检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2006年第3期28卷 257-260页

作者：郭东春张云刘明欧阳岁东胡奇林张序刘怀然中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350003 哈尔滨市兽医卫生防疫站黑龙江哈尔滨150016 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心黑龙江哈尔滨150001

从患运动障碍的雏鹅肝脏和脾脏分离到一株鹅源呼肠孤病毒,该病毒经琼脂扩试验可与番鸭呼肠孤病毒(MuscovyDuckReovirus,MDRV)的抗血清发生交叉反应,推测其为呼肠孤病毒,命名为GRV1。参考GenBank禽呼肠孤病毒(AvianReovirus,ARV)和番鸭... 详细信息

从患运动障碍的雏鹅肝脏和脾脏分离到一株鹅源呼肠孤病毒,该病毒经琼脂扩试验可与番鸭呼肠孤病毒(MuscovyDuckReovirus,MDRV)的抗血清发生交叉反应,推测其为呼肠孤病毒,命名为GRV1。参考GenBank禽呼肠孤病毒(AvianReovirus,ARV)和番鸭呼肠孤病毒小外壳蛋白(minorcoreprotein)σC蛋白基因序列设计合成了一对引物,病毒RNA经RT-PCR扩增,产物为810bp,与预期的目的片断大小一致,测序结果表明σC基因在280～1089区间是一个开放性阅读框架,编码269个氨基酸的蛋白,GC含量为49.88%,等电点为6.497,分子量为29.4Ku。核苷酸序列经DNAStar(6.0)软件分析,与法国番鸭呼肠孤病毒89026株核苷酸同源率为93.0%,与鸡呼肠孤病毒σC基因同源率仅为21%～25%,同源性分析表明鹅呼肠孤病毒与番鸭呼肠孤病毒可能来自同一祖先,建议将鹅呼肠孤病毒连同番鸭呼肠孤病毒归属为正呼肠孤病毒属第二个亚群中不同于禽和内尔森贝海湾呼肠病毒的独立基因群。由蛋白质分析软件Anthepro5.0和MultiCoil软件分析表明,抗原区多位于N末端,没有跨膜区,σC为三股螺旋结构,这是我国第一次在鹅体内分离到呼肠孤病毒,同时也是第一次在数据库中提供σC的序列。

关键词：鹅呼肠孤病毒同源性小核心蛋白(σC) 基因特征

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猪瘟病毒石门株基因组全长cDNA的克隆与序列分析

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中国预防兽医学报 2006年第3期28卷 275-278页

作者：李国新李娜仇华吉朱庆虎李艳王明杰李继昌童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

参照已发表的猪瘟病毒基因组序列设计合成了9对引物,通过RT-PCR从感染猪瘟病毒的猪全血中扩增得到了覆盖猪瘟病毒石门株基因组全长的9个cDNA片段,将所得片段分别克隆至pOK12载体和pMD18-T载体,经测序和拼接后,获得了猪瘟病毒石门株基因... 详细信息

参照已发表的猪瘟病毒基因组序列设计合成了9对引物,通过RT-PCR从感染猪瘟病毒的猪全血中扩增得到了覆盖猪瘟病毒石门株基因组全长的9个cDNA片段,将所得片段分别克隆至pOK12载体和pMD18-T载体,经测序和拼接后,获得了猪瘟病毒石门株基因组全序列。序列分析表明,猪瘟病毒石门株基因组全长12297个碱基,含有一个大的开放阅读框架,编码1个由3898个氨基酸残基组成的聚合蛋白,其5'非编码区(5'UTR)和3'非编码区3'(UTR)分别由373和227个碱基组成,与已发表的2个猪瘟病毒石门株的全序列相比,核苷酸同源性分别为99.4%和99.6%,氨基酸同源性分别为99.4%和99.7%,在3'末端第12133位T碱基发生缺失。比较了27个猪瘟病毒全序列的3'UTR,结果提示12133位碱基T缺失区域可能是猪瘟病毒的高变异区。

关键词：猪瘟病毒基因组序列同源性分析序列分析

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禽流感病毒一步法RT-PCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2006年第9期36卷 701-706页

作者：包红梅王秀荣刘丽玲王昱李一经陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为了能快速准确地对禽流感进行病原学诊断，根据流感病毒的M基因序列，在保守区内用Olig04．0软件设计了1对引物，建立了一步法RT—PCR诊断方法，其目的片段大小为229bp。通过对不同稀释倍数的H5亚型禽流感病毒尿囊液和棉拭子浸出液进... 详细信息

为了能快速准确地对禽流感进行病原学诊断，根据流感病毒的M基因序列，在保守区内用Olig04．0软件设计了1对引物，建立了一步法RT—PCR诊断方法，其目的片段大小为229bp。通过对不同稀释倍数的H5亚型禽流感病毒尿囊液和棉拭子浸出液进行检测，结果显示，病毒尿囊液的最低检出稀释度为1：10^4；阳性棉拭子的最低检出稀释度为1：2^3。用病毒分离法和一步法RT—PCR同时检测人工感染鸡不同脏器、口咽及泄殖腔棉拭子样品，二者符合率为100％，但前者的检测灵敏度比后者高10～100倍。用该方法检测H1～H15亚型禽流感病毒和鸡新城疫病毒等其他14种禽病病原，所有禽流感病毒均有229bp的目的条带出现，而其他14种禽病病原均无目的条带出现，表明该方法的特异性好。

