检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2012年第6期34卷 428-431页

作者：杨非张淑琴杜承林跃智周建华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院特产研究所、人兽共患病实验室吉林长春130112

马慢病毒受体1(ELR1)是马传染性贫血病毒(EIAV)唯一受体,属于肿瘤坏死因子受体超家族。为研究ELR1 mRNA选择性剪接的状况,本研究从EIAV靶细胞的巨噬细胞中提取RNA,经RT-PCR扩增并克隆测序。结果显示,ELR1 mRNA具有不同形式的选择性剪接... 详细信息

马慢病毒受体1(ELR1)是马传染性贫血病毒(EIAV)唯一受体,属于肿瘤坏死因子受体超家族。为研究ELR1 mRNA选择性剪接的状况,本研究从EIAV靶细胞的巨噬细胞中提取RNA,经RT-PCR扩增并克隆测序。结果显示,ELR1 mRNA具有不同形式的选择性剪接异构体,主要表现为插入和缺失形式。插入片段为153 bp,位于序列的786 nt～787 nt之间,而缺失型异构体丢失了ELR1序列的415 nt～478 nt。不论序列的插入或缺失,均导致该基因编码框移位。特别是插入型异构体,编码框在跨膜区之前遇到终止密码子,造成翻译的提前终止,推测产生截短的可溶性ELR1。这些剪接异构体的鉴定为研究EIAV与机体的相互作用提供了新的研究方向。

关键词：选择性剪接马传染性贫血病毒受体 RT-PCR

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口蹄疫病毒2C3AB基因的原核表达及ELISA方法的建立

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中国预防兽医学报 2012年第7期34卷 543-547页

作者：王幸周国辉刘云于力东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

口蹄疫病毒(FMDV)的2C蛋白中存在对自然感染和灭活疫苗免疫动物具有鉴别诊断意义的抗原表位。为建立一种敏感的血清学鉴别诊断方法,本研究截取FMDV 2C蛋白的C端B细胞表位较为富集的区域与全长3AB基因组合,经原核表达获得分子量约为44 k... 详细信息

口蹄疫病毒(FMDV)的2C蛋白中存在对自然感染和灭活疫苗免疫动物具有鉴别诊断意义的抗原表位。为建立一种敏感的血清学鉴别诊断方法,本研究截取FMDV 2C蛋白的C端B细胞表位较为富集的区域与全长3AB基因组合,经原核表达获得分子量约为44 ku的目的蛋白。Western blot分析表明,表达产物2C3AB与FMDV感染动物的阳性血清呈特异性反应。以纯化的目的蛋白作为包被抗原建立间接ELISA方法,敏感性检测表明该方法比3ABC-ELISA具有更高的敏感性;同时检测猪圆环病毒、猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒、猪瘟病毒标准阳性血清均无交叉反应。批内和批间重复性试验显示,OD450nm值的变异系数小于9%。采用该方法检测不同背景的临床样品,并与3ABC-ELISA及进口试剂盒比较,总符合率分别为98.5%和90%。结果表明,该ELISA检测方法具有更高的敏感性和良好的特异性、重复性。

关键词：口蹄疫病毒 2C3AB基因原核表达间接ELISA

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牛支原体新基因(P18)的克隆表达及活性鉴定

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中国预防兽医学报 2012年第3期34卷 184-187页

作者：宋志强李媛孙文静刘洋邹晓辉陈维周玉梅辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室/国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150001

牛支原体(***)可以引起犊牛肺炎、关节炎、乳腺炎、角膜结膜炎等疾病,是一种牛的重要呼吸道病原体,目前***粘附宿主细胞的机制还不明确。研究表明,***表面存在的多种蛋白与致病菌在宿主体内的侵袭力与传播能力有关。我们通过分离表达多... 详细信息

