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2017年第十五届中国北方实验动物科技年会

作者：王兴童孟兴佟相慧陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室

为制备鸭抗原处理相关转运体（TAP）肽结合区（PBD）特异性单克隆抗体（mAb）并鉴定其抗原表位,本研究以原核系统表达鸭截短的TAP2蛋白（TAP2PBD）,并对表达的TAP2PBD进行纯化免疫BAIB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）进行融合,... 详细信息

为制备鸭抗原处理相关转运体（TAP）肽结合区（PBD）特异性单克隆抗体（mAb）并鉴定其抗原表位,本研究以原核系统表达鸭截短的TAP2蛋白（TAP2PBD）,并对表达的TAP2PBD进行纯化免疫BAIB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）进行融合,以原核表达纯化的TAP2PBD蛋白为检测抗原,采用ELISA的检测方法筛选杂交瘤细胞系,获得一株稳定分泌抗TAP2PBD的mAb杂交瘤细胞系（1A6）。该mAb亚型鉴定为IgM型,轻链为k链。免疫组化试验显示1A6可以特异性识别真核组织表达的TAP蛋白。通过截短表达TAP2PBD蛋白鉴定该mAb的抗原表位为NARHQMLQQAVLDATAGTGMVAQEAI,序列分析表明该抗原表位在鸭中保守。本研究制备的mAb首次利用鸭TAP蛋白特异性单抗检测到TAP蛋白在亚细胞水平的表达,为进一步研究鸭TAP同免疫遗传的关系奠定了基础。

关键词：鸭抗原处理相关转运体原核表达单克隆抗体

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原核系统表达的鸡白细胞介素-10的鼠抗血清体内研究的初步分析

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实验动物科学 2017年第3期34卷 1-5页

作者：王丽廷王兴童杨柳彭蔚宇孟兴陈洪岩高文伟韩凌霞山西农业大学动物科技学院太谷030801 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

目的获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性。方法采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原... 详细信息

目的获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性。方法采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原核重组质粒pET-chIL-10;转化至大肠杆菌DH5α中IPTG诱导表达,切下含有重组蛋白的SDS-PAGE胶条,免疫制备鼠抗血清;分别与包含信号肽和去除信号肽的chIL-10真核表达细胞系CHO-euchIL-10F和CHO-euchIL-10M进行间接免疫荧光抗体试验(IFA)和蛋白免疫印迹试验(Western blot),验证有无反应性。结果成功构建chIL-10的原核表达载体pET-chIL-10,获得了高效价的鼠抗血清,能与表达chIL-10的真核细胞系反应。结论原核表达的chIL-10特异性鼠抗血清将能用于体内研究的检测。

关键词：鸡白介素-10 原核表达鼠抗血清体内实验

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高寒地区奶牛乳房炎凝固酶阴性致病葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

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中国预防兽医学报 2017年第10期39卷 848-851页

作者：郝俊玺董志民王秋东华欣祝瑶杨亲鄢明华刘思国张万江内蒙古农业大学内蒙古呼和浩特010018 天津市畜牧兽医研究所天津西青300381 天津市畜禽健康养殖技术工程中心天津西青300381 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150069

为调查高寒牧区引起奶牛乳房炎的凝固酶阴性致病葡萄球菌流行现状及耐药情况,本研究对呼伦贝尔地区3个规模化奶牛养殖场采用加州乳房炎测试法(CMT)进行高体细胞牛脂病检测,并采集330份牛奶样品,应用PCR方法、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型... 详细信息

