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中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会

作者：郭东春张云耿宏伟胡奇林郝雪欧阳岁东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽病室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽病室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科技学院黑龙江哈尔滨150030 福建省农业科学院动物病毒研究室福建福州350003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽病室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

本文对DRV S12 σB编码基因进行克隆,测序和原核表达,序列分析表明S12 σB与ARV的核苷酸和氨基酸同源性分别为59.3％-64.0％和60.9％-62.5％;表达的σB蛋白分子量为45kDa,与预期大小一致,Western blots表明σB蛋白能与抗番鸭呼肠孤病毒... 详细信息

本文对DRV S12 σB编码基因进行克隆,测序和原核表达,序列分析表明S12 σB与ARV的核苷酸和氨基酸同源性分别为59.3％-64.0％和60.9％-62.5％;表达的σB蛋白分子量为45kDa,与预期大小一致,Western blots表明σB蛋白能与抗番鸭呼肠孤病毒阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫原性;将表达的σB蛋白按5ug/ml包被,血清做1:160倍稀释,经30份鸭阴性血清确定阳性临界点为0.2;对117份濒死期鸭血清进行检测,与中和试验(SN)的符合率为100％,AGID的符合率为79.5％,表明该σB-ELISA诊断方法可用于诊断番鸭胡肠孤病毒的抗体监测.

关键词：番鸭呼肠孤病毒基因表达 ELISA 基因克隆

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鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)WG株ICP4基因的鉴定及其在潜伏位点的表达

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广西农业生物科学 2006年第B9期25卷 213-214页

作者：木古丽王云峰侯绍华石星明王玫冉多良童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

根据传染性喉气管炎病毒（Infectious Laryngotracheitis Virus，ILTV）SA2株ICP4基因序列设计并合成3对引物，以ILTV中国王岗株（WG）株DNA为模板扩增ICP4基因，并对其进行了序列测定。将ILTV WG株的ICP4基因及其推导的氨基酸序列分别... 详细信息

根据传染性喉气管炎病毒（Infectious Laryngotracheitis Virus，ILTV）SA2株ICP4基因序列设计并合成3对引物，以ILTV中国王岗株（WG）株DNA为模板扩增ICP4基因，并对其进行了序列测定。将ILTV WG株的ICP4基因及其推导的氨基酸序列分别与ILTVSA-2株、BHV-1、EHV-1、EHV-4、MDV-1、MDV-2、HVT、PRV、VZV、HSV-1和HSV-2的ICP4基因及其推导的氨基酸序列比较后发现，ILTV毒株之间ICP4基因相对保守，核苷酸和氨基酸水平的同源性分别为99．7％和99．19／5，但与其他α-疱疹病毒的ICP4基因的同源性则较低，低于3．0％。对潜伏感染鸡三叉神经节中病毒基因的检测显示，在人工感染ILTVWG株后第10460d内均能检测到低水平的ICP4特异RNA，而gB、gC、TK则未能检出。鉴于目前国内外对α-疱疹病毒潜伏感染相关基因以及ICP4基因序列和结构功能的研究，ILTVWG株ICP4基因的克隆和序列测定，以及病毒基因在潜伏感染鸡三叉神经节中的差异表达，为进一步研究ICP4基因的功能及确定潜伏感染相关基因奠定了基础。

关键词：传染性喉气管炎病毒 WG株 ICP4基因序列分析潜伏感染

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表达鸡IFN-γ基因重组鸡痘病毒与鸡传染性法氏囊疫苗联合接种对鸡免疫应答的影响

表达鸡IFN-γ基因重组鸡痘病毒与鸡传染性法氏囊疫苗联合接种对鸡...

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中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会

作者：都兴洋石星明王云峰杨春富王玫童光志尹训南王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

本研究将表达鸡IFN-γ的重组鸡痘病毒(rFPV-IFN-γ)与鸡传染性法氏囊病MB43活疫苗联合接种SPF鸡,研究重组鸡IFN-γ对传染性法氏囊疫苗免疫效果的影响.结果,rFPV-IFN-γ(103PFU)和MB43活苗联合免疫组(MB43r+FPV-IFN-γ)以及重组干扰素(rI... 详细信息

