检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2016年第6期38卷 500-502页

作者：王胜男刘园园胡亮李江南翁长江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原监测与流行病学研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

NLRP3蛋白为核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)样受体(NLRs)家族中含有脓素(Pyrin)结构域3的蛋白,它能够与调亡相关斑点样蛋白(ASC)以及半胱氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)组成炎性小体复合物,切割pro-IL-1β和pro-IL-18使其成为成熟的IL-1β和I... 详细信息

NLRP3蛋白为核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)样受体(NLRs)家族中含有脓素(Pyrin)结构域3的蛋白,它能够与调亡相关斑点样蛋白(ASC)以及半胱氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)组成炎性小体复合物,切割pro-IL-1β和pro-IL-18使其成为成熟的IL-1β和IL-18参与炎性反应。猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的RNA能够被DDX19A解旋酶识别并激活NLRP3炎性小体,诱导炎症反应。为研究PRRSV RNA激活NLRP3炎症小体后DDX19A与NLRP3的亚细胞定位情况,本研究以PRRSV Hu N4株感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)的总RNA制备的c DNA为模板,扩增了猪nlrp3基因。将其在原核细胞中表达,并采用表达的NLRP3免疫BALB/c小鼠制备了鼠源抗NLRP3多克隆抗体。此外,提取PRRSV的RNA,转染于PAMs中,36 h后分别采用抗DDX19A和抗NLRP3的多克隆抗体进行检测,激光共聚焦试验结果显示:未转染PRRSV RNA的细胞中,DDX19A和NLRP3在PAMs中呈弥散表达,无共定位现象出现,而在转染PRRSV RNA的PAMs中DDX19A和NLRP3在细胞质中呈点状分布并出现共定位现象。本研究为阐明PRRSV感染激活NLRP3炎性小体的分子机制奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒多克隆抗体 NLRP3炎症小体 DDX19A

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两株H1亚型禽流感病毒的全基因组序列测定及其对小鼠的感染性研究

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中国预防兽医学报 2016年第4期38卷 271-274页

作者：彭志崔鹏飞葛叶关立峥肖丽余兴龙邓国华陈化兰湖南农业大学湖南长沙410128 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了解H1亚型禽流感病毒(AIV)的生物学特性,本研究对2015年从我国南方活禽市场分离到的两株鸭源H1亚型AIV A/duck/Hu N/S10153/2015(H1N1)(简称Hu N/153/15)和A/duck/JX/S11233/2015(H1N3)(简称JX/1233/15)进行全基因组序列的测定及进化分析,并对其进行BALB/c小鼠的感染性试验。氨基酸序列分析显示:两株病毒HA裂解位点均只含有一个碱性氨基酸,具有低致病性AIV(LPAIV)的分子特征,其中Hu N/153/15的内部基因片段来源复杂,呈现明显的遗传多样性。小鼠感染性试验结果显示,Hu N/153/15能够在小鼠的肺脏和鼻甲中有效复制,而JX/1233/15在小鼠的各个脏器中均未检测到病毒的复制,表明其暂时还不具备感染哺乳动物的能力。本研究结果为H1亚型AIV的持续性监测和相关生物学特性的研究奠定基础。

关键词：禽流感病毒 H1N1 H1N3 进化分析感染性

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检测犬免疫球蛋白G的夹心ELISA方法的建立

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中国预防兽医学报 2016年第2期38卷 142-145页

作者：王正阳刘平黄梁琳陈建飞吕世明崔尚金贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立犬免疫球蛋白G(Ig G)的检测方法,本研究以兔抗犬Ig G Fc段多克隆抗体为包被抗体,过氧化酶标记的兔抗犬Ig G(全分子)多克隆抗体为检测抗体,建立了双抗体夹心ELISA定量检测方法,并采用Protein A方法从犬血清中纯化犬Ig G作为ELISA... 详细信息

