检索结果-内蒙古大学图书馆

中国家禽 2023年第5期45卷 85-91页

作者：李昌文于海波都成王野陈洪岩夏长友中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家禽类实验动物资源库兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

鹌鹑是一种重要的生产和实验用家禽,可按照实验动物标准进行实验动物化。文章总结了鹌鹑实验动物化简史及当前与实验动物领域密切相关的研究进展,包括分类学地位和驯化、常用的品种品系及资源、无菌鹌鹑培育、近交系鹌鹑培育、实验室饲... 详细信息

鹌鹑是一种重要的生产和实验用家禽,可按照实验动物标准进行实验动物化。文章总结了鹌鹑实验动物化简史及当前与实验动物领域密切相关的研究进展,包括分类学地位和驯化、常用的品种品系及资源、无菌鹌鹑培育、近交系鹌鹑培育、实验室饲养健康管理和资源保存,并对实验鹌鹑的应用前景进行了展望。

关键词：鹌鹑实验动物资源

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猪氨基肽酶N病毒结合受体核心区对TGEV在ST细胞中复制影响的研究

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中国预防兽医学报 2023年第1期45卷 1-8页

作者：史鑫琪季朝阳陈晓彤张子博张鑫郭慧娟田璐王洪峰陈洪岩王靖飞冯力夏长友孟庆文中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学创新团队/国家禽类实验动物资源库黑龙江哈尔滨150069 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪消化道传染病创新团队黑龙江哈尔滨150069 哈尔滨维科生物技术开发公司黑龙江哈尔滨150069 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原与病理形态学创新团队黑龙江哈尔滨150069

为研究与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)结合的猪氨基肽酶N(pAPN)受体核心区对TGEV复制以及细胞功能的影响,本研究检索并分析pAPN与TGEV的结合位点,结果显示,敲除pAPN aa668~aa963对其酶活性无影响。因此,利用CRISPR/Cas9技术构建pAPN与TGEV... 详细信息

为研究与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)结合的猪氨基肽酶N(pAPN)受体核心区对TGEV复制以及细胞功能的影响,本研究检索并分析pAPN与TGEV的结合位点,结果显示,敲除pAPN aa668~aa963对其酶活性无影响。因此,利用CRISPR/Cas9技术构建pAPN与TGEV结合位点敲除细胞系,经PCR和western blot鉴定结果显示,正确构建一株敲除pAPN aa668~aa963的ST细胞系,即敲除pAPN 15-21外显子,命名为KO-ST-15。采用CCK-8和细胞划痕方法检测KO-ST-15细胞的增殖和细胞迁移活性,结果显示,敲除pAPN 15-21外显子对ST细胞增殖和迁移活性均无显著影响。利用RT-qPCR和IFA检测KO-ST-15感染TGEV后病毒复制拷贝数和N蛋白的表达,结果显示,敲除pAPN 15-21外显子可极显著抑制TGEV在ST细胞系中的复制(P<0.001)。利用RT-qPCR检测KO-ST-15感染TGEV后炎症相关基因转录水平变化,结果显示,TGEV感染后KO-ST-15中的IL-6、IL-8和NLRP3(NOD-like receptor protein 3)mRNA转录水平无显著变化,但RIG-I和MDA5的转录水平显著上调(P<0.05)。上述结果首次表明,敲除pAPN15-21外显子能够极显著抑制TGEV在ST细胞中的复制,但细胞KO-ST-15的正常生理功能无变化,TGEV不能进入敲除pAPN 15-21外显子的细胞中引起炎症反应,该结果为进一步培育抗病育种猪提供参考依据和候选方案。

关键词：猪氨基肽酶N 猪传染性胃肠炎病毒 CRISPR/Cas9 ST细胞

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假病毒技术在猪病原研究中的应用

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中国兽医科学 2023年第6期53卷 764-771页

作者：刘弘毅陈洪岩夏长友高彩霞中国农业科学院、哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室、实验动物与比较医学创新团队、国家禽类实验动物资源库黑龙江哈尔滨150069

假病毒作为一种安全和便捷的研究工具,在病毒学尤其是在高致病性病毒基础研究和疫病防控研究中发挥着重要作用。本文通过介绍假病毒的定义和特性、分类和构建、常见的包装系统和报告基因,并重点阐述了假病毒在猪病原研究中的应用,旨在... 详细信息

假病毒作为一种安全和便捷的研究工具,在病毒学尤其是在高致病性病毒基础研究和疫病防控研究中发挥着重要作用。本文通过介绍假病毒的定义和特性、分类和构建、常见的包装系统和报告基因,并重点阐述了假病毒在猪病原研究中的应用,旨在为假病毒的发展与猪重要疫病的防控研究提供技术参考。