本研究将表达鸡IFN-γ的重组鸡痘病毒(rFPV-IFN-γ)与鸡传染性法氏囊病MB43活疫苗联合接种SPF鸡,研究重组鸡IFN-γ对传染性法氏囊疫苗免疫效果的影响.结果,rFPV-IFN-γ(103PFU)和MB43活苗联合免疫组(MB43r+FPV-IFN-γ)以及重组干扰素(rIFN-γ,200U)和MB43活苗联合免疫组(MB43+rIFN-γ)在免疫后2周即可检出ELISA抗体,比MB43单独免疫组早1周左右.在受到鸡传染性法氏囊病病毒Gx株攻击之后,MB43+rFPV-IFN-γ免疫鸡和MB43+rIFN-γ免疫鸡的脾脏只有个别淋巴细胞核浓缩、核崩解,少数滤泡萎缩变性坏死;胸腺结构清晰,仅有个别胸腺小体变性坏死,损伤程度轻于MB43单独免疫组和非免疫对照组.疫苗免疫后1周,与非免疫对照相比3个免疫组外周血CD8+T淋巴细胞含量均有显著上升,但CD4+T淋巴细胞含量变化却不明显;IBDV Gx株强毒攻击之后2周,3个疫苗免疫组CD4+、CD8+T淋巴细胞百分含量均显著升高,各组之间CD4+、CD8+T淋巴细胞百分含量无明显差异.结果表明,rFPV-IFN-γ和rIFN-γ可较全面地加强疫苗引起的免疫应答,加快疫苗诱导的体液免疫应答.

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒活疫苗 IFN-γ基因免疫应答联合接种痘病毒

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鸡法氏囊B淋巴细胞三框cDNA文库的构建

鸡法氏囊B淋巴细胞三框cDNA文库的构建

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中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会

作者：高玉龙刘伟高宏雷邓小芸李铁强王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是由鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)引起的危害雏鸡的一种急性、高度接触性病毒性传染病.该病主要引起3～8周龄的鸡发病,导致死亡和引起免疫抑制,并可诱发... 详细信息

传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是由鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)引起的危害雏鸡的一种急性、高度接触性病毒性传染病.该病主要引起3～8周龄的鸡发病,导致死亡和引起免疫抑制,并可诱发多种鸡病或使多种疫苗免疫失败.此外,由于近年来变异株和超强毒株的流行,常使IBD免疫鸡群发病,病死率升高达80％以上,严重威胁着养鸡业的发展. IBDV主要侵害鸡的中枢免疫器官-法氏囊,对法氏囊中的B淋巴细胞具有很强的亲嗜性.Kaufer等研究证实,切除法氏囊的鸡可以耐过IBDV的感染,仅有轻微的病理变化,但可以产生抗体.法氏囊是IBDV感染宿主及其复制的组织基础,B淋巴细胞上存在IBDV病毒细胞受体,与病毒的结合、侵入以及复制有关. 本研究从3周龄SPF鸡的法氏囊中分离B淋巴细胞,运用Gateway技术构建了鸡法氏囊B淋巴细胞三框表达cDNA文库,为研究IBDV与宿主相互作用以及筛选病毒受体奠定了基础.

关键词：鸡传染性法氏囊病淋巴细胞 cDNA文库

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胶体金试纸条检测H5亚型禽流感病毒的研究

胶体金试纸条检测H5亚型禽流感病毒的研究

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中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会

作者：邓国华曲站红林涛黎玉梅熊蕊施建忠赖清金李雁冰陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 漳州格林沃生物公司

本研究用一株H5亚型特异性的流感病毒单抗标记胶体金,另一株单抗包被于硝酸纤维素膜上,建立起H5亚型特异性的胶体金层析法检测试纸条,用该试纸条可以特异性的检测出H5亚型特异性流感病毒,而其他亚型流感病毒和其他禽类病毒均不能检测到... 详细信息

本研究用一株H5亚型特异性的流感病毒单抗标记胶体金,另一株单抗包被于硝酸纤维素膜上,建立起H5亚型特异性的胶体金层析法检测试纸条,用该试纸条可以特异性的检测出H5亚型特异性流感病毒,而其他亚型流感病毒和其他禽类病毒均不能检测到.同时用HA试验进行比较,试纸条检测法的敏感性比HA试验高4倍左右,试纸条检测阳性的样品均呈现H5亚型流感病毒阳性.该试纸条可以检测临床试验感染死亡鸡的脏器匀浆液中H5亚型流感病毒的存在.

