检索结果-内蒙古大学图书馆

含有鸡体偏嗜性密码子的H5亚型禽流感病毒HA基因的优化构建及其DNA疫苗体外瞬时表达研究

中国预防兽医学报 2005年第6期27卷 441-444,449页

作者：姜永萍李呈军张洪波步志高张芳芳邓国华于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 农业部畜牧兽医总站北京100026

不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒的密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的表达A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]HA蛋白... 详细信息

不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒的密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的表达A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]HA蛋白的基因optiHA5,并将其插入CMV启动子表达载体pCI构建了H5亚型DNA疫苗质粒pCIoptiHA5,将含有GD/1/96(H5N1)野生型HA基因的质粒pCIHA5和pCIoptiHA5分别转染293T细胞,间接免疫荧光检测转染后24～48h293T细胞中瞬时表达的HA抗原蛋白;Westemblot证实上述2种表达质粒均可正确表达H5亚型HA抗原蛋白,结果表明密码子优化的基因optiHA5体外瞬时表达水平显著高于野生型HA基因.这一结果为进一步开展SPF鸡免疫保护效果的比较研究奠定了基础.

关键词： H5亚型禽流感病毒 HA基因 DNA疫苗鸡体偏嗜性密码子偏嗜性寡核苷酸

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

具有HI活性的抗H5亚型流感病毒特异性单克隆抗体的研制

引用

中国预防兽医学报 2005年第5期27卷 329-332页

作者：张立春邓国华刘振勇田国彬于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

以H5N1亚型禽流感病毒分离株A/Duck/Zhejiang/11/00(H5N1)(DZJ/1100)作为免疫原,浓缩纯化后免疫BALB/c小鼠,三次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/O细胞融合,融合阳性细胞用血凝抑制(HI)方法进行检测,阳性细胞株经三代克隆纯化后,获得三株... 详细信息

以H5N1亚型禽流感病毒分离株A/Duck/Zhejiang/11/00(H5N1)(DZJ/1100)作为免疫原,浓缩纯化后免疫BALB/c小鼠,三次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/O细胞融合,融合阳性细胞用血凝抑制(HI)方法进行检测,阳性细胞株经三代克隆纯化后,获得三株能稳定分泌抗血凝素特异性HI单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为DD7、FG10、CG12。三株杂交瘤细胞株产生的小鼠腹水和细胞培养液上清的HI滴度分别是213、215、211和278、、23。与其他具有血凝活性的禽类病毒以及其他14个HA亚型的禽流感病毒的交叉HI试验表明:这三株单抗具有良好的禽流感病毒亚型特异性;与其他H5亚型流感病毒分离株的HI试验和中和试验证实这三株单抗具有良好的交叉性(分别为7/8、8/8、8/8)和中和活性(6/8、8/8、8/8)。该亚型特异性单克隆抗体的研制成功为H5亚型禽流感病毒的疫情病原学快速诊断提供了坚实的物质保障。

关键词：禽流感血凝抑制试验单克隆抗体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

一株禽流感病毒全基因的序列分析

引用

中国预防兽医学报 2005年第5期27卷 332-335页

作者：刘丽玲王秀荣陈化兰邓国华乔传玲李呈军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

通过反转录_聚合酶链式反应(RT_PCR)技术对禽流感病毒A/Turkey/Wisconsin/1/66(H9N2)的8个基因片段即PA、PB1、PB2、NS、NP、M、HA、NA分别进行扩增,然后将其克隆到PMD18_T载体后进行序列测定和拼接;并将克隆到的8个基因片段与以下毒株... 详细信息

通过反转录_聚合酶链式反应(RT_PCR)技术对禽流感病毒A/Turkey/Wisconsin/1/66(H9N2)的8个基因片段即PA、PB1、PB2、NS、NP、M、HA、NA分别进行扩增,然后将其克隆到PMD18_T载体后进行序列测定和拼接;并将克隆到的8个基因片段与以下毒株各个基因的相应序列进行比较分析:Duck/HongKong/Y280/97(DHKY280/97)、Duck/HongKong/YT439/97(DHKY439/97)、Quail/HongKong/G1/97(QHKG1/97)、A/Chicken/Beijing/1/94(CBJ1/94)、Chicken/HongKong/G9/97(CHKG9/97)、A/Turkey/California/1/66(TC/1/66)。结果表明:我们克隆到的TW1/66株的8个基因片段均含有相应病毒基因的完整开放阅读框架:TW1/66的各基因与TC/1/66株相应各基因同源性最高(NS基因除外,同源性只有67.4%)。与其它各毒株各基因同源性均较低,但与DHKY439/97各基因同源性高于与DHKY280/97、QHKG1/97、CBJ1/94、CHKG9/97各基因同源性。