为建立犬免疫球蛋白G(Ig G)的检测方法,本研究以兔抗犬Ig G Fc段多克隆抗体为包被抗体,过氧化酶标记的兔抗犬Ig G(全分子)多克隆抗体为检测抗体,建立了双抗体夹心ELISA定量检测方法,并采用Protein A方法从犬血清中纯化犬Ig G作为ELISA检测标准品。该检测方法与小鼠、兔、马、牛、鸡及羊常见动物血清均无交叉反应,特异性好;最低检测下限可以达到4.8 ng/m L,敏感性较高。以本研究建立的ELISA方法检测犬细小阳性血清和阴性血清,阳性血清Ig G含量明显高于阴性血清;检测转染犬源化抗体序列重组质粒的细胞培养液上清,重组质粒在96 h表达量达到峰值。本研究为进一步建立稳定表达犬源化抗体的细胞系提供了特异性的定量检测方法。

关键词：犬免疫球蛋白G 双抗体夹心ELISA 反应条件检测

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母源抗体对腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2免疫效力的影响

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中国预防兽医学报 2016年第6期38卷 484-488页

作者：雷建林杜明亮孙元夏水利王异民向广韬胡永浩仇华吉甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本实验室前期构建了具有标记特征的腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2,效力评价结果表明该嵌合疫苗的免疫原性与C株相当,并且能够完全提供对猪瘟病毒(CSFV)强毒石门株的攻毒保护。为进一步确定该疫苗的免疫效力是否受其... 详细信息

本实验室前期构建了具有标记特征的腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2,效力评价结果表明该嵌合疫苗的免疫原性与C株相当,并且能够完全提供对猪瘟病毒(CSFV)强毒石门株的攻毒保护。为进一步确定该疫苗的免疫效力是否受其母源抗体(MDA)的干扰及制定合理有效的免疫程序,本研究将rAdV-SFV-E2疫苗株免疫妊娠期的母猪后检测其抗体诱导水平,然后将该疫苗株免疫具有其母源抗体的30日龄新生仔猪及无母源抗体仔猪(n=4),攻毒后,监测所有仔猪的抗体水平、临床症状、病毒血症、病理学等。结果显示,有无母源抗体的仔猪均能够产生高水平的特异性E2抗体及抗CSFV的中和抗体,而且攻毒后未出现猪瘟特异性临床症状,包括发热、食欲减退、腹泻及死亡等;对照组仔猪均出现了明显的临床症状,其死亡率为100%。本研究证明rAdV-SFV-E2疫苗的免疫效力未受其母源抗体的显著干扰,免疫30日龄的仔猪后能够完全抵抗致死性CSFV强毒石门株的攻击。

关键词：猪瘟嵌合载体疫苗免疫效力母源抗体

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莱斯顿型埃博拉病毒GP蛋白嵌合型水泡性口炎病毒的构建与免疫原性研究

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中国预防兽医学报 2016年第6期38卷 448-452页

作者：祖述龙宋继军邵钰刘任强温志远周微微王雪莲葛金英步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040

莱斯顿型埃博拉病毒(REBOV)可以感染猪和非人类灵长类动物并引起动物发病和死亡,为制备安全、有效的REBOV重组病毒后备疫苗,本研究利用表达绿色荧光蛋白的水泡性口炎病毒(r VSV-EGFP)印第安纳弱毒疫苗株反向遗传操作系统,拯救出了REBOV... 详细信息

莱斯顿型埃博拉病毒(REBOV)可以感染猪和非人类灵长类动物并引起动物发病和死亡,为制备安全、有效的REBOV重组病毒后备疫苗,本研究利用表达绿色荧光蛋白的水泡性口炎病毒(r VSV-EGFP)印第安纳弱毒疫苗株反向遗传操作系统,拯救出了REBOV GP蛋白嵌合型VSV(r VSV△G*GFP-REBOV-GP),并对其生物学特性进行分析,评估其作为REBOV活疫苗的安全性和有效性。激光共聚焦和western blot试验显示REBOV GP蛋白在嵌合病毒中获得正确表达;病毒生长动力学结果显示,r VSV△G*GFP-REBOV-GP与亲本株具有不同的生长特性;将r VSV△G*GFP-REBOV-GP接种小鼠,未引起小鼠发病,体重增长趋势与对照组一致,表明嵌合病毒具有良好的安全性;中和试验结果表明该嵌合病毒能够诱导小鼠产生针对REBOV GP的高滴度中和抗体。本研究制备的r VSV△G*GFP-REBOV-GP为进一步的动物免疫实验奠定了基础。

