检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2016年第5期38卷 416-419页

作者：姚秋成马建李艳飞王晓钧东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

“限制因子”这一概念最早出现于上世纪七十年代[1],虽然到目前为止也尚未对其给出明确的定义,但可以确定它们是一类细胞内可限制病毒复制并保护宿主抵御病毒感染的蛋白。近些年,在对HIV-1的研究中发现,在病毒感染的细胞内存在一些具有... 详细信息

“限制因子”这一概念最早出现于上世纪七十年代[1],虽然到目前为止也尚未对其给出明确的定义,但可以确定它们是一类细胞内可限制病毒复制并保护宿主抵御病毒感染的蛋白。近些年,在对HIV-1的研究中发现,在病毒感染的细胞内存在一些具有抑制病毒复制的蛋白,而这些蛋白被认为是可以保护宿主免受病毒感染的宿主抗病毒限制因子。

关键词：抗病毒 SAMHD1 限制因子病毒复制病毒感染免疫缺陷病毒逆转录病毒结构域脱氧鸟苷三磷酸乙型肝炎病毒

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稳定表达马TRIM5α蛋白的HEK293细胞系的建立及其抗病毒活性初步研究

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中国预防兽医学报 2016年第4期38卷 294-297,311页

作者：王翠辉那雷苏朝姚秋成蔡伟刚王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为建立稳定表达马TRIM5α(eqTRIM5α)的HEK293细胞系,并检测马TRIM5α(eqTRIM5α)的抗病毒功能,本研究将eqTRIM5α克隆于慢病毒表达载体pLPCX中,构建重组质粒pLPCX-eqTRIM5α-HA,同时构建恒河猴的pLPCX-Rh TRIM5α-HA作为阳性对照。利用... 详细信息

为建立稳定表达马TRIM5α(eqTRIM5α)的HEK293细胞系,并检测马TRIM5α(eqTRIM5α)的抗病毒功能,本研究将eqTRIM5α克隆于慢病毒表达载体pLPCX中,构建重组质粒pLPCX-eqTRIM5α-HA,同时构建恒河猴的pLPCX-Rh TRIM5α-HA作为阳性对照。利用VSV-G包装慢病毒,感染HEK293细胞,并利用嘌呤霉素筛选、纯化,建立了稳定表达eqTRIM5α和Rh TRIM5α的HEK293细胞系。经western blot和流式细胞术鉴定,该细胞系传代至20代后,仍然能够检测到eqTRIM5α和RhTRIM5α的稳定表达。将该细胞系应用于抗马传染性贫血病毒(EIAV)活性研究中,结果显示eqTRIM5α同RhTRIM5α一样均能够抑制病毒复制,表明eqTRIM5α是一种对EIAV具有较强限制作用的宿主蛋白。该细胞系的建立为进一步评价和研究eqTRIM5α的抗病毒作用和机制奠定了基础。

关键词：马TRIM5α HEK293细胞系抗病毒作用马传染性贫血病毒

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传染性法氏囊病病毒的自然重组

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微生物学报 2016年第5期56卷 740-746页

作者：祁小乐高立王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)是双RNA病毒科(Birnaviridae)的典型代表,其引起的传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是危害养禽业的一种重要免疫抑制病和致死性传染病。IBDV的自然重组给疫病... 详细信息

传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)是双RNA病毒科(Birnaviridae)的典型代表,其引起的传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是危害养禽业的一种重要免疫抑制病和致死性传染病。IBDV的自然重组给疫病防控带来了新风险。本文综述了IBDV基因组节段重组和基因内重组的主要类型,分析了其形成机制及生物学意义,提出了该类病毒遗传演化研究以及疫病综合防控的新思路。

关键词：传染性法氏囊病病毒双RNA病毒科基因重组

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肠炎沙门菌鞭毛蛋白的原核表达纯化及其多克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2016年第1期46卷 8-12页