牛支原体(***)可以引起犊牛肺炎、关节炎、乳腺炎、角膜结膜炎等疾病,是一种牛的重要呼吸道病原体,目前***粘附宿主细胞的机制还不明确。研究表明,***表面存在的多种蛋白与致病菌在宿主体内的侵袭力与传播能力有关。我们通过分离表达多个***基因,最终获得了一个表达纤溶酶原结合蛋白的新基因,并命名为P18。该基因表达大小约为67ku的重组蛋白。通过western blot鉴定,重组表达的P18蛋白可以被***抗体识别。进一步的试验表明,P18蛋白还具有纤溶酶原结合活性,从而推测该基因表达的蛋白可能是***的一个粘附相关因子。

关键词：牛支原体亚克隆表达粘附相关因子

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牛嵴病毒VP3蛋白的原核表达及初步应用

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中国预防兽医学报 2012年第11期34卷 907-910页

作者：王茜常继涛刘云于力东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

牛嵴病毒(BKV)是近几年在牛消化道中新发现的病毒,其致病性尚不清楚。我们的相关研究已表明,该病毒在我国的牛群中普遍存在。为重组表达BKV VP3蛋白,本研究采用RT-PCR方法从牛腹泻粪便样品中扩增BKV VP3蛋白的编码基因,将其克隆至pET-28... 详细信息

牛嵴病毒(BKV)是近几年在牛消化道中新发现的病毒,其致病性尚不清楚。我们的相关研究已表明,该病毒在我国的牛群中普遍存在。为重组表达BKV VP3蛋白,本研究采用RT-PCR方法从牛腹泻粪便样品中扩增BKV VP3蛋白的编码基因,将其克隆至pET-28a(+)载体中构建原核重组表达质粒pET-VP3。将pET-VP3转化至大肠杆菌BL21(DE3)中。经IPTG诱导表达及SDS-PAGE分析表明重组蛋白分子量约为27.8 ku,以包涵体形式存在。采用电洗脱方法纯化该重组蛋白并免疫BALB/c小鼠,制备抗BKV VP3的多克隆抗体。以纯化的重组蛋白作为包被抗原,初步建立了间接ELISA抗体检测方法。小范围调查结果显示,在检测的牛群中BKV感染率较高。

关键词：牛嵴病毒 VP3蛋白抗血清间接ELISA

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马传染性贫血病毒强毒株gag和gp45基因的体内进化分析

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动物医学进展 2012年第7期33卷 1-7页

作者：刘强王雪峰王珊珊韦华冕杜承林跃智马建周建华王凤龙内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

为研究马传染性贫血病毒(EIAV)强毒株体内进化规律,将3匹马分别以1×105 TCID50/匹接种EIAVLN40强毒株后,在不同时间点采取外周血,分离单核白细胞。提取白细胞中的DNA,并以其为模板,应用套式PCR技术分别扩增EIAV前病毒DNA的p15,p9和... 详细信息

为研究马传染性贫血病毒(EIAV)强毒株体内进化规律,将3匹马分别以1×105 TCID50/匹接种EIAVLN40强毒株后,在不同时间点采取外周血,分离单核白细胞。提取白细胞中的DNA,并以其为模板,应用套式PCR技术分别扩增EIAV前病毒DNA的p15,p9和gp45基因,经克隆后进行序列分析。结果显示,与接种前EIAVLN40相比较,p15基因核苷酸和氨基酸平均差异率分别为1.8%(0～2.9%)和1.7%(0～3.6%);p9分别为2.5%(0.3%～3.8%)和2.9%(0～4.8%);gp45-Ⅰ分别为1.3%(0.3%～2.1%)和1.8%(0～3.2%),gp45-Ⅱ分别为2.1%(0～3.4%)和2.6%(0～4.7%)。在EIA发热期,每个基因核苷酸和氨基酸差异率最小;在亚临床阶段,每个基因平均差异率总体上相对较高。氨基酸变异位点分析发现,发病期(2-2、3-1)各基因氨基酸序列回复到亲本株EIAVLN40,其余时期p15基因氨基酸稳定变异位点16N/S、88T/S和112M/E;p9基因115E/G和122K/M;gp45-Ⅰ基因9T/F/L;gp45-Ⅱ基因21E/K和29G/S。此外,p15基因进化树结果显示,发热期(2-2、3-1)p15基因序列与EIAVLN40序列处于同一分支上,亚临床阶段大多数p15基因序列处于另一个大分支上;其他基因进化情况与p15基因类似。对EIAV p15、p9、gp45基因体内进化分析,有助于对EIAV在马体内感染进程的研究,为进一步研究EIAV持续感染和逃避免疫监视的机制提供参考。