关键词：禽流感病毒一步法RT—PCR 快速诊断

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禽流感病毒A/PFV/Restock/34(H7N1)HA基因在昆虫/杆状病毒系统中的表达

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中国预防兽医学报 2006年第3期28卷 294-297页

作者：李贺孟庆文冉多良于康震陈化兰李永强吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学院新疆乌鲁木齐830052

经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/PFV/Restock/1/34(H7N1)1.7kbHA基因的cDNA,将其克隆到pMD18-T中并测序。在去除编码HA信号肽的核苷酸序列后,亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHis,筛选到重组质粒命名为pBlueBacHisH7HA,测序正确后与线性化... 详细信息

经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/PFV/Restock/1/34(H7N1)1.7kbHA基因的cDNA,将其克隆到pMD18-T中并测序。在去除编码HA信号肽的核苷酸序列后,亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHis,筛选到重组质粒命名为pBlueBacHisH7HA,测序正确后与线性化的杆状病毒DNA(Bac-N-BlueTMDNA)共转染Sf9昆虫细胞,挑取蓝色蚀斑,经三轮蚀斑纯化,获得数株重组杆状病毒rpBlueHisH7HA。提取重组病毒DNA,经PCR证明目的基因片段已插入到杆状病毒基因组中,血凝实验、SDS-PAGE和Westernblot实验结果表明HA基因在重组杆状病毒感染的HFive细胞中获得了表达。

关键词：禽流感病毒血凝素基因重组杆状病毒表达

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抗鸡IBDV Gt株单克隆抗体制备及抗原表位初步分析

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中国预防兽医学报 2006年第6期28卷 697-700页

作者：程宇王笑梅高玉龙高宏雷付朝阳简子健祁小乐陆桂丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学院新疆乌鲁木齐830052

采用不连续蔗糖密度梯度离心法纯化的鸡传染性法氏囊病病毒Gt株免疫BALB／C小鼠，利用淋巴细胞杂交瘤技术，取其脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行融合，经过三次筛选克隆，获得具有分泌抗IBDV抗体的7D4、5D2两株杂交瘤细胞系，并对7D4及5D... 详细信息

采用不连续蔗糖密度梯度离心法纯化的鸡传染性法氏囊病病毒Gt株免疫BALB／C小鼠，利用淋巴细胞杂交瘤技术，取其脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行融合，经过三次筛选克隆，获得具有分泌抗IBDV抗体的7D4、5D2两株杂交瘤细胞系，并对7D4及5D2株进行了特异性、稳定性等方面的鉴定。试验表明，两株分泌的抗体能够特异地与IBDV VP2蛋白反应。7D4株及5D2株杂交瘤细胞上清ELISA效价分别为1：250、1：50，腹水ELISA效价为6．4×10^6、5×10^3；并运用7D4、5D2介导的相加ELISA进行抗原表位的初步定位，这两株单抗针对不同的VP2抗原表位。

关键词：传染性法氏囊病病毒单克隆抗体抗原表位

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SARS冠状病毒PUP5蛋白的表达、纯化及鉴定

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中国预防兽医学报 2006年第4期28卷 457-460,465页

作者：王红霞孟庆文刘永刚施建忠孔宪刚冉多良吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学院新疆乌鲁木齐830052

经RT-PCR扩增了SARS冠状病毒(SARS-CoV)BJ01株的PU5基因(putativeuncharacterizedgene5)的cDNA,将其克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,命名为pGEX-PU5,测序正确后将阳性质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达的融合蛋白命名为pGEX-PUP5,并用GlutathioneSwpharoseTM4B亲和层析柱对表达产物进行纯化,然后用PreScissionTMProtease酶对融合蛋白进行解离,获得PUP5蛋白,用抗SARS-CoV卵黄抗体IgY和GST-tag单克隆抗体分别对表达的目的蛋白做Westernblot鉴定,证明所表达的蛋白具有免疫学活性。本研究应用原核表达系统表达了PUP5蛋白,为进一步解析该蛋白功能奠定了基础。

关键词： SARS冠状病毒 PUP5蛋白表达

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应用碱性单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测镉致鸡脾淋巴细胞DNA的损伤效应

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中国兽医学报 2006年第3期26卷 307-309页

作者：李金龙熊永忠徐世文李术刘丽玲东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

应用碱性单细胞凝胶电泳技术（single cell gel electrophoresis，SCGE）]检测了0～30μmol／L CdCl2对体外培养的鸡脾脏淋巴细胞DNA的损伤效应。结果表明，镉浓度在0～30μmol／L范围内，随着镉浓度的增加，对鸡脾脏淋巴细胞DNA的损伤... 详细信息

