检索结果-内蒙古大学图书馆

2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：闫丽萍华荣虹亓文宝童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001 华南农业大学兽医学院广东广州510642

流行性乙型脑炎是一种由蚊虫传播的病毒性人兽共患病，乙型脑炎病毒是该病毒的病原E蛋白是乙型脑炎病毒的主要结构蛋白，它在病毒的吸附、融合、血凝、细胞趋向性、病毒毒力和诱导保护性免疫反应中起重要作用。而E蛋白结构域Ⅲ是诱导中... 详细信息

流行性乙型脑炎是一种由蚊虫传播的病毒性人兽共患病，乙型脑炎病毒是该病毒的病原E蛋白是乙型脑炎病毒的主要结构蛋白，它在病毒的吸附、融合、血凝、细胞趋向性、病毒毒力和诱导保护性免疫反应中起重要作用。而E蛋白结构域Ⅲ是诱导中和抗体的重要区域。为了分析鉴定乙型脑炎E蛋白结构域Ⅲ的抗原表位，首先克隆并用pGEX-6P-1载体融合表达了乙型脑炎病毒疫苗株sA14-14-2的该区域，通过免疫印迹分析表明，该区域融合蛋白能被JEV阳性血清所识别。为了对这一区域进行抗原表位作图，进一步设计了一套14个覆盖该区域的部分重叠短肽，并进行了GST融合表达，用JEV阳性血清对14个融合蛋白进行免疫印迹和ELISA免疫反应性分析，鉴定出4个线性抗原表位E39(305TEKFSFAKNPVDTGHG320)、FA5-1(355VTVNPFVATSSA 366)、E48-l(377PFGDSYIV384)、E49(385VGRGDKQINHHWHKAG400)。本试验结果对进一步分析乙脑病毒E蛋白结构与功能以及诊断试剂和表位疫苗的研究有重要意义。

关键词：乙型脑炎病毒抗原表位人兽共患病免疫反应

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4株不同亚型流感病毒NP基因的原核表达

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动物医学进展 2007年第12期28卷 12-18页

作者：刘大飞杨涛刘明刘春国何利昆桑学波刘大程中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 辽宁省动物疫病预防控制中心辽宁沈阳110161 黑龙江农垦总局畜牧兽医总站哈尔滨分站黑龙江哈尔滨150038 莱阳市城厢兽医站山东莱阳265200

为了进一步研究A型流感病毒核蛋白功能及在诊断中的应用,采用RT-PCR技术分别扩增H1N1、H3N2、H5N1、H9N2等4株不同亚型流感病毒的NP基因,分别将其克隆到原核表达载体pET30(a)上,在大肠埃希菌中进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blot检... 详细信息

为了进一步研究A型流感病毒核蛋白功能及在诊断中的应用,采用RT-PCR技术分别扩增H1N1、H3N2、H5N1、H9N2等4株不同亚型流感病毒的NP基因,分别将其克隆到原核表达载体pET30(a)上,在大肠埃希菌中进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blot检测结果表明,H1N1亚型流感病毒NP蛋白得到表达,并且能分别与H1N1和H5N1亚型流感病毒的鼠高免血清发生特异性反应,具有良好的反应活性;而H3N2、H5N1、H9N2亚型流感病毒的重组NP蛋白未获得表达。本研究结果表明,不同毒株的NP蛋白在大肠埃希菌中的表达具有一定差异性,为把NP蛋白作为诊断抗原的开发、ELISA诊断方法的建立以及蛋白功能的研究奠定了基础。

关键词：流感病毒 NP基因原核表达

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H5N1亚型AIV NS1基因在大肠杆菌中的表达

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畜牧与饲料科学 2007年第4期28卷 21-23页

作者：刘畅焦培荣刘威龙侯勇跃陈化兰内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农牧业科学院动物医学研究所内蒙古呼和浩特010030

根据已测得的H5N1亚型禽流感病毒的NS基因序列,设计并合成一对特异性引物NS1U/NS1L,利用RT-PCR方法扩增出该毒株的NS1基因。将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,通过酶切分析及序列测定,鉴定出了NS1基因片段的... 详细信息