关键词：假病毒猪病原研究进展应用

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兔多杀性巴氏杆菌和兔出血症病毒双重PCR检测方法的建立及初步应用

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中国预防兽医学报 2023年第2期45卷 150-155页

作者：王豪杰陈见兴王梦杰林欢夏长友刘家森陈洪岩朱良全张贺王玉娥中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学创新团队黑龙江哈尔滨150069 中国兽医药品监察所北京100081

为建立兔多杀性巴氏杆菌(Pm)和兔出血症病毒(RHDV)的双重PCR检测方法,本研究根据Pm kmt1基因和RHDV VP60基因保守区域,设计2对特异性引物,经PCR分别扩增Pm kmt1基因和RHDV VP60基因保守区域,构建重组质粒pMD-Pm和pMD-RHDV,并经菌液PCR... 详细信息

为建立兔多杀性巴氏杆菌(Pm)和兔出血症病毒(RHDV)的双重PCR检测方法,本研究根据Pm kmt1基因和RHDV VP60基因保守区域,设计2对特异性引物,经PCR分别扩增Pm kmt1基因和RHDV VP60基因保守区域,构建重组质粒pMD-Pm和pMD-RHDV,并经菌液PCR和测序鉴定后作为重组质粒标准品。经各反应条件优化后初步建立了检测Pm和RHDV的双重PCR方法。反应条件优化结果显示,该方法的最适退火温度为59℃,扩增kmt1和VP60基因的最优引物浓度均为0.5μL(10μmol/L)。对Pm和RHDV及其他病原包括兔源支气管败血波氏杆菌、产气荚膜梭菌等20种相关病原的特异性试验结果显示,除Pm和RHDV有特异性扩增条带外,其余相关病原均无扩增条带,特异性较强。将两种重组质粒标准品分别10倍倍比稀释并等体积混合后作为模板,经该双重PCR方法扩增。结果显示,该方法对pMD-Pm的检测限为17.9拷贝/μL,对pMD-RHDV的检测限为1260拷贝/μL,敏感性较高;对两种病原的DNA和cDNA混合物的批内和批间重复性试验结果均一致,重复性较好。对100份临床患病兔肺脏样品的检测结果显示,Pm和RHDV的阳性率分别为13%(13/100)和7%(7/100),二者混合感染率为37%(37/100),与已报道的Pm和RHDV单一PCR方法的检测结果均一致。表明该方法检测的准确性较高,可以用于临床样品的检测。本研究建立的同时快速检测Pm和RHDV的双重PCR方法为临床这两种病的诊断提供了技术支持。

关键词：多杀性巴氏杆菌兔出血症病毒双重PCR

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部分兽医相关单位Ⅱ级生物安全柜的性能测试与分析

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实验动物与比较医学 2022年第2期42卷 111-116页

作者：马文杰张伟王伟苏世博郭慧娟张贺王梓刘怀然陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室国家禽类实验动物资源库黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

目的了解兽医相关单位实验室Ⅱ级生物安全柜的性能与使用情况。方法测试哈尔滨市3家兽医相关单位正在使用的126台Ⅱ级生物安全柜,依据相关标准针对检测结果进行性能指标的判定与分析,了解生物安全柜的使用情况。结果126台Ⅱ级生物安全... 详细信息

目的了解兽医相关单位实验室Ⅱ级生物安全柜的性能与使用情况。方法测试哈尔滨市3家兽医相关单位正在使用的126台Ⅱ级生物安全柜,依据相关标准针对检测结果进行性能指标的判定与分析,了解生物安全柜的使用情况。结果126台Ⅱ级生物安全柜性能检测总合格率为17.5%。Ⅱ级生物安全柜的外观完整性、工作区洁净度、送排风高效过滤器检漏、气流模式、流入气流流速、下降气流流速、照度、噪声及报警和联锁系统共9个项目的检测总合格率分别为100%、100%、100%、100%、49.2%、92.9%、68.3%、22.2%和100%。结论兽医相关单位实验室Ⅱ级生物安全柜性能检测总合格率较低,应对生物安全柜做定期性能检测,加强运行维护管理,及时排除生物安全隐患,防止实验室感染事故发生。

关键词：生物安全柜性能检测兽医实验室

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自主研发生物安全型换笼工作台的性能检测与评价

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实验动物与比较医学 2022年第2期42卷 102-110页

作者：苏世博马文杰王伟郭慧娟张贺王梓康雷刘守琦刘怀然司昌德苟春天张伟陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室国家禽类实验动物资源库黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

目的对自主研发的生物安全型换笼工作台进行功能检测与安全性评价。方法依据YY 0569—2011《Ⅱ级生物安全柜》、RB/T 199—2015《实验室设备生物安全性能评价技术规范》等标准对自主研发的由深圳泓腾生物科技有限公司生产的生物安全型... 详细信息