关键词：禽流感病毒基因克隆序列测定

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

传染性喉气管炎病毒王岗株gB基因gC基因和gD基因的真核表达

引用

中国兽医科技 2005年第7期35卷 520-524页

作者：王利丽王云峰智海东王玫步志高冉多良童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

将传染性喉气管炎病毒(ILTV)王岗(WG)株的gB、gC、gD基因分别克隆到真核表达载体pCAGGS的EcoRⅠ位点,经过酶切、测序分析,筛选鉴定出含有gB、gC、gD基因的重组质粒,分别命名为pCAGGgB、pCAGGgC、pCAGGgD。用质粒纯化试剂盒对重组质粒进... 详细信息

将传染性喉气管炎病毒(ILTV)王岗(WG)株的gB、gC、gD基因分别克隆到真核表达载体pCAGGS的EcoRⅠ位点,经过酶切、测序分析,筛选鉴定出含有gB、gC、gD基因的重组质粒,分别命名为pCAGGgB、pCAGGgC、pCAGGgD。用质粒纯化试剂盒对重组质粒进行了纯化,将纯化后的质粒转染293T细胞,用间接免疫荧光技术检测了目的蛋白的表达情况。检测结果表明,目的蛋白得到了真实的表达。

关键词：传染性喉气管炎病毒 gB基因 gC基因 gD基因真核表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

禽痘病毒感染对禽流感重组禽痘病毒疫苗免疫效力的影响

引用

中国预防兽医学报 2005年第2期27卷 154-156页

作者：乔传玲李呈军于康震田国彬刘宝全陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 全国畜牧兽医总站东北农业大学

表达禽流感病毒 (AIV)HA和NA基因的重组禽痘病毒rFPV_HA_NA能够诱导鸡体产生 10 0 %抵抗高致病性禽流感病毒 (HPAIV)H5N1的攻击。而当鸡群已进行禽痘疫苗免疫或者感染了禽痘病毒的情况下 ,此重组疫苗的免疫效力如何 ?首先用禽痘病毒S_FP... 详细信息

表达禽流感病毒 (AIV)HA和NA基因的重组禽痘病毒rFPV_HA_NA能够诱导鸡体产生 10 0 %抵抗高致病性禽流感病毒 (HPAIV)H5N1的攻击。而当鸡群已进行禽痘疫苗免疫或者感染了禽痘病毒的情况下 ,此重组疫苗的免疫效力如何 ?首先用禽痘病毒S_FPV_0 17人工感染SPF试验鸡 ,既而在感染后的不同间隔时间接种重组疫苗 ,免疫后检测鸡群的HI抗体水平 ,同时用 10 0LD50 的HPAIVH5N1进行攻击。结果重组疫苗免疫与禽痘病毒人工感染时间间隔在 4周 (或以上 )时 ,预先感染禽痘病毒对重组疫苗的免疫效力不构成影响 ,对禽流感的保护力为 10 0 % ,而间隔时间在 1、2、3周时 ,重组疫苗的免疫保护效力则受到不同程度的影响。

关键词：禽痘病毒禽流感重组禽痘病毒疫苗免疫效力

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

杆状病毒表达SARS冠状病毒纤突蛋白及其抗原性分析

引用

中国预防兽医学报 2005年第6期27卷 549-552页

作者：王喜军胡森王清华邓国华王笑梅吴东来申之义步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018

本研究构建了SARS冠状病毒纤突蛋白(S)重组杆状病毒(rBac-SS)。SDS-PAGE及Western-Blot分析表明约190 Ku左右的重组SARS纤突蛋白(rSS)在rBac-SS感染sf9昆虫细胞获得表达,并具有特异免疫反应原性。以rBac-SS感染的昆虫细胞裂解物稀释后... 详细信息