根据已测得的H5N1亚型禽流感病毒的NS基因序列,设计并合成一对特异性引物NS1U/NS1L,利用RT-PCR方法扩增出该毒株的NS1基因。将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,通过酶切分析及序列测定,鉴定出了NS1基因片段的阳性重组子。转化BL21大肠杆菌感受态细胞后,经IPTG诱导和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,成功表达出大小约45.0kD的NS1融合蛋白,表达产物主要存在于包涵体中。用West-ern-Blotting证实重组融合蛋白可以特异性地被标准阳性血清所识别。

关键词： H5N1亚型禽流感病毒非结构蛋白克隆表达

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山羊IL-2基因的克隆、表达及其多克隆抗血清的制备

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中国比较医学杂志 2007年第8期17卷 I0060-I0060页

作者：海岗刘胜旺陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

应用RT-PCR方法从山羊外周血淋巴细胞中克隆了山羊白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)基因并测序,将编码山羊白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)成熟蛋白的基因亚克隆至原核表达载体pET30a(+)上,构建重组质粒并进行确证性测定。然后将重... 详细信息

应用RT-PCR方法从山羊外周血淋巴细胞中克隆了山羊白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)基因并测序,将编码山羊白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)成熟蛋白的基因亚克隆至原核表达载体pET30a(+)上,构建重组质粒并进行确证性测定。然后将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG于37℃诱导培养。表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在。SDS-PAGE分析显示,表达的山羊IL-2融合蛋白分子量约为18kD。包涵体被6mol/L盐酸胍裂解后,通过ProBondTM蛋白纯化试剂盒纯化。用所获得的重组山羊IL-2纯化产物经3次肌内注射新西兰白兔,制备了兔抗山羊IL-2多克隆血清,并用Western blot进行了证明。本次试验成功地表达、纯化了山羊IL-2融合蛋白,并制备了抗山羊IL-2多克隆抗血清,为下一阶段关于山羊IL-2重组蛋白生物学特性及其应用的研究打下了坚实的基础。

关键词：山羊IL-2 融合蛋白原核表达抗血清

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PCV2感染性分子克隆的制备及体内外感染性试验

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中国预防兽医学报 2006年第3期28卷 241-247,270页

作者：韩凌霞刘建华陈艳仇华吉王云峰童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

将猪圆环病毒2型(Type2porcinecircovirus,PCV2)JXL株cDNA插入到载体pMD18-T中,获得的pMDT-PCV转染猪肾细胞PK15细胞系,盲传4代后,利用PCV2阳性猪血清进行间接免疫荧光抗体试验(IFA),能检测到特异性荧光。将pMDT-PCV质粒DNA经腹股沟淋... 详细信息

将猪圆环病毒2型(Type2porcinecircovirus,PCV2)JXL株cDNA插入到载体pMD18-T中,获得的pMDT-PCV转染猪肾细胞PK15细胞系,盲传4代后,利用PCV2阳性猪血清进行间接免疫荧光抗体试验(IFA),能检测到特异性荧光。将pMDT-PCV质粒DNA经腹股沟淋巴结注射40日龄仔猪2头,分别接种2、3次,接种剂量500μg/次,首次注射35d心脏放血致死。在体内感染性试验期间,动物未出现明显临床症状。试验结束,病理切片结果显示,不同淋巴组织中分别存在淋巴细胞缺失或增多的现象;肾小球、扁桃体、空肠淋巴结和股前淋巴结等冰冻组织切片中存在大量PCV2病毒抗原;血清中PCV2特异性的ELISA抗体效价达12∶560,IFA效价为11∶280;通过聚合酶链式反应(PCR)可以分别从体外感染PK15细胞和体内感染动物及同圈饲养的空白对照猪的淋巴组织中扩增到病毒特异性基因片段。本研究证明含有单拷贝PCV2的重组质粒pMDT-PCV在体内、外均具有感染性,能衍生出病毒,并产生符合自然感染PCV2的大体病变和组织病理学变化,并激发较强的体液免疫应答。

