检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2008年第2期30卷 109-112页

作者：张艳萍刘长军施维松秦运安张晓巍李晶梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

吉林省某地区鸡马立克氏病(MD)疫苗免疫鸡群暴发MD,从发病鸡羽髓中分离到一株适应鸡胚成纤维细胞生长的马立克氏病毒(MDV)。该毒株感染无特定病原体(SPF)鸡可引起典型的MD临床症状;对非免疫鸡和火鸡疱疹病毒(HVT)疫苗免疫鸡的致病率分别... 详细信息

吉林省某地区鸡马立克氏病(MD)疫苗免疫鸡群暴发MD,从发病鸡羽髓中分离到一株适应鸡胚成纤维细胞生长的马立克氏病毒(MDV)。该毒株感染无特定病原体(SPF)鸡可引起典型的MD临床症状;对非免疫鸡和火鸡疱疹病毒(HVT)疫苗免疫鸡的致病率分别为76%和72%,二者无显著差异,表明HVT疫苗对该毒株不能提供有效保护。通过对该毒株病毒基因组中132bp重复序列、meq基因的核苷酸及推导的氨基酸序列分析,发现该毒株的132bp重复序列的拷贝数、meq基因的变异符合高毒力MDV毒株的特点。

关键词：马立克氏病毒分离和鉴定 meq基因 132 bp重复序列

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实时定量PCR对猪圆环病毒2型感染猪体内病毒分布规律的研究

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中国预防兽医学报 2008年第12期30卷 924-928页

作者：危艳武刘长明袁婧黄立平张朝霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

根据发表的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因序列设计了一对特异引物,并以克隆重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green I嵌合荧光染料建立了一种用于检测PCV2的实时定量PCR方法。该方法在107～101范围内具有良好的线性关系,相关系数为R2=0.9... 详细信息

根据发表的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因序列设计了一对特异引物,并以克隆重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green I嵌合荧光染料建立了一种用于检测PCV2的实时定量PCR方法。该方法在107～101范围内具有良好的线性关系,相关系数为R2=0.997,扩增效率为E=0.920;对质粒标准品检测下限值为8.2拷贝/μL,检测变异系数低于2.0%。该方法与常规PCR及过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)比较,其敏感性提高103倍以上。采用该法对PCV2人工感染猪的心、肝、脾、肺、肾、腹股沟淋巴结等组织中病毒核酸载量检测结果表明,在多种脏器中均可检测到病毒,其中腹股沟淋巴结、扁桃体和脾脏中病毒含量较高(为3.4×109拷贝/g～1.7×1010拷贝/g),这表明病毒主要在免疫器官增殖,导致淋巴细胞耗损。对来自国内不同地区的28份临床发病猪病料进行病毒DNA定量检测,有半数以上病料的病毒载量达到109-10拷贝/g。实验表明,实时定量PCR可用于PCV2核酸定量检测,为该病毒体内外定量检测提供了一种技术手段。

关键词：猪圆环病毒2型实时定量PCR 病毒体内分布规律

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致病性猪伪狂犬病病毒PRV-JF株的分离与鉴定

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中国预防兽医学报 2008年第3期30卷 212-215页

作者：张超范刘长明危艳武刘霓虹中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

从临床疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑组织病料中,经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒感染,采用无PCV1污染的猪肾细胞系(PK-15)分离培养,经蚀斑克隆纯化,培育1株细胞培养适应毒,命名为PRV-JF株。该分离株经细胞培养传代,... 详细信息

从临床疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑组织病料中,经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒感染,采用无PCV1污染的猪肾细胞系(PK-15)分离培养,经蚀斑克隆纯化,培育1株细胞培养适应毒,命名为PRV-JF株。该分离株经细胞培养传代,能够产生典型的细胞病变,病毒滴度随代次显著增加,第24代毒价达108.5 TCID50/mL。免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测病毒抗原分布在细胞核及细胞质内。病毒感染细胞可被已知PRV阳性血清中和。电镜负染观察到病毒粒子呈椭圆或圆形外观,无囊膜的病毒粒子直径约110 nm～150 nm,有囊膜的成熟病毒粒子直径约150 nm～180 nm。PCR鉴定该毒株含有gE基因,其序列与GenBank登录的7株PRV同源性为97.7%～100%。用不同剂量病毒培养物接种家兔于24 h～72 h内全部死亡。研究表明,PRV-JF分离株对易感动物具有高致病性,为进一步开展该病毒流行病学、致病机理、疫苗免疫与诊断研究奠定了基础。

关键词：猪伪狂犬病病毒强毒株分离鉴定

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禽呼肠孤病毒99G株σB编码基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

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中国兽医科学 2008年第5期38卷 407-411页

作者：张云郝雪耿宏伟郭东春中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

采用RTPCR方法扩增禽呼肠孤病毒（ARV）99G株σB编码基因，序列分析表明，99G株σB编码基因与其他禽呼肠孤病毒的同源性为90％～99％，而与我国番鸭呼肠孤病毒S12株的同源性仅有60％；用BamHⅠ和XhoⅠ酶将σB编码基因切下并克隆到表达载... 详细信息