应用碱性单细胞凝胶电泳技术（single cell gel electrophoresis，SCGE）]检测了0～30μmol／L CdCl2对体外培养的鸡脾脏淋巴细胞DNA的损伤效应。结果表明，镉浓度在0～30μmol／L范围内，随着镉浓度的增加，对鸡脾脏淋巴细胞DNA的损伤作用逐渐增强，呈现显著的剂量效应（r=0．983，P=0．004）。结果提示，镉致鸡脾脏淋巴细胞DNA损伤是镉对禽类免疫毒性的重要机制之一。

关键词：镉鸡脾脏淋巴细胞单细胞凝胶电泳 DNA损伤

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PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒的研制及其应用

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中国兽医科学 2006年第11期36卷 880-884页

作者：谭斌刘长明危艳武张超范刘永刚冉多良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学院新疆乌鲁木齐830052

建立了一种检测猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验法（IPMA），并组装成PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒。对该试剂盒的敏感性、特异性、重复性及保存期等进行了试验，并与国外IDEXX ELISA试剂盒进行了比... 详细信息

建立了一种检测猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验法（IPMA），并组装成PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒。对该试剂盒的敏感性、特异性、重复性及保存期等进行了试验，并与国外IDEXX ELISA试剂盒进行了比较。结果显示，用该试剂盒检测PRRSV人工接种猪血清样品，第1周抗体阳性检出率为50％，从第2周起抗体阳性检出率均为100％，而对照组猪血清抗体检测均为阴性。该试剂盒重复性好，-20℃保存18个月稳定，与其他病毒参考血清无交叉反应，与国外IDEXX ELISA试剂盒的符合率为83．3%。用该试剂盒对采自黑龙江、吉林、辽宁、河北、上海等地13个猪场的520份正常猪血清样品进行了抗体检测，结果，4个猪场阳性率高达90％以上，仅有2个猪场为阴性，其余猪场阳性率为10％～57%。

关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒抗体检测试剂盒免疫过氧化物酶单层细胞试验

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水泡性口炎病毒印第安纳株反基因操作系统的建立

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中国预防兽医学报 2006年第5期28卷 489-494页

作者：温志远葛金英王永胡森郝永清步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018

负链RNA病毒作为活病毒载体具有巨大的优势。本研究构建了水泡性口炎病毒印第安纳株(VSV-Ind)基因组全长cDNA克隆,建立了反向遗传操作系统并成功救获病毒。通过免疫荧光、电镜观察、RT-PCR及生长动力学研究,证实救获病毒保持典型的VSV... 详细信息

负链RNA病毒作为活病毒载体具有巨大的优势。本研究构建了水泡性口炎病毒印第安纳株(VSV-Ind)基因组全长cDNA克隆,建立了反向遗传操作系统并成功救获病毒。通过免疫荧光、电镜观察、RT-PCR及生长动力学研究,证实救获病毒保持典型的VSV印第安纳株特点,救获VSV的基因组内G蛋白前、后非编码区分别引入两个用于进一步构建重组病毒时外源基因插入的两个限制酶位点。本研究为新型重组活病毒疫苗载体和肿瘤治疗载体的研制及基础病毒学相关研究提供了重要的技术平台。

关键词：水泡性口炎病毒反基因操作

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表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒疫苗免疫持续期试验

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中国预防兽医学报 2006年第1期28卷 13-15页

作者：智海东王云峰孙永科杨玉艾王玫童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 西北农林科技大学动物医学系陕西杨凌712100

用表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因的重组鸡痘病毒(rFPV-gB-F)制备的疫苗免疫4周龄SPF鸡,免疫后的7、14、21、30、60、90、120、150、180 d分别采血,分离血清,检测抗FPV和gB的抗体。结果表明重组疫苗免疫后14 d,免疫鸡... 详细信息

用表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因的重组鸡痘病毒(rFPV-gB-F)制备的疫苗免疫4周龄SPF鸡,免疫后的7、14、21、30、60、90、120、150、180 d分别采血,分离血清,检测抗FPV和gB的抗体。结果表明重组疫苗免疫后14 d,免疫鸡血清抗体已经全部阳转,免疫后的21 d血清抗FPV的抗体出现峰值;此后便开始回落,到免疫后的6个月抗体水平已经接近阴性对照的水平。抗gB的抗体在免疫后的第二周达到阳性,之后的六个月都为阳性。在免疫后的每个月将免疫鸡取20只再分成两组,分别用新城疫强毒与传染性喉气管炎强毒的攻击。在免疫后的第一个月对新城疫的保护率为8/10,第2个月对新城疫的保护为7/10,第3个月为2/10,因此对新城疫的免疫保护期为2个月。在免疫后的5个月内可以使免疫鸡对传染性喉气管炎强毒攻击的保护率达到8/10以上,免疫后的6个月对ILT为8/13,因此rF-PV-gB-F对传染性喉气管炎的免疫保护期为5个月。

关键词：新城疫传染性喉气管炎重组鸡痘病毒免疫持续期

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