关键词：猪圆环病毒2 病毒分子克隆感染性抗体试验

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中国2000-2004年鸡传染性支气管炎病毒地方分离株核蛋白基因的遗传变异分析

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中国病毒学 2006年第6期21卷 575-580页

作者：张庆霞韩宗玺邵昱昊陈建飞荣骏弓刘胜旺孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

对2000-2004年从中国9个省市分离到的13株IBV的核蛋白基因片段进行序列测定及分析的结果表明,13株IBV分离株核蛋白基因均含有一个长1230bp的ORF,但存在基因突变现象。与GenBank中的42株参考毒株核蛋白基因序列进行比较和分析,系统进化... 详细信息

对2000-2004年从中国9个省市分离到的13株IBV的核蛋白基因片段进行序列测定及分析的结果表明,13株IBV分离株核蛋白基因均含有一个长1230bp的ORF,但存在基因突变现象。与GenBank中的42株参考毒株核蛋白基因序列进行比较和分析,系统进化关系显示55株IBV毒株分属于9个群。第Ⅰ-Ⅲ群主要包括美国、日本、荷兰等国家以及中国的部分IBV分离株和疫苗株。其中本研究中的CK/CH/LHN/00I可能为一株分离的疫苗毒,CK/CH/LSD/03I、CK/CH/LDL/01I可能为重组毒。而中国近十年来分离的IBV毒株主要分布在第Ⅵ-Ⅷ群中,此3群内IBV毒株之间N蛋白推导氨基酸同源性为88.3%～100%,与其他各群之间同源性为62.3%～95.1%。因此,此基因型的IBV毒株可能在中国已有较长时期的存在且发生了较大程度的变异。其中第Ⅵ群中两株韩国分离株与中国IBV分离株具有较近的亲缘关系。以上结果表明,中国大多数IBV分离株在N基因进化关系上较为独立,与国外毒株相比,和韩国毒株进化关系密切。此外,中国IBV毒株基因重组现象更加普遍,尤其是疫苗毒和野毒之间的重组。

关键词：传染性支气管炎病毒核蛋白基因遗传变异

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犬瘟热病毒A株核衣壳蛋白基因的克隆、表达及特性分析

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中国预防兽医学报 2006年第4期28卷 485-488页

作者：周洁李昌文张洪英陈洪岩李建伟曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心黑龙江哈尔滨150001

根据GenBank中A75/14株犬瘟热病毒(CDV)核衣壳蛋白(N)基因的核苷酸序列设计合成一对引物,经RT-PCR从病毒总RNA中扩增出1600bp的N基因,将其克隆于pMD18-T载体对其进行序列分析。结果表明A株CDV与其它毒株N基因序列的同源性较高。将N基因... 详细信息

根据GenBank中A75/14株犬瘟热病毒(CDV)核衣壳蛋白(N)基因的核苷酸序列设计合成一对引物,经RT-PCR从病毒总RNA中扩增出1600bp的N基因,将其克隆于pMD18-T载体对其进行序列分析。结果表明A株CDV与其它毒株N基因序列的同源性较高。将N基因定向克隆于原核表达载体pPROEXTMHT,用重组质粒pPROEXTMHT-N转化感受态***5a细胞,用IPTG于37℃诱导表达了分子量约63Ku的重组N蛋白,占菌体总蛋白18%。经Westernblot分析证实所表达的重组N蛋白具反应活性,将表达产物用ProBondTM纯化试剂盒进行了纯化。用所获得的重组蛋白免疫家兔制备的多克隆抗体可与CDV全病毒发生特异性反应,经琼扩试验测定其效价为1∶16。本实验为下一步用重组N蛋白作为诊断用抗原,建立特异的CDV抗体检测方法奠定了基础。

关键词：犬瘟热病毒核衣壳蛋白表达反应活性多克隆抗体

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鸡传染性腔上囊病病毒Gt株全基因组序列分析及真核表达载体的构建

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中国兽医科学 2006年第10期36卷 820-826页