采用RTPCR方法扩增禽呼肠孤病毒（ARV）99G株σB编码基因，序列分析表明，99G株σB编码基因与其他禽呼肠孤病毒的同源性为90％～99％，而与我国番鸭呼肠孤病毒S12株的同源性仅有60％；用BamHⅠ和XhoⅠ酶将σB编码基因切下并克隆到表达载体pGEX-6p-1中，构建了重组表达质粒pGEX-σB；鉴定后转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，经IPTG诱导，σB基因在大肠杆菌中得到了高效表达，表达的融合蛋白占总蛋白的41．46％，融合蛋白的分子质量为66ku，主要以包涵体形式存在；Western-blot结果显示，该融合蛋白能与抗ARV阳性血清发生特异性反应，表明重组蛋白具有良好的反应原性，可用于禽呼肠孤病毒病诊断试剂盒和基因工程疫苗的研制。

关键词：禽呼肠孤病毒 σB基因原核表达

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猪圆环病毒1型感染性克隆的构建与病毒拯救

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中国预防兽医学报 2008年第3期30卷 161-165页

作者：刘长明危艳武陆月华张朝霞袁婧黄立平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

用PCR法扩增猪圆环病毒1型(PCV1)全长基因组,将2个基因组顺式连接插入到pUC19质粒载体中构建感染性分子克隆。通过引物设计替换碱基,在病毒基因组内插入SalⅠ酶切位点作为分子靶标,拯救出带有分子标记的克隆病毒,命名为recPCV1/G株。通... 详细信息

用PCR法扩增猪圆环病毒1型(PCV1)全长基因组,将2个基因组顺式连接插入到pUC19质粒载体中构建感染性分子克隆。通过引物设计替换碱基,在病毒基因组内插入SalⅠ酶切位点作为分子靶标,拯救出带有分子标记的克隆病毒,命名为recPCV1/G株。通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)在病毒感染细胞中检出病毒抗原,其抗原性仅与PCV1/Cap蛋白单价特异性抗体发生反应,而与抗PCV2/Cap蛋白抗体无交叉。克隆毒株基因组内插入一个SalⅠ酶切位点,可用PCR结合限制性片段长度多态性分析法(PCR-RFLP)与亲本病毒相鉴别。该毒株经细胞连续传10代,体外培养增殖性能稳定,病毒滴度达104.8 TCID50/mL。构建的PCV1感染性克隆,为今后开展该病毒的起源与演化、遗传变异规律、分子鉴别诊断等研究奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒1型感染性克隆病毒拯救

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基于重组E2蛋白的猪瘟病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

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中国兽医科学 2008年第4期38卷 315-319页

作者：孙元夏照和梁冰冰彭伍平仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

根据昆虫细胞密码子偏嗜性,对猪瘟病毒E2基因进行密码子优化,并利用昆虫杆状病毒表达系统进行了表达,表达水平约为野生型E2基因的3倍。将表达的重组E2蛋白纯化后作为ELISA包被抗原,建立了一种基于重组E2蛋白的间接ELISA方法,并对此方法... 详细信息

根据昆虫细胞密码子偏嗜性,对猪瘟病毒E2基因进行密码子优化,并利用昆虫杆状病毒表达系统进行了表达,表达水平约为野生型E2基因的3倍。将表达的重组E2蛋白纯化后作为ELISA包被抗原,建立了一种基于重组E2蛋白的间接ELISA方法,并对此方法的反应条件进行了优化。确定的ELISA最佳条件为:抗原包被浓度为2μg/mL,封闭液为10 g/L聚乙烯醇PBS溶液,被检血清1∶160稀释,辣根过氧化物酶标记的兔抗猪IgG(二抗)1∶5 000稀释。确定的阴性血清临界D450 nm值为0.30,阳性血清临界D450 nm值为0.35。将该ELISA方法与IDEXX公司生产的猪瘟病毒抗体检测试剂盒做相关比较,结果符合率为82.3%。表明,该方法可以用于猪瘟病毒抗体的检测。

关键词：猪瘟病毒 E2蛋白密码子优化杆状病毒表达系统间接ELISA

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H5N1亚型高致病性禽流感病毒NP基因在昆虫细胞中的表达及其表达产物的生物学活性

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中国兽医科学 2008年第5期38卷 380-385页

作者：万春和刘明刘春国杨涛刘大飞齐金龙陈浩杜金铃李洪涛中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

根据GenBank上登录的H5N1亚型高致病性禽流感病毒(HPAIV)核蛋白(NP)基因序列设计引物,通过PCR扩增出A/Goose/HLJ/QFY/04(H5N1)毒株的NP基因片段,将其克隆到pFastBacGP67B杆状病毒载体上,将筛选的阳性重组转座载体pFastBacGP67B-NP转化... 详细信息