本研究构建了SARS冠状病毒纤突蛋白(S)重组杆状病毒(rBac-SS)。SDS-PAGE及Western-Blot分析表明约190 Ku左右的重组SARS纤突蛋白(rSS)在rBac-SS感染sf9昆虫细胞获得表达,并具有特异免疫反应原性。以rBac-SS感染的昆虫细胞裂解物稀释后直接包被ELISA板,与Vero细胞培养的全病毒裂解物比较,检测SARS-CoV康复病人血清特异抗体,表现出同样的敏感性和特异性;rBac-SS感染的昆虫细胞用于间接免疫荧光,快速检测血清特异抗体反应,具有良好的敏感性和特异性。结果显示,杆状病毒表达的rSS有望替代SARS-CoV全病毒,作为安全、敏感和特异的重组诊断抗原,并为探索重组亚单位疫苗的可行性奠定基础。

关键词： SARS冠状病毒纤突蛋白重组杆状病毒 ELISA IFA

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鹅细小病毒分离株HG5/82的分子特征分析

引用

中国病毒学 2005年第1期20卷 28-32页

作者：孔宪刚李桂霞刘胜旺冉多良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

本研究应用PCR技术扩增得到GPV中国分离株HG5/82的非结构基因与结构基因,片段大小分别约为1.9kb、2.2kb的片段。将该片段分别进行克隆及序列测定,并与 GPV 国内外部分已发表的毒株及番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)的对应... 详细信息

本研究应用PCR技术扩增得到GPV中国分离株HG5/82的非结构基因与结构基因,片段大小分别约为1.9kb、2.2kb的片段。将该片段分别进行克隆及序列测定,并与 GPV 国内外部分已发表的毒株及番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)的对应序列比较。结果表明:HG5/82 株非结构蛋白(Non structure, NS)基因长为1884bp,编码627个氨基酸。HG5/82株结构蛋白基因长为2199bp,编码732个氨基酸。序列分析结果表明,我国地方分离株与国内外鹅细小病毒相比,ns基因、vp基因均表现出较高的同源性,并且具有共同的分子特征。为进一步研究GPV的基因功能、遗传变化规律及病毒分子致病机理提供了一定的分子基础。结构基因 VP3 间变异较小,这是目前GPV只有一个血清型的分子基础,为基因工程苗的研制提供了可行性。HG5/82 与番鸭细小病毒相应序列比较发现,与细小病毒其它成员相比两者具有较近的亲源关系,但这种同源性明显低于鹅细小病毒之间的同源性。

关键词：鹅细小病毒 ns基因 vp基因分子特征

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鹅细小病毒vp2基因片段在原核系统中的表达及多克隆抗体的制备

引用

中国病毒学 2005年第4期20卷 383-387页

作者：侯秋莲王静刘胜旺孔宪刚韩宗玺冉多良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

根据鹅细小病毒(Gooseparvovirus,GPV)中国分离株HG5/82基因序列,设计引物,利用PCR技术扩增出HG5/82株vp2基因,将其克隆到pMD18-T载体后,转化入感受态细胞TG1中增殖。筛选阳性质粒,将其与原核表达载体pPROEXTMHTb分别用NcoI酶切后回收... 详细信息

根据鹅细小病毒(Gooseparvovirus,GPV)中国分离株HG5/82基因序列,设计引物,利用PCR技术扩增出HG5/82株vp2基因,将其克隆到pMD18-T载体后,转化入感受态细胞TG1中增殖。筛选阳性质粒,将其与原核表达载体pPROEXTMHTb分别用NcoI酶切后回收目的片断,进行定向连接,产物转化入感受态DH5α,重组质粒经酶切和测序证实目的基因正确克隆到表达载体的预期位点且插入方向正确,构建了含有HG5/82主要结构基因vp25’端969bp片段的原核表达载体。经IPTG诱导后表达出与预期大小相符的约36kDa的融合蛋白,表达形式为包涵体。薄层扫描结果表明表达产物约占菌体总蛋白的21.4%。包涵体通过6mol/L盐酸胍裂解后,利用镍离子亲和树脂进行纯化,用纯化的分子量为36kDa的融合蛋白免疫新西兰白兔,制备兔抗鹅细小病毒部分结构蛋白多克隆抗体。Westernblot分析表明该多克隆抗体与HG5/82毒株具有反应性,说明该融合蛋白具有抗原性。

关键词：鹅细小病毒 vp2基因克隆表达多克隆抗体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

检测和鉴别猪瘟强弱毒的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)的建立

检测和鉴别猪瘟强弱毒的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)...