作者：史冰田王高玲郭杰司微李涛王斌刘恒贵中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 福建农林大学动物科技学院福建福州350000

利用PCR技术成功扩增到了肠炎沙门菌鞭毛蛋白fliC基因,将其连接到原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核重组表达质粒pET-32a(+)-fliC。将pET-32a(+)-fliC转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,并在30℃下用终浓度为1mmol/L IPTG进行诱导表达9h... 详细信息

利用PCR技术成功扩增到了肠炎沙门菌鞭毛蛋白fliC基因,将其连接到原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核重组表达质粒pET-32a(+)-fliC。将pET-32a(+)-fliC转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,并在30℃下用终浓度为1mmol/L IPTG进行诱导表达9h。表达的重组蛋白通过镍离子亲和层析和分子筛的方法进行纯化,获得的蛋白用SDS-PAGE方法进行分析。对纯化的重组蛋白进行定量和内毒素测定后,用其免疫SPF鸡,制备超免疫血清。纯化的FliC蛋白与其受体之间的相互作用通过流式细胞仪进行分析。结果显示,成功扩增到了长度为1518bp的全长fliC基因,该基因编码的蛋白在30℃下以可溶性形式表达,经过镍离子亲和层析与分子筛的方法获得的FliC蛋白的纯度高,其内毒素的含量低于0.5EU/mL,并能够结合该蛋白在细胞上的受体。用纯化的重组蛋白免疫鸡获得的阳性血清的效价为1∶12 800。上述结果为进一步研究FliC蛋白的免疫学功能奠定了基础。

关键词：肠炎沙门菌鞭毛蛋白原核表达阳性血清生物活性

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类禽型H1N1猪流感病毒HA蛋白单克隆抗体的制备及特性分析

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中国兽医科学 2016年第4期46卷 491-495页

作者：杨大为隋金钰吴运谱许榜丰杨焕良陈艳乔传玲陈化兰东北农业大学黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为获得类禽型H1N1猪流感病毒（SIV）血凝素（HA）蛋白的单克隆抗体（McAb）,选取病毒A/swine/Zhejiang/245/2013（H1N1）,经增殖、纯化后作为免疫原,3次免疫BALB/c小鼠,取其脾与骨髓瘤细胞（SP2/0）进行融合,利用ELISA方法进行筛选,克... 详细信息

为获得类禽型H1N1猪流感病毒（SIV）血凝素（HA）蛋白的单克隆抗体（McAb）,选取病毒A/swine/Zhejiang/245/2013（H1N1）,经增殖、纯化后作为免疫原,3次免疫BALB/c小鼠,取其脾与骨髓瘤细胞（SP2/0）进行融合,利用ELISA方法进行筛选,克隆得到4株杂交瘤细胞株,分别命名为5H7、2H3、2G4、8D7。4株单克隆抗体的腹水ELISA效价为1×10^9以上,HI效价高于8 log2。Western-blot试验与间接免疫荧光试验结果表明,4株McAbs均可与病毒HA蛋白发生特异性的反应。本研究将为进一步建立H1亚型SIV的相关检测方法及开展HA蛋白表位的研究奠定基础。

关键词：猪流感病毒单克隆抗体类禽型H1N1

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副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素CdtB蛋白的表达及其免疫保护效力分析

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中国预防兽医学报 2016年第3期38卷 245-249页

作者：李大鹏徐胜奎刘双红李刚王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163000

为评价副猪嗜血杆菌(***)细胞致死膨胀毒素CdtB蛋白对BALB/c小鼠的免疫保护效力,本研究以***血清5型参考菌株Nagasaki基因组为模板,通过PCR扩增cdtB基因,将cdtB基因去除信号肽编码序列后克隆于pET-22b(+)载体中,构建重组质粒pET-cdtB,并... 详细信息