关键词：胶体金试纸条 H5亚型禽流感病毒

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实时荧光定量PCR检测Ⅱ型猪圆环病毒

实时荧光定量PCR检测Ⅱ型猪圆环病毒

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：许红喜符芳鲁晶红李曦黑龙江八一农垦大学大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001

本试验建立了SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法检测PCV-2.分析表明,10倍系列稀释的标准质粒9个点均在一条直线上,二者相关系数R2＞0.999,扩增效率达到97％.敏感性、特异性及重复性实验证明,批间、批内重复试验的变异系数均小于1.5％;... 详细信息

本试验建立了SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法检测PCV-2.分析表明,10倍系列稀释的标准质粒9个点均在一条直线上,二者相关系数R2＞0.999,扩增效率达到97％.敏感性、特异性及重复性实验证明,批间、批内重复试验的变异系数均小于1.5％;可检测10-5.5TCID50.40份被检样品,SyReTi-PCR检测阳性率为87.5％,与普通PCR检测的符合率为94.6％,其敏感性是普通PCR 100倍.本研究建立的SyReTi-PCR检测PCV-2的方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性.

关键词： Ⅱ型猪圆环病毒 SyReTi-PCR检测标准曲线 PCV-2方法

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鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)WG株ICP4基因的鉴定及其在潜伏位点的表达

鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)WG株ICP4基因的鉴定及其在潜伏位点的...

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中国农业生物技术学会动物生物技术分会第二届全国动物生物技术学术研讨会

作者：木古丽王云峰侯绍华石星明王玫冉多良童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

本文根据传染性喉气管炎病毒(Infectious Laryngotracheitis Virus,ILTV)SA-2株ICP4基因序列设计并合成3对引物,以ILTV中国王岗株(WG)株DNA为模板扩增ICP4基因,并对其进行了序列测定.将ILTV WG株的ICP4基因及其推导的氨基酸序列分别与IL... 详细信息

本文根据传染性喉气管炎病毒(Infectious Laryngotracheitis Virus,ILTV)SA-2株ICP4基因序列设计并合成3对引物,以ILTV中国王岗株(WG)株DNA为模板扩增ICP4基因,并对其进行了序列测定.将ILTV WG株的ICP4基因及其推导的氨基酸序列分别与ILTV SA-2株、BHV-1、EHV-1、EHV-4、MDV-1、MDV-2、HVT、PRV、VZV、HSV-1和HSV-2的ICP4基因及其推导的氨基酸序列比较后发现,ILTV毒株之间ICP4基因相对保守,核苷酸和氨基酸水平的同源性分别为99.7﹪和99.1﹪,但与其他α-疱疹病毒的ICP4基因的同源性则较低,低于3.0﹪.对潜伏感染鸡三叉神经节中病毒基因的检测显示,在人工感染ILTV WG株后第10～60 d内均能检测到低水平的ICP4特异RNA,而gB、gC、TK则未能检出.鉴于目前国内外对α-疱疹病毒潜伏感染相关基因以及ICP4基因序列和结构功能的研究,ILTV WG株ICP4基因的克隆和序列测定,以及病毒基因在潜伏感染鸡三叉神经节中的差异表达,为进一步研究ICP4基因的功能及确定潜伏感染相关基因奠定了基础.

关键词：传染性喉气管炎病毒 ICP4基因序列分析潜伏感染

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H5亚型禽流感病毒HA基因昆虫／杆状病毒系统的表达及对BALB/c小鼠的免疫保护

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科技导报 2006年第3期24卷 5-8页

作者：孟庆文刘光亮于康震童光志刘娣施建忠陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 东北林业大学博士后流动站黑龙江省农业科学院博士后工作站北京100026 农业部畜牧兽医总站哈尔滨150086

经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1／96 H5N1亚型1．7kb HA基因的cDNA,将其克隆到pMD18-T中并测序。亚克隆到杆状病毒转移载体pMelBacA的蜜蜂蜂毒素分泌信号下游中,测序正确后与线性化的杆状病毒DNA(Bac-N-BlueTM DNA)共转染... 详细信息

经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1／96 H5N1亚型1．7kb HA基因的cDNA,将其克隆到pMD18-T中并测序。亚克隆到杆状病毒转移载体pMelBacA的蜜蜂蜂毒素分泌信号下游中,测序正确后与线性化的杆状病毒DNA(Bac-N-BlueTM DNA)共转染Sf9昆虫细胞。将重组杆状病毒感染HFive细胞,72h左右收获细胞,超声波裂解,SDS—PAGE结果表明HA基因在重组杆状病毒感染的HFive细胞中获得表达。蛋白胶薄层扫描分析显示:表达的HA蛋白占重组杆状病毒感染细胞总蛋白含量的17．1％。Western-blot 及血凝实验结果显示,表达的禽流感H5N1亚型病毒HA蛋白具有生物学活性。表达的H5 HA蛋白定量乳化后,皮下多点注射免疫SPF 级BALB/c雌性小鼠,免疫后产生了H5 HA特异抗体,并在三免前后达到并保持较高水平。用致死剂量的HPAIV H5N1攻击小鼠,免疫组小鼠提供了100％的保护力,而对照组小鼠先后发病且死亡:为研制禽流感H5N1亚型病毒亚单位疫苗,防制禽流感奠定了基础。