为调查高寒牧区引起奶牛乳房炎的凝固酶阴性致病葡萄球菌流行现状及耐药情况,本研究对呼伦贝尔地区3个规模化奶牛养殖场采用加州乳房炎测试法(CMT)进行高体细胞牛脂病检测,并采集330份牛奶样品,应用PCR方法、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型和药敏试验等对样品中的葡萄球菌进行分离鉴定和耐药性分析。结果显示,该地区隐性乳房炎发病率达47.8%,共分离和鉴定出9种葡萄球菌60株(34.5%);60株葡萄球菌分为41个克隆谱型;60株葡萄球菌对青霉素和林可霉素的耐药率较高,分别为40.0%(24/60)和50.0%(30/60),表明这两种药是治疗乳房炎常用药物。本研究为高寒地区致病葡萄球菌引起的奶牛乳房炎临床合理用药及对病原菌的防控提供实验依据和指导。

关键词：葡萄球菌乳房炎药敏试验 PFGE分型

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层析技术制备马抗中东呼吸综合征冠状病毒F(ab’)_2

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中国生物制品学杂志 2017年第4期30卷 417-423,428页

作者：邱泊宁王翀赵永坤胡星星王化磊曹增国盖微微崔健男闫飞虎杨松涛夏咸柱吉林大学动物医学学院吉林长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室吉林长春130122 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 吉林农业大学动物科技学院吉林长春130118 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

目的采用层析技术制备高纯度的马抗中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrom coronavirus,MERS-CoV)F(ab’)_2。方法以MERS-CoV病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)对马匹进行多次免疫所制备的高免血清为原料,采用亲和层析技术提取血清IgG,经胃蛋白酶酶切后,通过阴离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析分别对F(ab’)_2进行纯化;以MERS假病毒检测所制备的IgG与F(ab’)_2中和活性。结果凝胶过滤层析实现了F(ab’)_2的高纯度分离,最终制备的F(ab’)_2收率约70%,纯度为93%以上,具有良好的中和活性,其半数抑制浓度(IC_(50))为5.13μg/ml。结论制备了高纯度马抗MERS-CoV免疫球蛋白F(ab’)_2,为人用抗MERS-CoV免疫球蛋白F(ab’)_2生产工艺的建立奠定了基础。

关键词：中东呼吸综合征冠状病毒病毒样颗粒层析免疫球蛋白

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马链球菌马亚种SeM基因的原核表达及鉴定

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黑龙江畜牧兽医 2017年第11期 188-191页

作者：刘东宇郭巍阿依吐拉.肉孜叶尔肯.哈布力汗王晓钧武瑞黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 新疆维吾尔自治区动物疫病预防控制中心乌鲁木齐830001 新疆维吾尔自治区阿勒泰地区动物疫病预防控制中心新疆阿勒泰836001

马腺疫（strangles）是由马链球菌（Streptococcus equi，***）马亚种感染马所引起的急性接触性传染病。该病最早由***于1251．年发现并报道，该病以发热、上呼吸道黏膜卡他性化脓性炎症、颌下淋巴结急性化脓性炎症为典型症状心]。在我... 详细信息

马腺疫（strangles）是由马链球菌（Streptococcus equi，***）马亚种感染马所引起的急性接触性传染病。该病最早由***于1251．年发现并报道，该病以发热、上呼吸道黏膜卡他性化脓性炎症、颌下淋巴结急性化脓性炎症为典型症状心]。在我国，马腺疫一年四季均会发生，呈散发性或地方流行性，春、秋两季最易发生，炎热天气会出现大面积流行，我国将此疾病定为三类动物疫病。该病的发病来势迅猛、传播速度快，造成大量马匹出现临床症状，在短时间内波及大片地区，给马产业造成巨大的经济损失。

关键词：马链球菌原核表达亚种急性接触性传染病 M基因化脓性炎症鉴定 Se

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应用PCR方法快速鉴定SPF金定鸭性别

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实验动物与比较医学 2017年第3期37卷 249-251页

作者：徐丽晶孙畅陆涛峰陈洪岩赵丽丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室实验动物与比较医学创新团队哈尔滨150069 东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030