目的对自主研发的生物安全型换笼工作台进行功能检测与安全性评价。方法依据YY 0569—2011《Ⅱ级生物安全柜》、RB/T 199—2015《实验室设备生物安全性能评价技术规范》等标准对自主研发的由深圳泓腾生物科技有限公司生产的生物安全型换笼工作台(HT-1303)的各项性能指标进行检测,并判定其有效性及安全性。结果换笼工作台的主体外观完整性和稳定性、工作区洁净度、流入气流流速、下降气流流速、照度、噪声、气流流向、高效过滤器等检测效果良好,达到Ⅱ级生物安全柜标准。污染物品回收舱及器物表面灭菌舱的气密性效果良好,其尺寸、灭菌笼盒数量等还需进一步改进。结论本团队研制的生物安全型换笼工作台可实现整机正常运行,其各项指标合格,能够完成负压环境下独立通风笼具的更换,并保证操作者、实验对象及环境的安全。

关键词：换笼工作台性能检测生物安全

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SFTSV实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

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中国兽医科学 2022年第3期52卷 292-297页

作者：于志亚杨鸣发马云云康洪涛姜骞刘家森李广兴曲连东东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立快速、灵敏的发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)检测方法,根据GenBank中发热伴血小板减少综合征病毒RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)基因的保守序列设计引物和探针。通过对反应体系和反应条件的优化,建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR检... 详细信息

为建立快速、灵敏的发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)检测方法,根据GenBank中发热伴血小板减少综合征病毒RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)基因的保守序列设计引物和探针。通过对反应体系和反应条件的优化,建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法。当质粒标准品浓度为4.22×10^(2)~4.22×10^(9)copies/μL时,荧光定量标准曲线C;值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数可达0.9998。该方法对发热伴血小板减少综合征病毒最低检测限为4.22×10^(1)copies/μL,灵敏度是常规RT-PCR方法的100倍;该方法可特异性地检测出SFTSV,而对同科其他病毒检测结果均为阴性;批内、批间变异系数均小于2%。对采集的200只蜱进行检测,阳性检出率为3.5%,而常规RT-PCR方法的阳性检出率为2%。研究结果表明,本研究建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、灵敏性高、重复性好,为发热伴血小板减少综合征的检测提供了技术手段。

关键词：发热伴血小板减少综合征病毒 TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR

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MAVS^(-/-)细胞系的构建及其影响禽流感病毒复制的研究

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中国兽医科学 2022年第3期52卷 344-350页

作者：张子博田璐史鑫琪郭慧娟陈洪岩王金泉孟庆文新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建MAVS基因稳定敲除的细胞株,对流感病毒的增殖特性进行初步研究。设计、构建靶向MAVS基因sgRNA表达载体,与pCAG-Cas9-EGFP表达载体共转染MDCK细胞,经过流式细胞仪分选、PCR、基因测序筛选MAVS敲除... 详细信息

本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建MAVS基因稳定敲除的细胞株,对流感病毒的增殖特性进行初步研究。设计、构建靶向MAVS基因sgRNA表达载体,与pCAG-Cas9-EGFP表达载体共转染MDCK细胞,经过流式细胞仪分选、PCR、基因测序筛选MAVS敲除细胞系,CCK-8法检测细胞增殖速度;荧光定量PCR方法检测H9N2亚型禽流感病毒(AIV)感染后的TCID_(50)、病毒拷贝数以及IRF3、IFN-β、Mx1基因转录水平变化。结果显示,筛选出1株MAVS基因缺失44 bp的MDCK细胞(MAVS^(-/-)MDCK),其增殖速度与正常细胞相比未观察到显著差异;荧光定量PCR结果表明,TCID_(50)、病毒拷贝数差异最高可分别达到MDCK细胞的4.11倍和1.82倍;MAVS^(-/-)MDCK中IRF3、IFN-β和Mx1 m RNA表达水平显著降低,表明MAVS敲除后抑制了Ⅰ型干扰素信号通路。表明,本研究获得的MAVS^(-/-)MDCK能够促进禽流感病毒的复制,为提高疫苗生产效率和质量提供候选细胞株;该细胞株也为进一步研究MAVS参与抗病毒天然免疫应答奠定基础。

关键词： MAVS MDCK CRISPR/Cas9 H9N2亚型禽流感病毒

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现用重组AIV(H5+H7)三价灭活疫苗对近期H5和H7亚型AIV分离株的免疫效力研究

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中国预防兽医学报 2022年第5期44卷 514-520页

作者：刘艳晶麻琦潘舒心和新文王燕邓国华李雁冰施建忠包红梅毛胜刚胡井雷路通刘景利郭兴福田国彬曾显营陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/国家禽流感参考实验室/国家禽类实验动物资源库黑龙江哈尔滨150069 哈尔滨维科生物技术有限公司黑龙江哈尔滨150069