根据GenBank上登录的H5N1亚型高致病性禽流感病毒(HPAIV)核蛋白(NP)基因序列设计引物,通过PCR扩增出A/Goose/HLJ/QFY/04(H5N1)毒株的NP基因片段,将其克隆到pFastBacGP67B杆状病毒载体上,将筛选的阳性重组转座载体pFastBacGP67B-NP转化至含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选和PCR鉴定,构建了杆状病毒表达载体,获得了重组转座子(rBacmid-NP),在脂质体介导下转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒(rBv-NP)。SDS-PAGE分析、Western-blotting检测、免疫组化分析和ELISA试验结果表明,分子质量约为54 ku的重组核蛋白得到了高效表达,该表达蛋白具有良好的生物学活性。

关键词：禽流感病毒核蛋白基因昆虫细胞杆状病毒表达

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SYBR Green Ⅰ荧光RT—PCR检测新城疫病毒的研究

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黑龙江畜牧兽医 2008年第11期 61-62页

作者：司昌德秦红刚孟庆文闫丽辉刘加森韩凌霞姜骞曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心黑龙江哈尔滨150001

新城疫是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的一种高度接触性、急性、败血性禽类传染病.NDV为副黏病毒科副黏病毒亚科禽腮腺炎病毒属单股负链RNA病毒.近年来,新城疫呈现散发性和非典型性流行.在临床上,非典型的新城疫在呼... 详细信息

新城疫是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的一种高度接触性、急性、败血性禽类传染病.NDV为副黏病毒科副黏病毒亚科禽腮腺炎病毒属单股负链RNA病毒.近年来,新城疫呈现散发性和非典型性流行.在临床上,非典型的新城疫在呼吸道症状上和禽流感(AI)、鸡传染性支气管炎(IB)、鸡传染性喉气管炎(ILT)极为相似,因此给本病的确诊增加了难度,故开发出快速、灵敏、特异的诊断方法显得极为重要.

关键词：新城疫病毒 Green PCR检测 SYBR 鸡传染性支气管炎鸡传染性喉气管炎负链RNA病毒 RT

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果子狸源呼肠孤病毒的分离鉴定

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病毒学报 2008年第5期24卷 376-382页

作者：邵昱昊韩宗玺陈露菲孔宪刚刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省疾病预防控制中心哈尔滨150030

在广东省采集的果子狸样品共192份,处理后接种Vero-E6细胞,从中分离到1株病毒。该病毒在Vero-E6细胞上盲传至第4代开始出现细胞病变,表现为细胞内颗粒增多,细胞收缩、变圆,最后细胞从瓶壁脱落。经电镜观察发现,病毒粒子无囊膜,有双层衣... 详细信息

在广东省采集的果子狸样品共192份,处理后接种Vero-E6细胞,从中分离到1株病毒。该病毒在Vero-E6细胞上盲传至第4代开始出现细胞病变,表现为细胞内颗粒增多,细胞收缩、变圆,最后细胞从瓶壁脱落。经电镜观察发现,病毒粒子无囊膜,有双层衣壳,呈正二十面体对称,具有呼肠孤病毒的形态特征,将病毒命名为MaskedPal m Civet/China/2004(MPC/04)。红细胞凝集试验表明该病毒能凝集健康人O型血红细胞,不能凝集SPF鸡、实验用普通级牛、大鼠和豚鼠的红细胞,这与哺乳动物呼肠孤病毒血清1型的红细胞凝集谱相符。理化特性试验表明该病毒对氯仿有抵抗力;能耐受pH3.0的酸性环境;50℃水浴1h病毒未丧失感染能力;1mol/L MgCl2能提高病毒对热的抵抗力。为了进一步从分子水平上证实该病毒是呼肠孤病毒,用哺乳动物呼肠孤病毒特异性引物进行反转录-聚合酶链式反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR),扩增得到了预期大小的片段。测序结果经NCBI BLAST比较,选取同源性较高者进行序列同源性分析,发现该片段与哺乳动物呼肠孤病毒血清1型参考毒株核苷酸同源性最高。以上结果证明该病毒为呼肠孤病毒科的成员。

关键词：果子狸呼肠孤病毒分离鉴定

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黄芪多糖对肉仔鸡免疫功能的影响

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中国预防兽医学报 2008年第12期30卷 978-980页

作者：司昌德闵亚宏中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

本实验研究了饲料中添加0.1%或0.3%黄芪多糖(APS)对肉仔鸡生产性能和免疫功能的作用。结果表明,饲料中添加APS对肉仔鸡增重无显著作用;但能够显著提高肉仔鸡C3,C4和IgM含量。另外,黄芪多糖能够显著提高接种新城疫(ND)疫苗后的肉仔鸡血清... 详细信息

本实验研究了饲料中添加0.1%或0.3%黄芪多糖(APS)对肉仔鸡生产性能和免疫功能的作用。结果表明,饲料中添加APS对肉仔鸡增重无显著作用;但能够显著提高肉仔鸡C3,C4和IgM含量。另外,黄芪多糖能够显著提高接种新城疫(ND)疫苗后的肉仔鸡血清抗ND抗体水平与血清淋巴细胞转化率。本研究结果表明,黄芪多糖具有增强肉仔鸡免疫功能的作用。

关键词：黄芪多糖肉仔鸡生产性能免疫功能

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