为评价副猪嗜血杆菌(***)细胞致死膨胀毒素CdtB蛋白对BALB/c小鼠的免疫保护效力,本研究以***血清5型参考菌株Nagasaki基因组为模板,通过PCR扩增cdtB基因,将cdtB基因去除信号肽编码序列后克隆于pET-22b(+)载体中,构建重组质粒pET-cdtB,并在*** BL21(DE3)感受态中诱导表达。结果显示,重组CdtB蛋白(rCdtB)以可溶形式表达。以纯化后的100μg蛋白免疫6周龄BALB/c小鼠,2周后进行一次加强免疫并进行血清抗体检测,其抗体效价高于1:25 600,表明该蛋白具有良好的免疫原性。淋巴细胞增殖试验结果表明rCdtB能够显著刺激小鼠T淋巴细胞增殖。此外,分别以5 LD_(50)的***血清5型HN10菌株和血清13型ZD12菌株攻毒,结果表明rCdtB可以对血清5型HN10菌株提供60%以上的免疫保护力,而对血清13型ZD12菌株可以提供50%以上的免疫保护力,这表明rCdtB可以作为重组亚单位疫苗的候选抗原蛋白。

关键词：副猪嗜血杆菌 CdtB 原核表达免疫保护

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猫杯状病毒VP1衣壳蛋白的截短表达及其抗原性分析

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中国兽医科学 2016年第1期46卷 74-78页

作者：蒋艳妹刘家森刘永相倪宏波曲连东黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为筛选猫杯状病毒(FCV)VP1衣壳蛋白特异性优势抗原片段,利用生物信息学软件DNAStar对毒株2280的VP1衣壳蛋白各分区的抗原性进行了预测。在此基础上,以FCV 2280株cDNA为模板,RTPCR扩增VP1基因的A、B、CD、E和F共5个区段,构建重组表达质... 详细信息

为筛选猫杯状病毒(FCV)VP1衣壳蛋白特异性优势抗原片段,利用生物信息学软件DNAStar对毒株2280的VP1衣壳蛋白各分区的抗原性进行了预测。在此基础上,以FCV 2280株cDNA为模板,RTPCR扩增VP1基因的A、B、CD、E和F共5个区段,构建重组表达质粒,5个基因片段在大肠杆菌中均获得高效可溶性表达。Western-blot试验证明,截短蛋白B、E、F均可与FCV阳性质控血清发生特异性反应,截短蛋白A和CD的信号弱。截短蛋白A、B、CD、E、F等量包被ELISA板,其中截短蛋白F与FCV阳性质控血清反应的D450,S/D450,N值最高,与其他蛋白之间差异显著(P<0.05)。结果表明,截短蛋白F为FCV VP1优势抗原片段,具备开发成FCV的血清学诊断试剂和新型疫苗的潜力。

关键词：猫杯状病毒 VP1蛋白原核表达抗原性

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2014年部分地区猪流行性腹泻病毒流行病学调查

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中国预防兽医学报 2016年第4期38卷 335-338页

作者：常铁城陈建飞冯力倪宏波黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了解猪流行性腹泻病毒(PEDV)的流行情况,本研究利用RT-PCR方法对2014年来自全国11个省市42个猪场的165份病料样品进行了检测。结果显示,在检测的42个猪场中,共有36个猪场显示PEDV阳性,猪场阳性率为85.71%。其中单独感染PEDV的猪场有25... 详细信息

为了解猪流行性腹泻病毒(PEDV)的流行情况,本研究利用RT-PCR方法对2014年来自全国11个省市42个猪场的165份病料样品进行了检测。结果显示,在检测的42个猪场中,共有36个猪场显示PEDV阳性,猪场阳性率为85.71%。其中单独感染PEDV的猪场有25个,占总数的59.52%;混合感染PEDV和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的猪场有2个,占总数的4.76%,PEDV和猪轮状病毒(Po RV)混合感染猪场有7个,占总数的16.67%;3种病毒均混合感染的猪场有2个,占总数的4.76%。结果表明PEDV在我国的猪腹泻病病原中仍占主导地位。对2014年分离的21株PEDV ORF3基因进行测序分析,并与Gen Bank中登录的12株国内外PEDV参考株相关序列进行遗传变异分析。这33个PEDV株的ORF3基因系统发育树显示,目前我国的PEDV现地病毒株分布在Ⅰ群中的Ⅰ-Ⅰ亚群和Ⅰ-Ⅲ亚群。

