检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医杂志 2007年第5期43卷 5-7页

作者：李冬梅王秀荣董小波路义鑫宋铭忻东北农业大学动物医学学院寄生虫教研室黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本文利用GenBank中发表的(Trichinella spiralis)18S rRNA序列为参考设计引物,对分离自黑龙江省猫体内的旋毛虫及本地毛形线虫(Trichinella nativa)的18S rRNA基因进行扩增,克隆后测序,序列分析结果表明:猫旋毛虫与旋毛形线虫基因同源... 详细信息

本文利用GenBank中发表的(Trichinella spiralis)18S rRNA序列为参考设计引物,对分离自黑龙江省猫体内的旋毛虫及本地毛形线虫(Trichinella nativa)的18S rRNA基因进行扩增,克隆后测序,序列分析结果表明:猫旋毛虫与旋毛形线虫基因同源性更高。

关键词：猫旋毛虫隔离种 18S rRNA

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H7亚型禽流感病毒HA基因在杆状病毒系统中的表达

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中国预防兽医学报 2007年第4期29卷 268-271页

作者：郝婧邓国华姜永萍曲站红王桂芹郝永清陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018

利用PCR反应,以特异性引物扩增禽流感病毒去除信号肽的H7亚型HA密码子优化基因,克隆到杆状病毒转移载体pFastBac-HTB中,转座DH10感受态细胞,通过蓝白斑筛选、PCR鉴定获得阳性克隆,然后提取基因组Bacmid,转染Sf9昆虫细胞,得到含H7亚型流... 详细信息

利用PCR反应,以特异性引物扩增禽流感病毒去除信号肽的H7亚型HA密码子优化基因,克隆到杆状病毒转移载体pFastBac-HTB中,转座DH10感受态细胞,通过蓝白斑筛选、PCR鉴定获得阳性克隆,然后提取基因组Bacmid,转染Sf9昆虫细胞,得到含H7亚型流感病毒HA基因的重组杆状病毒opti-H7HA-Bac。重组杆状病毒接种Sf9昆虫细胞,待绝大部分细胞产生细胞病变后收获细胞,细胞裂解产物经血凝试验、SDS-PAGE及Western blot分析证实。密码子优化的H7 HA基因在重组杆状病毒opti-H7HA-Bac感染Sf9细胞后获得高效表达,且具有良好的蛋白活性及特异免疫反应原性。

关键词：禽流感 H7亚型 HA基因重组杆状病毒

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鸡马立克病病毒814株gE、gI、gp82基因的克隆及序列分析

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动物医学进展 2007年第3期28卷 26-30页

作者：张艳萍刘长军秦运安张晓巍张颖中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

从感染鸡马立克病病毒血清Ⅰ型(MDVⅠ)814株的鸡胚成纤维细胞(CEF)中提取病毒总DNA,以其为模板,根据GenBank中MDVⅠGA株基因组gE、gI、gp82基因序列,设计并合成3对特异性引物,用PCR方法分别扩增了814株的gE、gI、gp82基因,并将扩增的基... 详细信息

从感染鸡马立克病病毒血清Ⅰ型(MDVⅠ)814株的鸡胚成纤维细胞(CEF)中提取病毒总DNA,以其为模板,根据GenBank中MDVⅠGA株基因组gE、gI、gp82基因序列,设计并合成3对特异性引物,用PCR方法分别扩增了814株的gE、gI、gp82基因,并将扩增的基因片段克隆到pMD18-T载体中,进行序列测定,应用DNA Star软件分析814株gE、gI、gp82基因核苷酸序列,并与已发表的MDVⅠ毒株序列进行了比较。结果表明,不同MDVⅠ毒株的gE、gI、gp82基因同源性很高,814株与已发表的MDVⅠ毒株的gE、gI、gp82基因核苷酸序列同源性分别在99.4%、98.9%和99.6%以上。

关键词：鸡马立克病病毒基因序列分析

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H1亚型猪流感病毒血凝素基因在昆虫细胞中的表达及生物活性鉴定

H1亚型猪流感病毒血凝素基因在昆虫细胞中的表达及生物活性鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：万春和刘明刘春国张云张晓霁杨涛郭东春中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

将H1亚型猪流感病毒的血凝素(HA)基因克隆到pFastBacGP67A载体上,经酶切鉴定及测序筛选出阳性重组质粒后,转化DH10Bac感受态细胞与杆状病毒转移载体(bacmid)进行转座,通过蓝白斑筛选获得重组杆状病毒穿梭载体,在脂质体介导下转染sf9昆... 详细信息