关键词：马传染性贫血病毒 p15基因 p9基因 gp45基因差异率变异分析

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副猪嗜血杆菌Plp4蛋白的原核表达及免疫原性分析

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中国预防兽医学报 2012年第5期34卷 415-417页

作者：朱晓凯赵福广李建军胡明明李艳玲张艳禾谢芳王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室/细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学生命科学学院吉林长春130118

为原核表达副猪嗜血杆菌Plp4蛋白,本研究通过PCR方法扩增Plp4全长基因并克隆于pET-28a(+)载体中,将重组质粒转化BL21(DE3)感受态中,采用0.4 mM IPTG经22℃诱导表达了35 ku的重组蛋白。经western blot试验证明Plp4蛋白具有良好的反应原性... 详细信息

为原核表达副猪嗜血杆菌Plp4蛋白,本研究通过PCR方法扩增Plp4全长基因并克隆于pET-28a(+)载体中,将重组质粒转化BL21(DE3)感受态中,采用0.4 mM IPTG经22℃诱导表达了35 ku的重组蛋白。经western blot试验证明Plp4蛋白具有良好的反应原性,免疫6周龄昆明小鼠制备免疫血清,ELISA检测表明制备的抗血清效价在1∶15 000以上,表明Plp4蛋白具有良好的免疫原性。

关键词：副猪嗜血杆菌表达 Plp4基因免疫原性

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携带非典型cpb2基因牛源A型产气荚膜梭菌重组α毒素的免疫保护性研究

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中国预防兽医学报 2012年第7期34卷 563-567页

作者：德艳艳姜志刚牛思博孙刚于力东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省动物卫生监督所黑龙江哈尔滨150090

为验证重组α毒素对携带非典型cpb2基因的A型产气荚膜梭菌的免疫保护性,本研究应用PCR技术,从某牛场牛源A型产气荚膜梭菌G1分离株中扩增出1 194 bp的α毒素编码基因(cpa)和795 bp的β2毒素编码基因(cpb2)。经BLAST分析显示,G1分离株携带... 详细信息

为验证重组α毒素对携带非典型cpb2基因的A型产气荚膜梭菌的免疫保护性,本研究应用PCR技术,从某牛场牛源A型产气荚膜梭菌G1分离株中扩增出1 194 bp的α毒素编码基因(cpa)和795 bp的β2毒素编码基因(cpb2)。经BLAST分析显示,G1分离株携带的cpb2基因与14个菌株的非典型cpb2基因的氨基酸序列同源性为95.1%～98.9%,与典型cpb2基因(L77695)的氨基酸序列同源性为61.7%。这表明,G1的cpb2基因为非典型cpb2基因。同时分别将cpa和cpb2基因扩增产物克隆于原核表达载体中,构建重组表达质粒pET-a和pET-b2,重组菌经IPTG诱导表达重组蛋白,将其纯化后单独及联合免疫小鼠进行免疫保护试验。结果显示,单独免疫重组α毒素蛋白组以及联合免疫重组β2毒素蛋白组的小鼠,均可以抵抗至少6倍最小致死量(MLD)的G1外毒素(包含α毒素和非典型β2毒素)的攻击,也可以完全抵抗至少6 MLD的G2外毒素(不包含β2毒素)的攻击。表明,重组α毒素蛋白对含有及不含有非典型β2毒素的A型产气荚膜梭菌均具有良好的免疫保护作用。

关键词：非典型cpb2基因 A型产气荚膜梭菌重组α毒素重组非典型β2毒素

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重排的PhiX174噬菌体裂解基因E能增强溶菌效率

重排的PhiX174噬菌体裂解基因E能增强溶菌效率

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：于申业彭玮司微尹录刘思国王春来常月红中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