作者：祁小乐高玉龙高宏雷邓小芸张宁王晓燕王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

采用一步法长距离RT-PCR克隆了IBDV Gt株全基因组,对其核苷酸和氨基酸序列进行了系统分析。在IBDV Gt株全基因组中引入分子标签,且在基因组两端分别引入锤头状核酶结构(HamRz)和丁肝病毒核酶结构(HdvRz)。将带有分子标签和核酶结构的IBD... 详细信息

采用一步法长距离RT-PCR克隆了IBDV Gt株全基因组,对其核苷酸和氨基酸序列进行了系统分析。在IBDV Gt株全基因组中引入分子标签,且在基因组两端分别引入锤头状核酶结构(HamRz)和丁肝病毒核酶结构(HdvRz)。将带有分子标签和核酶结构的IBDV基因组插入载体pCAGGS的β肌动蛋白启动子下游,构建了IBDV真核表达载体pCAGGmGtAHRT和pCAG-GmGtBHRT,为IBDV新型高效拯救平台的构建及基于此的病毒基因功能奠定了基础。

关键词：传染性腔上囊病病毒 Gt株分子标签核酶真核表达载体

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传染性腔上囊病病毒VP3蛋白模拟表位的筛选

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中国兽医科学 2006年第10期36卷 791-794页

作者：邓小芸高玉龙高宏雷祁小乐程宇王晓艳王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了研究传染性腔上囊病病毒(IBDV)的致病机理及研制有效的IBDV疫苗,利用噬菌体展示技术对IBDV VP3抗原表位进行了筛选。以4株IBDV VP3单克隆抗体HRB-3F、HRB-7B、HRB-7C和HRB-10E作为筛选分子,对噬菌体随机15肽库进行3轮吸附-洗脱-扩... 详细信息

为了研究传染性腔上囊病病毒(IBDV)的致病机理及研制有效的IBDV疫苗,利用噬菌体展示技术对IBDV VP3抗原表位进行了筛选。以4株IBDV VP3单克隆抗体HRB-3F、HRB-7B、HRB-7C和HRB-10E作为筛选分子,对噬菌体随机15肽库进行3轮吸附-洗脱-扩增淘洗,从每株单克隆抗体筛选到的噬菌斑中随机挑取20个单克隆噬菌斑,通过间接ELISA和竞争抑制ELISA检测,共选出13个单克隆噬菌斑,经噬菌体gⅢ部分基因的核苷酸序列测定,确定了8个15肽为IBDV抗原表位。这8个15肽在一级结构上没有3个以上连续氨基酸与IBDV Gx(Gen-Bank登录号:AY444873)VP3的氨基酸序列相同,但二级结构上均以β折叠为主,并且与单抗的结合可被VP3蛋白有效地抑制。证实,筛选的是IBDV VP3的模拟表位。

关键词：传染性腔上囊病病毒 VP3蛋白抗原表位噬菌体随机15肽库筛选

来源：评论

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猪戊型肝炎病毒大庆株DQ1全基因序列分析

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中国预防兽医学报 2006年第5期28卷 507-510页

作者：于敏曲娟娟郭巍赵立平相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

本试验采用RT-PCR的方法对戊型肝炎病毒大庆株(DQ1HEV株)的全基因进行分片段扩增,并对其两个末端采用末端快速扩增法(RACE)进行扩增、克隆,测序。与已报道的人的14株HEV的4个基因型的核苷酸和氨基酸进行比较,与IV型HEV的同源性最高。ORF... 详细信息

本试验采用RT-PCR的方法对戊型肝炎病毒大庆株(DQ1HEV株)的全基因进行分片段扩增,并对其两个末端采用末端快速扩增法(RACE)进行扩增、克隆,测序。与已报道的人的14株HEV的4个基因型的核苷酸和氨基酸进行比较,与IV型HEV的同源性最高。ORF1区与IV型HEV核苷酸的同源性为82.6%～83.6%,氨基酸同源性为93.5%。ORF2区与IV型HEV核苷酸的同源性为87.0%～88.4%,氨基酸同源性为95.8%～97.4%。ORF3区与IV型HEV核苷酸的同源性为94.4%～96.5%,氨基酸同源性为90.3%～96.5%。其结果表明DQ1HEV株为IV型HEV。

关键词：猪戊型肝炎病毒克隆序列分析

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