常规PCR灵敏度的100... 详细信息

为建立流行性乙型脑炎病毒(JEV)的定量检测方法,本实验根据JEV的E基因保守序列设计一对特异性引物及探针,并以E基因重组质粒作为标准品,建立检测JEV的TqMan荧光定量PCR方法.结果显示,该方法的灵敏度可达到10个拷贝,是常规PCR灵敏度的100倍.该方法对其它相关猪病病毒的检测显示均为阴性,特异性好.重复性试验表明该方法的组间和组内的变异系数均小于2％.通过检测未免疫猪和免疫减毒活疫苗猪在感染JEV后的病毒血症及内脏病毒载量,将该方法与JEV传统病毒分离方法进行比较,结果表明该方法与乳鼠脑内接种方法灵敏度相同,比细胞分离方法灵敏度高.本研究可以作为临床检测JEV病毒及评价疫苗保护效力的检测方法.

关键词：猪乙型脑炎病毒基因检测荧光定量聚合酶链反应效果评估

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蓝舌病病毒12型NS1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

蓝舌病病毒12型NS1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十九次学术研讨会

作者：王海秀孙恩成徐青元杨涛吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨 150001

目的:蓝舌病(Bluetongue,BT)是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒引起的反刍动物虫媒(如库蠓、伊蚊等)传染病.本研究旨在制备NS1蛋白的MAbs,并对其生物学特性进行鉴定,旨在为蓝舌病病毒诊断与相关基础研究奠定基础. 方法:根据Genb... 详细信息

目的:蓝舌病(Bluetongue,BT)是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒引起的反刍动物虫媒(如库蠓、伊蚊等)传染病.本研究旨在制备NS1蛋白的MAbs,并对其生物学特性进行鉴定,旨在为蓝舌病病毒诊断与相关基础研究奠定基础. 方法:根据Genbank中己登录的BTV12-NS1基因序列，利用Primer 5.0软件选取其ORF在5’端和3’端分别设计上下游引物后构建原核重组质粒pET BTV12-NS1和真核重组质粒pFAST BTV12-NS1，分别进行原核表达及真核表达。表达的重组蛋白经纯化鉴定后，利用原核重组BTV12-NS1蛋白免疫BALB/c小鼠，利用真核重组BTV12-NS1蛋白建立间接ELISA方法，确定检测最佳条件后筛选阳性杂交瘤细胞株并进行WB和IFA鉴定。结果:本实验共筛选出26株阳性杂交瘤细胞株，分别对其进行WB和IFA鉴定，发现26株MAbs均与Bac-to-Bac昆虫细胞表达系统表达的重组BTV12-NS1蛋白呈特异性反应，也能与接种BTV12的BHK-21细胞中表达的NS1蛋白发生特异性反应，而与接种野生杆状病毒和未接毒的BHK-21细胞不发生反应;IFA显示:3 E9,3B6,2B7,4B9四株MAbs无生物学活性，其余有22株MAbs均与感染BTV12的BHK-21细胞呈特异性免疫荧光。与感染BTV1-24的BHK-21细胞结果表明:2G5和3F6为型特异性MAbs;2E8,3C2,,3G6,3E7,4B1,4E5为群特异性MAbs;其余MAbs均有不同的反应谱系。结论:本研究所制备的抗NS1蛋白MAbs为下一步蓝舌病病毒相关研究奠定了基础。

关键词：蓝舌病病毒非结构蛋白单克隆抗体制备工艺生物学特性

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蓝舌病病毒群特异性抗原捕获ELISA方法的建立

蓝舌病病毒群特异性抗原捕获ELISA方法的建立

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十九次学术研讨会

作者：孙恩成徐青元杨涛冯瑜菲吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨 150001

目的:蓝舌病(BT)是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒(BTV)引起的反刍动物虫媒传染病.不同流行地区易感动物的死亡率差别很大,一般可达30％,在某些地区绵羊感染后死亡率甚至高达80％.目前为止已有报道证实BT血清型已达26种之多,并且... 详细信息

目的:蓝舌病(BT)是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒(BTV)引起的反刍动物虫媒传染病.不同流行地区易感动物的死亡率差别很大,一般可达30％,在某些地区绵羊感染后死亡率甚至高达80％.目前为止已有报道证实BT血清型已达26种之多,并且每种血清型之间没有交叉保护作用,増加了BT防控的难度,因此建立切实有效的抗原检测方法对于BTV的监控闻言是至关重要的.本研究利用实验制备保存的针对于BTV VP7蛋白的单克隆抗体(MAb)建立BTV群特异性抗原捕获ELISA方法,为BTV疫苗定量以及抗原监测奠定基础. 方法:BTV灭活抗原、茨城病毒(IBAV)、赤羽病毒(AKAV)、牛轮状病毒(BRV)、口蹄疫病毒(FMDV)等由哈尔滨兽医研究所提供;采用Protein ASepharoseTM CL-4B亲和层析纯化制备的MAb 1F6与4H7腹水，利用简易过碘酸钠法进行HRP-MAb 4H7标记试验;利用矩阵法确定抗原捕获ELISA术式及反应条件。结果:建立BTV群特异性抗原捕获ELISA方法，对己知抗原BTV,IBAV,AKAV,BRV, FMDV进行检测，发现所建立的抗原捕获ELISA方法仅对BTV灭活病毒液呈阳性反应，对其它相关病毒以及BHK-21细胞裂解液呈阴性反应。敏感性检测最低检出量为400TCIDSO. 结论:本实验所建立的BTV群特异性抗原捕获ELISA方法具有较好的敏感性和特异性，可以用于BTV病原检测以及疫苗定量。

关键词：蓝舌病病毒群特异性抗原捕获方法酶联免疫吸附测定

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