目的利用PCR方法鉴定SPF金定鸭的性别。方法根据已有报道合成一对禽类性染色体上的染色质解螺旋蛋白DNA结合蛋白1(CHD1)基因的通用引物gCHD。采集培育中的85只SPF金定鸭血液样品,提取血液基因组DNA,进行PCR扩增。通过分析PCR扩增产物凝... 详细信息

目的利用PCR方法鉴定SPF金定鸭的性别。方法根据已有报道合成一对禽类性染色体上的染色质解螺旋蛋白DNA结合蛋白1(CHD1)基因的通用引物gCHD。采集培育中的85只SPF金定鸭血液样品,提取血液基因组DNA,进行PCR扩增。通过分析PCR扩增产物凝胶电泳后的条带数判定禽类性别。结果 PCR扩增产物经琼脂糖电泳分析后,雌性鸭样品扩增出CHD1-Z和CHD1-W,而雄性鸭样品只出现CHD1-Z。结论本文建立的方法可作为禽类性别的有效鉴定方法。

关键词： SPF金定鸭性别鉴定 PCR

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SPF鸡不同生长阶段粪便菌群组成及多样性研究

SPF鸡不同生长阶段粪便菌群组成及多样性研究

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第八届北京实验动物科学国际论坛

作者：周妍刁晨曦张圆圆于海波陆涛峰赵丽丽陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验哈尔滨150069 东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验哈尔滨150069 牡丹江师范学院生命科学与技术学院黑龙江牡丹江157011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验哈尔滨150069

目的:提供健康SPF鸡不同生长阶段肠道菌群的组成及多样性数据。方法:采集10日龄、12周龄、23周龄和52周龄SPF鸡粪便，利用Illumina HiSeq2500高通量测序方法，对样品16S rRNA基因的两个高变区（V3-V4)进行测序分析，并进行了α-多... 详细信息

目的:提供健康SPF鸡不同生长阶段肠道菌群的组成及多样性数据。方法:采集10日龄、12周龄、23周龄和52周龄SPF鸡粪便，利用Illumina HiSeq2500高通量测序方法，对样品16S rRNA基因的两个高变区（V3-V4)进行测序分析，并进行了α-多样性指数、β-多样性指数和粪便群落特征分析。结果:四个生长阶段粪便样品菌群具有相似的较高的丰富度和良好的均匀度，物种多样性无显著差异（P＞0.05);厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)和拟杆菌门（Bacteroidetes)丰度占95％以上;乳杆菌属(Lactobacillus)、链球菌属（Streptococcus)、拟杆菌属(Bacteroides)、肠球菌属(Enterococcus)为优势菌属，不同时期丰度差异达显著水平（P＜0.05)。结论:四个生长阶段菌群组成多样，且优势菌群主要为有益菌。该实验结果能够为SPF鸡品质评定、健康监测和安全性评价提供依据。

关键词：实验用鸡肠道菌群物种多样性品质评定健康监测安全性

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miR-200b-3p和miR-200b-5p在马立克氏病抗性与易感SPF鸡法氏囊组织的差异表达分析

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实验动物与比较医学 2017年第3期37卷 244-248页

作者：王瑞琪廉传江易诚韩凌霞杨春文陈洪岩牡丹江师范学院生命科学与技术学院牡丹江157011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室实验动物与比较医学创新团队哈尔滨150069

目的在前期高通量测序分析的基础上,进一步利用荧光定量PCR验证miR-200b-3p和miR-200b-5p在马立克氏病(MD)抗性(B21单倍型)与易感(B19单倍型)鸡法氏囊组织的差异表达情况。方法通过经优化后确定的最佳实时荧光定量PCR反应体系和扩增条件... 详细信息