关键词：禽流感病毒血凝素重组杆状病毒亚单位疫苗免疫保护

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番鸭呼肠孤病毒σB编码基因克隆、表达与间接ELISA诊断方法的建立

番鸭呼肠孤病毒σB编码基因克隆、表达与间接ELISA诊断方法的建立

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十三次学术研讨会

作者：郭东春张云耿宏伟胡奇林郝雪欧阳岁东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽病室东北农业大学生命科技学院福建省农业科学院动物病毒研究室黑龙江八一农垦大学动物科技学院

本文对DRV S12σB编码基因进行克隆,测序和原核表达,序列分析表明S12σB与ARV的核苷酸和氨基酸同源性分别为59.3%-64.0%和60.9%-62.5%;表达的σB蛋白分子量为45kDa,与预期大小一致,Western blots表明σB蛋白能与抗番鸭呼肠孤病毒阳性血... 详细信息

本文对DRV S12σB编码基因进行克隆,测序和原核表达,序列分析表明S12σB与ARV的核苷酸和氨基酸同源性分别为59.3%-64.0%和60.9%-62.5%;表达的σB蛋白分子量为45kDa,与预期大小一致,Western blots表明σB蛋白能与抗番鸭呼肠孤病毒阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫原性;将表达的σB蛋白按5ug/ml包被,血清做1:160倍稀释,经30份鸭阴性血清确定阳性临界点为0.2;对117份濒死期鸭血清进行检测,与中和试验(SN)的符合率为100%,AGID的符合率为79.5%,表明该σB-ELISA诊断方法可用于诊断番鸭胡肠孤病毒的抗体监测。

关键词：番鸭呼肠孤病毒 σB σC 表达 ELISA

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鹅细小病毒HG5/82株的分离鉴定及生物学特性的研究

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中国预防兽医学报 2005年第3期27卷 196-201页

作者：李桂霞刘胜旺孔宪刚谷守林冉多良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001新疆农业大学动物医学院新疆乌鲁木齐830052 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学院新疆乌鲁木齐830052

本研究通过对1982年黑龙江某鹅场发生的鹅细小病毒病疑似病例的肝病变组织病毒分离,进行回顾性研究。将肝脏加PBS研磨后,-70℃/37℃反复冻融三次,除菌过滤后接种12日龄鹅胚。发现病毒对鹅胚的致死时间为5～6d,胚体体表有轻微出血点。鹅... 详细信息

本研究通过对1982年黑龙江某鹅场发生的鹅细小病毒病疑似病例的肝病变组织病毒分离,进行回顾性研究。将肝脏加PBS研磨后,-70℃/37℃反复冻融三次,除菌过滤后接种12日龄鹅胚。发现病毒对鹅胚的致死时间为5～6d,胚体体表有轻微出血点。鹅胚尿囊液经磷钨酸染色,可见具有典型特征的细小病毒粒子。将该病毒尿囊液在12日龄鹅胚中连续传16代,随着传代次数的增加,胚体多集中在3～4d死亡。病毒传至第三代时死亡胚体头、颈、背部出现较为严重的出血点,体表有水肿。第五代病毒尿囊液(命名为HG5/82)对12日龄鹅胚的ELD50为10-5.92/0.1mL。将20只12日龄雏鹅分为三个试验组和一个阴性对照组,各组分别接种鹅胚尿囊液104.92ELD50、103.92ELD50、102.92ELD50及生理盐水,发现雏鹅接种HG5/82后4d出现轻微腹泻,随后恢复正常。用套式PCR检测雏鹅肛拭子病毒的体外排放情况。发现三个试验组在接种病毒后1～20d用套式PCR均可检测到病毒。对照组及试验组接种后20～56d没有检测到病毒。将套式PCR产物进行序列测定并于参考毒株进行比较,表明该序列具有GPV相应区域的共同分子特征,与GPV参考毒株B的相应序列同源性达93.6%。本研究结果表明,该分离毒株为典型的鹅细小病毒(GooseParvovirus,GPV),对雏鹅的致病力较弱。

关键词：鹅细小病毒分离鉴定生物学特性小鹅瘟

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