将H1亚型猪流感病毒的血凝素(HA)基因克隆到pFastBacGP67A载体上,经酶切鉴定及测序筛选出阳性重组质粒后,转化DH10Bac感受态细胞与杆状病毒转移载体(bacmid)进行转座,通过蓝白斑筛选获得重组杆状病毒穿梭载体,在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,经过三轮蚀斑纯化,获得重组杆状病毒rHA,再感染细胞,超声收获HA蛋白。通过血凝和血凝抑制、免疫印迹法、ELISA分析表明该蛋白得到表达,且具有与天然蛋白相似的生物活性,为研制猪流感病毒基因工程亚单位疫苗奠定基础,也可通过所表达的蛋白来研制猪流感ELISA检测试剂盒来做猪流感血清流行病学调查,为防控流感大流行提供参考。

关键词：猪流感病毒血凝素基因杆状病毒表达生物活性昆虫细胞

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本地毛形线虫49 Ku ES蛋白结构基因的分子克隆及原核表达

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中国预防兽医学报 2007年第7期29卷 510-514页

作者：郑宝亮王秀荣路义鑫李冬梅闫清波宋铭忻郑州牧业工程高等专科学校生物工程系河南郑州450011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院预防医学系寄生虫学教研室黑龙江哈尔滨150030

提取Trichinella nativa(***)肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码*** 49 Ku ES蛋白的结构基因。基因克隆后测序,序列测定结果表明:目的基因TNPG长度为951 bp,核苷酸序列同已发表的Trichinella spiralis(***)相应的序列P49同源性为9... 详细信息

提取Trichinella nativa(***)肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码*** 49 Ku ES蛋白的结构基因。基因克隆后测序,序列测定结果表明:目的基因TNPG长度为951 bp,核苷酸序列同已发表的Trichinella spiralis(***)相应的序列P49同源性为97.68%,所推导的氨基酸序列同源性为95.24%。将目的基因TNPG插入到原核表达载体pET-30a的BamHⅠ酶切位点处,并转化到感受态表达菌中进行诱导表达。结果显示TNPG在原核表达菌BL-21中获得了高效表达,表达产物为40.8 Ku的融合蛋白,表达量达到菌体总蛋白的22.8%。通过Western blot分析,表达产物可以被小鼠***和***阳性血清以及它们的中国地理株的小鼠血清特异性识别。

关键词：旋毛虫 nativa种旋毛虫 spiralis种 49 Ku ES蛋白基因序列 Westem blot分析

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A型流感病毒M2蛋白研究进展

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动物医学进展 2007年第7期28卷 56-60页

作者：万春和刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

M2蛋白是A型流感病毒所特有的一种结构保守的非糖基化的跨膜蛋白,主要在病毒脱壳时酸化病毒粒子的内部环境,在表面血凝素糖蛋白合成过程中作为质子通道调节高尔基体跨膜转移通道的pH。其核苷酸序列高度保守,几乎不发生变异。其25位~43... 详细信息

M2蛋白是A型流感病毒所特有的一种结构保守的非糖基化的跨膜蛋白,主要在病毒脱壳时酸化病毒粒子的内部环境,在表面血凝素糖蛋白合成过程中作为质子通道调节高尔基体跨膜转移通道的pH。其核苷酸序列高度保守,几乎不发生变异。其25位~43位氨基酸多肽是金刚烷胺类抗流感病毒药物的作用靶位,氨基酸极小变异都可能导致流感病毒抗药性的产生。M2蛋白胞外区域的氨基酸残基多肽（M2e）的特异性抗体可以在感染流感病毒的动物血清中检测出来,将M2e与相关佐剂联合使用可极大的提高机体对流感病毒的免疫力,在病毒感染中起重要作用,是一种潜在的交叉保护性抗原,常被用来探索具有广谱性和持久性的流感＂通用疫苗＂。

关键词： A型流感病毒 M2蛋白疫苗

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR鉴别诊断方法的建立

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR鉴别诊断方法的建立

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第三次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：郝晓芳周艳君田志军韦天超安同庆彭金美华荣虹童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001

2006年5月以来,我国部分猪场爆发一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染性疾病,经病原分离及分子流行病学分析证明是由一种带有nsp2部分缺失的对猪呈高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的。本实验参考GenBank发表的以... 详细信息

2006年5月以来,我国部分猪场爆发一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染性疾病,经病原分离及分子流行病学分析证明是由一种带有nsp2部分缺失的对猪呈高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的。本实验参考GenBank发表的以及本实验室分离鉴定PRRSV的nsp2基因序列,在紧靠上述nsp2缺失区的两端的保守区设计并合成了一对引物,建立了一种PRRSV的RP-PCR检测方法。该方法扩增高致病性PRRSV基因组获得230bp的片段,扩增经典型PRRSV时则获得320bp的片段,通过RT-PCR产物大小可将二者区分开来。通过大量临床病料的检测,配合PCR产物测序验证,结果表明该方法简便、快速、特异,可以鉴别高致病性PRRSV,为进一步的PRRS流行病学研究提供了重要的技术手段。