为评估现用重组禽流感病毒(AIV)(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1 Re-11株+Re-12株,H7N9 H7-Re3株)对我国近期H5和H7亚型AIV分离株的免疫预防效果,本研究对60只3周龄SPF鸡以肌肉注射途径接种该疫苗(0.3 mL/只),另外,60只鸡注射PBS作为阴性对照... 详细信息

为评估现用重组禽流感病毒(AIV)(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1 Re-11株+Re-12株,H7N9 H7-Re3株)对我国近期H5和H7亚型AIV分离株的免疫预防效果,本研究对60只3周龄SPF鸡以肌肉注射途径接种该疫苗(0.3 mL/只),另外,60只鸡注射PBS作为阴性对照组;免疫3周后分组,每10只免疫鸡和10只对照鸡为一组,共6组,采集各组鸡血清并检测针对6株AIV分离株(2020年~2021年分离的4株H5N6、1株H5N8和1株H7N9亚型AIV)的相应HI抗体效价。同时用上述6株AIV分离株作为抗原差异代表株,分别以105EID50的剂量进行攻毒试验,攻毒后5 d采集各组所有存活鸡的喉头和泄殖腔拭子样品,死亡鸡样品随时采集,进行排毒检测。HI抗体检测结果显示,免疫后3周,5组免疫鸡血清中针对H5亚型Re-11株和Re-12株抗原的HI抗体效价在8log2~8.6log2,针对4株H5N6 AIV分离株(DK/HuN/S11553/2020、 DK/GD/SC001/2020、 DK/FJ/S1424/20和GS/GZ/S1569/21)和1株H5N8 AIV分离株(WS/SX/4-1/20)的平均抗体效价分别为5.0log2、4.6 log2、4.3log2、3.8 log2、3.7log2;针对H7N9 AIV H7-Re3株的HI抗体效价为7.8log2,而针对H7N9 AIV分离株CK/YN/SD024/21的平均抗体效价为4.0log2;对照组鸡血清中针对疫苗株和所有分离株的HI抗体均为阴性。表明上述分离株与现用疫苗株存在较大抗原性差异。攻毒后14 d的观察期内,所有免疫组鸡均健活,且攻击3株H5N6和1株H7N9 AIV分离株的免疫组鸡均不排毒,但攻击1株H5N6 AIV分离株(GS/GZ/S1569/21)和H5N8 AIV分离株的免疫组分别有2/10和3/10只鸡的喉头拭子样品中检测到低水平的病毒;所有对照组鸡在攻毒后4 d内全部发病、死亡,且死亡对照组鸡的喉头和泄殖腔拭子样品均呈AIV阳性。以上结果表明,以近期野鸟或家禽中分离的H5和H7亚型AIV抗原变异株攻击各组鸡后,现用的H5+H7 AIV三价灭活疫苗可对免疫鸡提供无临床发病的保护,并可有效阻止分离株在鸡体内的复制。本研究为H5和H7三价疫苗的应用及更新提供了科学依据。

关键词：禽流感 H5+H7亚型三价灭活疫苗抗原变异株免疫效力

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STAT3在猪流行性腹泻病毒感染的作用及机制初步探索

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中国预防兽医学报 2021年

作者：杨丽君郭龙军张健许嘉宇张璐冯力陈洪岩王玉娥中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学团队/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室

为探究信号传导及转录激活因子3(STAT3)在猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染过程中的作用,本研究采用STAT3特异性si RNA处理HEK293和IPEC细胞,作用24 h后,通过荧光定量PCR和western blot检测结果显示其能够明显降低STAT3的m RNA水平和蛋白水平... 详细信息

为探究信号传导及转录激活因子3(STAT3)在猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染过程中的作用,本研究采用STAT3特异性si RNA处理HEK293和IPEC细胞,作用24 h后,通过荧光定量PCR和western blot检测结果显示其能够明显降低STAT3的m RNA水平和蛋白水平;在此条件下接种PEDV,通过荧光定量PCR检测,显示当STAT3的m RNA水平降低时能够显著抑制PEDV的RNA水平,western blot实验结果也显示抑制STAT3内源性表达能够显著抑制PEDV复制。为进一步研究STAT3的作用机制,采用STAT3特异性si RNA处理这两种细胞,24 h后经过荧光定量PCR检测发现敲低STAT3后,干扰素刺激基因Mx A、ISG15以及IFN-β,IFN-λ的m RNA水平均显著升高。本研究对于进一步阐明STAT3参与PEDV感染引发的IFN抗病毒反应提供了实验依据。

关键词： STAT3 PEDV IFN

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