引用

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会

作者：李艳仇华吉王秀荣张守发朱庆虎李娜李国新童光志延边大学农学院吉林龙井133400 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 延边大学农学院吉林龙井133400 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

GenBank上登录的所有猪瘟病毒(classicalswinefever,CSFV)基因组全序列,选择高度保守区设计了一对通用引物P1和P4,并在该对引物跨越区域的内部设计了猪瘟兔化弱毒疫苗特异性引物P2及猪瘟强毒特异性引物P3,用引物P1/P4进行RT-PCR,然后用... 详细信息

GenBank上登录的所有猪瘟病毒(classicalswinefever,CSFV)基因组全序列,选择高度保守区设计了一对通用引物P1和P4,并在该对引物跨越区域的内部设计了猪瘟兔化弱毒疫苗特异性引物P2及猪瘟强毒特异性引物P3,用引物P1/P4进行RT-PCR,然后用引物P2/P3/P4进行复合套式PCR,建立了一种能区分猪瘟强弱毒的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)的鉴别诊断方法.应用该方法从猪瘟兔化弱毒株和猪瘟强毒石门株基因组中扩增出了大小分别为447bp和343bp的一条特异性片段,从两种病毒基因组混合物中扩增出了大小为447bp和343bp的两条特异性片段,但对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(RV)、乙型脑炎病毒(JEV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)的细胞培养物以及正常细胞基因组进行复合RT-nPCR扩增时均为阴性.该方法可以检测出0.04pg的病毒RNA.对从黑龙江省采集的15份疑似猪瘟病料进行了检测,结果表明,有14份类似猪瘟强毒,1份类似猪瘟弱毒.用限制性片段长度多态性(RFLP)对15份病料、猪瘟兔化弱毒株和石门株的RT-nPCR产物进行分析,发现石门株和14份黑龙江省强毒样品的扩增产物中均能被ApaⅠ切开,而猪瘟兔化弱毒株和1份黑龙江省弱毒样品无此识别位点,但有1个BanⅡ识别位点.从14份样品中抽检7份,对NS5B基因进行种系发生分析表明,它们均接近于石门株.本研究建立的复合RT-nPCR可以有效检测猪瘟病毒感染并把强毒和弱毒区分开,有助于减少未感染的免疫猪被误杀的可能,降低经济损失.

关键词：猪瘟病毒聚合酶链式反应限制性片段长度多态性基因组序列鉴别诊断

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

不同致病力禽流感病毒的细胞生长特性

不同致病力禽流感病毒的细胞生长特性

引用

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会

作者：刘丽玲王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

究用2个不同亚型的AIV感染Madin-Darbycaninekidney(MDCK)细胞,通过观察细胞病变、红细胞凝集实验、间接免疫荧光等探讨不同致病力禽流感病毒(AIV)在MDCK细胞上的生长特性;同时取这2株不同浓度(10-2～10-7)AIV在MDCK上培养72h的细胞培... 详细信息

究用2个不同亚型的AIV感染Madin-Darbycaninekidney(MDCK)细胞,通过观察细胞病变、红细胞凝集实验、间接免疫荧光等探讨不同致病力禽流感病毒(AIV)在MDCK细胞上的生长特性;同时取这2株不同浓度(10-2～10-7)AIV在MDCK上培养72h的细胞培养上清0.1mL接种于9～11日龄鸡胚尿囊腔,37℃孵育48h～72h,无菌收获尿囊液,再做红细胞凝集实验.结果显示:这2个亚型AIV感染MDCK细胞后,血凝价(HA)最高为27,表现为较低的红细胞凝集活性,高致病力禽流感病毒(HPAIV)红细胞凝集活性较低致病力禽流感病毒(LPAIV)出现的要早一些;上述2个亚型AIV的MDCK培养上清接种鸡胚48～72h后,HA较高,在25.5～210之间,而且HPAIV-A/Goose/Guangdong/1/96高于LPAIV-A/Turkey/England/N28/73.这2株AIV均可致MDCK细胞发生病变,但病变程度和病变出现的时间不同,A/Goose/Guangdong/1/96[H5N1]感染MDCK细胞后3d可见明显病变,A/Turkey/England/N28/73[H5N2]感染MDCK细胞后4～5d可见明显病变;2个亚型不同浓度(10-2～10-7)AIV的间接免疫荧光结果均为阳性.以上结果表明HPAIV和LPAIV可致MDCK细胞病变,但红细胞凝集活性较低,接种鸡胚后红细胞凝集活性显著提高.

关键词：禽流感病毒 MDCK细胞红细胞凝集活性间接免疫荧光

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：