关键词：高致病性传染病猪繁殖与呼吸综合征病毒病原分离基因缺失 RT-PCR检测鉴别诊断

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR鉴别诊断方法的建立

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR鉴别诊断方法的建立

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：郝晓芳周艳君田志军韦天超安同庆彭金美华荣虹童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001

2006年5月以来，我国部分猪场爆发一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染性疾病，经病原分离及分子流行病学分析证明是由一种带有nsp2部分缺失的对猪呈高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的。本实验参考GenBank发表的... 详细信息

2006年5月以来，我国部分猪场爆发一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染性疾病，经病原分离及分子流行病学分析证明是由一种带有nsp2部分缺失的对猪呈高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的。本实验参考GenBank发表的以及本实验室分离鉴定的PRRSV的nsp2基因序列，在紧靠上述nsp2缺失区的两端的保守区设计并合成了一对引物，建立了一种PRRSV的RT-PCR检测方法。该方法扩增高致病性PRRSV基因组获得230bp的片段，扩增经典型PRRSV时则获得320bp的片段，通过RT-PCR产物大小可将二者区分开来。通过大量临床病料的检测，配合PCR产物测序验证，结果表明该方法简便、快速、特异，可以鉴别高致病性PRRSV，为进一步的PRRS流行病学研究提供了重要的技术手段。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒基因缺失鉴别诊断

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IBV安徽分离株AH1-99 M基因克隆及序列分析

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动物医学进展 2007年第5期28卷 36-38页

作者：何长生魏建忠刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036

利用RT-PCR技术成功扩增出IBV分离株AH1-99M基因全长cDNA，并将其克隆到pMD18-T载体上，获得该分离株M基因的重组质粒。序列分析结果表明，该分离株M基因全长共678个核苷酸，编码225个氨基酸；同其他IBV的核苷酸序列的同源性为87．2％... 详细信息

利用RT-PCR技术成功扩增出IBV分离株AH1-99M基因全长cDNA，并将其克隆到pMD18-T载体上，获得该分离株M基因的重组质粒。序列分析结果表明，该分离株M基因全长共678个核苷酸，编码225个氨基酸；同其他IBV的核苷酸序列的同源性为87．2％～92．5％，氨基酸的同源性为89．8％～95．1％；在IBVM基因核苷酸进化关系树中，AH1-99株M基因与H120、M41、Beaudette以及多数国内分离株亲源关系较近。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 AH1-99株 M基因遗传变异分析

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流行性乙型脑炎病毒E蛋白结构域Ⅲ的抗原表位鉴定与功能研究

流行性乙型脑炎病毒E蛋白结构域Ⅲ的抗原表位鉴定与功能研究

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第三次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：闫丽萍华荣虹亓文宝童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨 150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001 华南农业大学兽医学院广东广州510642

流行性乙型脑炎病毒(JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒.E蛋白是该病毒的主要结构蛋白.E蛋白在介导病毒与宿主细胞的吸附,融合;决定病毒的血凝活性、细胞嗜性以及决定病毒毒力和诱导宿主产生保护性免疫反应中起重要作用.E蛋白结构域... 详细信息

流行性乙型脑炎病毒(JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒.E蛋白是该病毒的主要结构蛋白.E蛋白在介导病毒与宿主细胞的吸附,融合;决定病毒的血凝活性、细胞嗜性以及决定病毒毒力和诱导宿主产生保护性免疫反应中起重要作用.E蛋白结构域Ⅲ(EⅢ)是诱导中和抗体的重要区域.为确定乙型脑炎EⅢ的抗原表位,本实验首先克隆了JEV疫苗株SA14-14-2的EⅢ区域,并用pGEX-6P-1载体进行融合表达,免疫印迹分析表明,该融合蛋白能被抗JEV血清识别.为了进一步对该结构域进行抗原表位作图,设计了14个覆盖该区域且部分重叠的短肽.将各短肽与GST进行融合表达与纯化.短肽融合蛋白经JEV阳性血清免疫印迹和ELISA免疫反应性扫描分析,结果鉴定出E39(<'305>TEKFSFAKNPVDTGHG<'320>)、E45-1(<'355>VTVNPFVATSSA<'366>)、E48-1(<'377>PFGDSYIV<'384>)和E49(<'385>VGRGDKQINHHWHKAG<'400>)四个线性抗原表位.分别将4个抗原表位融合蛋白免疫小鼠,制备各抗原表位单因子血清,结果经体外病毒中和试验表明E39为具有病毒中和活性的抗原表位.本试验结果为进一步分析JEV E蛋白结构与功能以及诊断试剂和表位疫苗的研究提供了重要工作基础.

关键词：流行性乙型脑炎病毒 E蛋白结构域Ⅲ 抗原表位鉴定免疫印迹表位疫苗

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