菌蜕是通过调控PhiXl74噬菌体裂解基因E的表达而形成的，其为灭活疫苗的研究提供了新的途径。本文利用基因重排技术，构建了PhiXl74噬菌体裂解基因E的基因重排文库。通过与原核非融合表达载体DBV220进行重组，筛选到两个溶菌质粒。其中... 详细信息

菌蜕是通过调控PhiXl74噬菌体裂解基因E的表达而形成的，其为灭活疫苗的研究提供了新的途径。本文利用基因重排技术，构建了PhiXl74噬菌体裂解基因E的基因重排文库。通过与原核非融合表达载体DBV220进行重组，筛选到两个溶菌质粒。其中一个含有新奇的E基因突变体(命名为mE)，由5`端74-bp非编码序列和201bp的△E基因组成，能明显提高对大肠杆菌和沙门氏菌的溶菌效率。而且，溶菌细菌的OD600值最高可达到1.0(109cfu)，解决了菌蜕研究和生产中菌液浓度低和菌蜕数量少等技术瓶颈问题。本结果对于加快菌蜕疫苗的研制具有重要的意义。

关键词：革兰氏阴性菌菌蜕疫苗裂解基因基因重排突变体溶菌效率

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副结核分枝杆菌MAP1588C蛋白的原核表达与抗原性分析

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中国动物传染病学报 2012年第6期20卷 36-39页

作者：刘银冰陈利苹鄢秋龙曹俊刘思国黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001

从副结核分支杆菌K-10菌株基因组中扩增出516 bp的MAP1588C基因片段,插入原核表达载体pET-28b(+),转化至大肠杆菌BL21(DE3),在0.5 mmol/L的IPTG诱导下进行表达;利用融合蛋白的组氨酸标签进行亲和层析纯化重组蛋白;通过抗6 His标签抗体的... 详细信息

从副结核分支杆菌K-10菌株基因组中扩增出516 bp的MAP1588C基因片段,插入原核表达载体pET-28b(+),转化至大肠杆菌BL21(DE3),在0.5 mmol/L的IPTG诱导下进行表达;利用融合蛋白的组氨酸标签进行亲和层析纯化重组蛋白;通过抗6 His标签抗体的Western blot验证了纯化蛋白产物;另外,副结核阳性牛血清可检测到该蛋白条带。结果表明,表达的重组蛋白MAP1588C的蛋白分子量为21 kDa,具有良好抗原性,有望将此抗原用于建立副结核的ELISA诊断方法。

关键词：副结核分支杆菌 MAP1588C蛋白重组表达免疫性

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结核分枝杆菌rv3036c基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

结核分枝杆菌rv3036c基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：陈利苹曹俊刘银冰鄢秋龙刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／动物细菌病研究室，黑龙江哈尔滨 150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／动物细菌病研究室，黑龙江哈尔滨 150001 黑龙江八一农垦大学，黑龙江大庆 163319

本研究以结核分枝杆菌强毒株H37Rv基因组DNA为模板，扩增rv3036c基因，将此基因片段连接于表达载体pET-28a(+)，获得重组质粒pET-28a-ru3036c，并将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，经1 mmol／L IPTG诱导表达组氨酸标签融合蛋白R_v3... 详细信息

本研究以结核分枝杆菌强毒株H37Rv基因组DNA为模板，扩增rv3036c基因，将此基因片段连接于表达载体pET-28a(+)，获得重组质粒pET-28a-ru3036c，并将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，经1 mmol／L IPTG诱导表达组氨酸标签融合蛋白R_v3036c，用Ni-NTAHis口Bind Resin纯化目的蛋白，经westem-b10t验证了蛋白的纯化结果。Rv3036c蛋白纯化产物免疫新西兰大白兔，制备多克隆抗体。并通过间接EuSA方法检测抗体效价。结果显示，重组质粒双酶切鉴定和DNA序列测定均完全正确;sDS-PAGE和westem_blot分析结果显示，pET-28a-Rv3036c VT,可溶形式表达，蛋白分子量大小为28ku，且具有很好的免疫原性。以上结果为进一步研究rv3036c基因在结核分枝杆菌致病性中的作用奠定了很好的基础。

关键词：结核分枝杆菌原核表达多克隆抗体蛋白纯化

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