目的在前期高通量测序分析的基础上,进一步利用荧光定量PCR验证miR-200b-3p和miR-200b-5p在马立克氏病(MD)抗性(B21单倍型)与易感(B19单倍型)鸡法氏囊组织的差异表达情况。方法通过经优化后确定的最佳实时荧光定量PCR反应体系和扩增条件,进行荧光定量PCR分析。结果 miR-200b-3p和miR-200b-5p荧光定量PCR结果与高通量测序结果上下调情况基本一致,但差异表达显著性分析结果却不完全相同。结论尽管差异表达显著性分析结果不完全一致,但两种方法的结果均提示来源于同一前体的miR-200b-3p和miR-200b-5p可能与MD抗性/易感性相关。

关键词： miR-200b 马立克氏病(MD) 抗性/易感性高通量测序荧光定量PCR

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鸡马立克氏病强弱病毒株PCR鉴别检测方法在诊断中的应用评价

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中国预防兽医学报 2016年第7期38卷 567-571页

作者：吕红超张艳萍孙国荣高玉龙李志杰郑惠文包珂岩王笑梅刘长军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为在现地准确诊断鸡马立克氏病(MD)以及区分发病鸡中MD病毒(MDV)野毒株和疫苗株的感染,本研究选择MDV血清1型(MDV-1)基因组中两个特有的、强弱毒株存在序列差异的基因片段132 bp重复序列(132 bpr)和meq基因作为靶基因,建立了MDV的PCR检... 详细信息

为在现地准确诊断鸡马立克氏病(MD)以及区分发病鸡中MD病毒(MDV)野毒株和疫苗株的感染,本研究选择MDV血清1型(MDV-1)基因组中两个特有的、强弱毒株存在序列差异的基因片段132 bp重复序列(132 bpr)和meq基因作为靶基因,建立了MDV的PCR检测方法。特异性试验和敏感性试验表明该PCR方法特异性强,敏感性高,132 bpr和meq基因两对引物对阳性重组质粒的检测下限分别为1.0×103拷贝/μL和1.0×102拷贝/μL。通过对近10年的1057份临床样品的检测对该PCR方法进行应用评价。结果表明病毒分离与PCR检测结果的符合率为100%,PCR检测结果可信度高;琼脂扩散试验(AGP)对MDV PCR检测阳性样品的检测阳性率为86.25%,PCR法检测敏感性明显高于AGP法。此外,对分离病毒株meq基因序列分析结果表明,所有分离株均具有中国野毒株特征,即突变主要出现于其编码蛋白的6个氨基酸中(K77E、D80 Y、V115 A、T139 A、P176 R或P217A),表明该PCR检测方法具有良好的特异性。本研究建立的MDV PCR检测方法特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性,可以用于MD的临床诊断。

关键词：鸡马立克氏病 PCR检测 meq基因 132 bp重复序列临床诊断

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应用PCR方法快速鉴定SPF金定鸭性别

应用PCR方法快速鉴定SPF金定鸭性别

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2017年第十五届中国北方实验动物科技年会

作者：徐丽晶孙畅陆涛峰陈洪岩赵丽丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室东北农业大学生命科学学院

目的利用PCR方法鉴定SPF金定鸭的性别。方法根据已有的报道合成一对禽类性染色体上的染色质解螺旋蛋白DNA结合蛋白1(CHD1)基因的通用引物gCHD。采集培育中的85只SPF金定鸭血液样品,提取血液基因组DNA,进行PCR扩增。通过分析PCR扩增产物... 详细信息

目的利用PCR方法鉴定SPF金定鸭的性别。方法根据已有的报道合成一对禽类性染色体上的染色质解螺旋蛋白DNA结合蛋白1(CHD1)基因的通用引物gCHD。采集培育中的85只SPF金定鸭血液样品,提取血液基因组DNA,进行PCR扩增。通过分析PCR扩增产物凝胶电泳后的条带数判定禽类性别。结果 PCR扩增产物经琼脂糖电泳分析后,雌性鸭样品扩增出CHD1-Z和CHD1-W,而雄性鸭样品只扩增出CHD1-Z。结论这种PCR方法可作为SPF动物育种过程中有效的鉴定方法。

关键词： SPF金定鸭性别鉴定 PCR

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