关键词：猪流行性腹泻病毒流行病学调查 ORF3基因序列分析

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猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP4切割IKKα抑制β干扰素产生的研究

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中国预防兽医学报 2016年第6期38卷 425-428页

作者：李长尧王胜男李江南黄丽翁长江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原监测与流行病学研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

IKK复合体由IKKα、IKKβ和IKKγ3个亚基组成。早期研究结果表明催化亚基IKKα在调节β干扰素(IFNβ)产生方面发挥重要作用。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染及其非结构蛋白4(NSP4)表达能够显著抑制宿主的天然免疫反应。本研究结果显... 详细信息

IKK复合体由IKKα、IKKβ和IKKγ3个亚基组成。早期研究结果表明催化亚基IKKα在调节β干扰素(IFNβ)产生方面发挥重要作用。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染及其非结构蛋白4(NSP4)表达能够显著抑制宿主的天然免疫反应。本研究结果显示PRRSV NSP4可以与IKKα结合,并能够切割IKKα。而且,丝氨酸蛋白酶活性是PRRSV NSP4切割IKKα所必需的,其中NSP4中的3个蛋白酶活性位点(His^(39)、Asp^(64)和Ser^(118))中任何一个发生突变均无法切割IKKα。进一步研究证明,NSP4通过切割IKKα抑制了NF-κB和IFNβ启动子的活性。本研究结果表明,PRRSV NSP4除了通过切割NEMO和MAVS抑制NF-κB和IFNβ启动子活性以外,也可以通过切割IKKα抑制机体NF-κB的激活和IFNβ的表达。这些研究结果为阐明PRRSV逃逸宿主天然免疫提供了一个新的证据,为深入研究PRRSV的致病机理奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP4 IKKα IFNβ NF-κB信号通路

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血红蛋白β亚基对猪流行性腹泻病毒增殖抑制作用的研究

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中国预防兽医学报 2016年第8期38卷 605-608页

作者：徐云飞郭龙军张健时洪艳冯力任慧英王玉娥青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本实验室前期蛋白质组学研究结果显示,猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染非洲绿猴肾细胞(Vero-E6)后,导致血红蛋白β亚基(HBB)的表达量升高。为进一步从蛋白水平验证前期的实验结果并研究HBB对PEDV增殖作用的影响,本研究将PEDV感染Vero-E6细胞... 详细信息

本实验室前期蛋白质组学研究结果显示,猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染非洲绿猴肾细胞(Vero-E6)后,导致血红蛋白β亚基(HBB)的表达量升高。为进一步从蛋白水平验证前期的实验结果并研究HBB对PEDV增殖作用的影响,本研究将PEDV感染Vero-E6细胞,感染24 h后经western blot检测结果表明,PEDV感染能够促进HBB的表达。进一步采用RT-PCR从Vero-E6细胞总RNA中扩增HBB基因并将其克隆至真核表达载体pCAGGS中,构建HBB真核表达重组质粒pCAGGS-HBB,并将其转染至Vero-E6细胞。经western blot检测结果表明,HBB在Vero-E6细胞中获得高效表达。在HBB过表达后感染PEDV,经western blot、TCID_(50)及荧光定量PCR检测结果表明,过表达HBB能够显著抑制PEDV的增殖。本研究对于进一步阐明HBB对PEDV增殖作用的影响机制提供了实验依据。

关键词：血红蛋白β亚基猪流行性腹泻病毒病毒增殖

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