关键词：水泡性口炎病毒莱斯顿型埃博拉病毒 GP蛋白

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猪链球菌2型SSU05-1311蛋白的表达纯化和多克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2016年第3期46卷 310-314页

作者：杨宝玲陈福广谢芳刘思国沈国顺张跃灵沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110866 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

以猪链球菌2型菌株05ZYH 33的基因组作为模板,PCR扩增SSU 05-1311(简称ssFbp)基因,克隆到表达载体pET22b中,构建重组质粒pET22b-ssFbp。该重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达SsFbp蛋白,并通过亲和层析纯化。纯化的SsFbp... 详细信息

以猪链球菌2型菌株05ZYH 33的基因组作为模板,PCR扩增SSU 05-1311(简称ssFbp)基因,克隆到表达载体pET22b中,构建重组质粒pET22b-ssFbp。该重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达SsFbp蛋白,并通过亲和层析纯化。纯化的SsFbp蛋白免疫BALB/c雌鼠,制备多克隆抗体。结果显示,Ss Fbp蛋白以可溶形式表达,分子质量大小为112ku。每升培养物获得SsFbp重组蛋白20 mg,纯度大于95%。免疫筛选后获得了ss Fbp蛋白的多克隆抗体。Western-blot结果显示,多克隆抗体能特异识别05ZYH33细胞壁蛋白组分中的SsFbp蛋白。本研究为进一步研究SsFbp蛋白的功能及其在致病性中的作用奠定了基础。

关键词：猪链球菌2型 SsFbp蛋白表达和纯化多克隆抗体

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Asia1型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立

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中国预防兽医学报 2016年第3期38卷 226-229页

作者：梁伟峰周国辉刘文铭李超斯刘云于力东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊病创新团队黑龙江哈尔滨150001

为建立Asia1型口蹄疫(FMD)快速病原学诊断方法,本研究采用纯化的Asia1型口蹄疫病毒(FMDV)免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合并筛选到一株能够稳定分泌抗Asia l型FMDV单克隆抗体(MAb)2E10。经间接免疫荧光试验... 详细信息

为建立Asia1型口蹄疫(FMD)快速病原学诊断方法,本研究采用纯化的Asia1型口蹄疫病毒(FMDV)免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合并筛选到一株能够稳定分泌抗Asia l型FMDV单克隆抗体(MAb)2E10。经间接免疫荧光试验特异性鉴定,2E10为FMDV型特异型MAb。其抗体亚类为Ig G1/资,杂交瘤细胞上清和腹水抗体效价分别为1颐256和1颐104,相对亲和力常数为2.5 mol/L。在此基础上,以本实验室前期制备的MAb 2D8为包被抗体,以HRP标记的MAb 2E10为检测抗体建立了检测Asia1型FMDV抗原的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法。该方法针对FMDV细胞毒的最低检出量为103TCID50,对O型FMDV、A型FMDV、牛肠道病毒、牛呼肠孤病毒及牛传染性鼻气管炎病毒检测结果均为阴性。本研究建立的Asia1型FMDV DAS-ELISA方法为Asia1型FMD病原学诊断试剂盒的研发奠定了基础。

关键词： Asia1型口蹄疫病毒单克隆抗体双抗体夹心ELISA

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同时接种伪狂犬病活疫苗Bartha-K61株对嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2免疫效力的影响

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中国预防兽医学报 2016年第8期38卷 642-645页

作者：夏水利孙元雷建林杜明亮丛鑫杜恩岐仇华吉西北农林科技大学动物医学学院陕西杨凌712100 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本实验室前期研究中构建了一种新型的猪瘟标记疫苗—腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗(rAdV-SFV-E2),并证实该疫苗具有与C株猪瘟疫苗相同的免疫效力。为评价该疫苗与伪狂犬病疫苗(Bartha-K61)联合免疫是否存在相互干扰现象,本研究... 详细信息

本实验室前期研究中构建了一种新型的猪瘟标记疫苗—腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗(rAdV-SFV-E2),并证实该疫苗具有与C株猪瘟疫苗相同的免疫效力。为评价该疫苗与伪狂犬病疫苗(Bartha-K61)联合免疫是否存在相互干扰现象,本研究将这两种疫苗联合免疫健康仔猪(n=5),同时设立单独免疫对照和阴性对照,免疫后利用CSFV强毒石门株进行攻击,并通过抗体反应、临床症状、病毒血症、病理学及组织病理学变化等指标对疫苗免疫效果进行评价。结果显示,rAdV-SFV-E2和Bartha-K61联合免疫后与单独免疫rAdV-SFV-E2均能够对致死性CSFV强毒的攻击提供完全保护(5/5存活),表现为无猪瘟特异性临床症状、无病毒血症、无病理变化和组织病理学变化。该研究证实,rAdV-SFV-E2和伪狂犬病疫苗Bartha-K61同时免疫对rAdV-SFV-E2的免疫效果无干扰现象。

关键词：猪瘟嵌合载体疫苗伪狂犬病疫苗联合免疫评价

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SPF鸡不同生长阶段粪便菌群组成及多样性研究

SPF鸡不同生长阶段粪便菌群组成及多样性研究

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2017年第十五届中国北方实验动物科技年会

作者：周妍刁晨曦张圆圆于海波陆涛峰赵丽丽陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室实验动物与比较创新团队东北农业大学生命科学学院牡丹江师范学院生命科学与技术学院

目的提供SPF鸡不同生长阶段肠道菌群的组成及多样性数据。方法采集10日龄、12周龄、23周龄和52周龄SPF鸡粪便,利用IlluminaHiSeq2500高通量测序方法,对样品16S rRNA的两个高变区(V3-V4)进行测序分析,并进行了α多样性指数、β多样性指... 详细信息

目的提供SPF鸡不同生长阶段肠道菌群的组成及多样性数据。方法采集10日龄、12周龄、23周龄和52周龄SPF鸡粪便,利用IlluminaHiSeq2500高通量测序方法,对样品16S rRNA的两个高变区(V3-V4)进行测序分析,并进行了α多样性指数、β多样性指数和粪便群落特征分析。结果四个生长阶段粪便样品菌群具有相似的较高的丰富度和良好的均匀度,物种多样性无显著差异(P>0.05);厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)和拟杆菌门(Bacteroidetes)丰度占95%以上;乳杆菌属(上actobacillus)、链球菌属(Streptococcus)、拟杆菌属(Bacteroides)、肠球菌属(Enterococcus)为优势菌属,不同时期丰度差异达显著水平(P<0.05)。结论四个生长阶段菌群组成多样,且优势菌群主要为有益菌。该实验结果能够为SPF鸡品质评定、健康监测和安全性评价提供依据。

关键词： SPF鸡不同生长阶段粪便菌群 16s rRNA Illumina HiSeq 2500高通量测序

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湖南洞庭湖区12株H9N2亚型AIV全基因序列的进化分析

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2016年第3期44卷 1-10页

作者：黄建龙谭丹王昌建张朝阳何世成朱春霞汪洪冰邓国华刘道新湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙410014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

【目的】从分子生物学角度了解H9N2亚型禽流感病毒在湖南省洞庭湖区的变异特点和进化规律。【方法】对近年来洞庭湖区分离的12株H9N2亚型禽流感毒株的全基因进行分段克隆测序,应用Mega 5软件包对病毒基因进行多序列比对和进化树的绘制... 详细信息

【目的】从分子生物学角度了解H9N2亚型禽流感病毒在湖南省洞庭湖区的变异特点和进化规律。【方法】对近年来洞庭湖区分离的12株H9N2亚型禽流感毒株的全基因进行分段克隆测序,应用Mega 5软件包对病毒基因进行多序列比对和进化树的绘制与分析。【结果】12株H9N2亚型禽流感毒株HA裂解位点均没有多个连续的碱性氨基酸插入,属于低致病性病毒。12株H9N2亚型禽流感病毒HA、NA基因进化比较同步,均处于DK/HK/Y280/97分支,而6个内部基因(M、PB2、PB1、PA、NA、NS)与高致病性禽流感H5亚型毒株呈现不同程度重组现象,且与H7N9亚型毒株基因的核苷酸同源性很高,很有可能为其提供内部基因。【结论】湖南省洞庭湖地区H9亚型禽流感病毒的遗传演化较为复杂,存在广泛的基因重组现象。

关键词： H9N2亚型禽流感遗传进化洞庭湖区湖南省

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