检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2016年第7期38卷 576-579页

作者：刘双红李大鹏徐胜奎谢芳李刚李婷孙斌王春来黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040

为建立一种快速检测副猪嗜血杆菌(HPS)的血清学方法,本实验采用重组表达的HPS细胞致死膨胀毒素B亚基蛋白(r Cdt B)作为包被抗原,并对各反应条件进行优化,建立了检测HPS血清抗体的间接ELISA方法。以该方法检测HPS阳性血清和其他猪病病原... 详细信息

为建立一种快速检测副猪嗜血杆菌(HPS)的血清学方法,本实验采用重组表达的HPS细胞致死膨胀毒素B亚基蛋白(r Cdt B)作为包被抗原,并对各反应条件进行优化,建立了检测HPS血清抗体的间接ELISA方法。以该方法检测HPS阳性血清和其他猪病病原阳性血清,除了HPS阳性血清呈阳性外,其余均为阴性,表明该方法特异性良好。批内重复和批间重复的最大变异系数分别小于7%和8%。此外,将Cdt B-ELISA方法与商品化试剂盒Bio Chek HPS-Opp A间接ELISA抗体检测方法对背景明确的116份HPS阳性血清和112份HPS阴性血清进行检测,商品化试剂盒阳性符合率为25%,阴性血清符合率为100%,总符合率为62%,其中Cdt B-ELISA方法对阳性血清的检出率高于商品化试剂盒。应用Cdt B-ELISA方法检测330份临床猪血清样品,结果显示,HPS抗体阳性检出率为11.8%。该方法可以用于HPS的临床检测,为HPS流行病学调查和防控提供了一种快速有效的检测方法。

关键词：副猪嗜血杆菌 rCdtB 间接ELISA

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中国兽医科学 2016年第2期46卷 258-263页

作者：邵家日王显兵汪洋李媛刘素丽王琪陈莹高丽萍周长平辛九庆吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物支原体病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学资源与环境学院黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为研究牛支原体脂质相关膜蛋白(LAMPs)激活MAPK信号通路诱导EBL细胞释放IL-1β的分子机制,用牛支原体脂质相关膜蛋白刺激EBL细胞,发现牛支原体LAMPs能够诱导IL-1β的表达。进一步研究表明,p38 MAPK,ERK MAPK和JNK MAPK信号通路在牛支原... 详细信息

为研究牛支原体脂质相关膜蛋白(LAMPs)激活MAPK信号通路诱导EBL细胞释放IL-1β的分子机制,用牛支原体脂质相关膜蛋白刺激EBL细胞,发现牛支原体LAMPs能够诱导IL-1β的表达。进一步研究表明,p38 MAPK,ERK MAPK和JNK MAPK信号通路在牛支原体LAMPs刺激EBL细胞诱导IL-1β表达中起重要作用。过表达TLR1、TLR2,LAMPs刺激EBL细胞,IL-1β的表达量增加。进一步研究表明,TLR接合体髓样化初级反应因子88(My D88)和IRAK4在LAMPs刺激IL-1β诱导中起重要作用。结果表明,牛支原体LAMPs刺激EBL由TLR2、TLR1、MyD88和IRAK4 MAPK信号通路细胞诱导IL-1β的表达。

关键词：牛支原体脂质相关膜蛋白 MAPK信号通路

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大肠杆菌肽基脯氨酰顺反异构酶slyD基因缺失株的构建及生物学特性研究

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中国预防兽医学报 2016年第1期38卷 6-10页

作者：周薇刘松艳王曼宇衣菲田秋丰陈志宝刘思国于申业黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

肽基脯氨酰顺反异构酶(PPIases)广泛存在于原核生物中,主要生物功能是专一性催化已磷酸化的丝/苏-脯氨酞顺/反异构。为研究大肠杆菌PPIases sly D基因缺失对其生物学特性的影响,本研究利用改进的Red重组方法构建大肠杆菌BL21株的sly D... 详细信息

肽基脯氨酰顺反异构酶(PPIases)广泛存在于原核生物中,主要生物功能是专一性催化已磷酸化的丝/苏-脯氨酞顺/反异构。为研究大肠杆菌PPIases sly D基因缺失对其生物学特性的影响,本研究利用改进的Red重组方法构建大肠杆菌BL21株的sly D缺失株,命名为BL21Δsly D;并通过突变株的形态学变化、生长特性、生化代谢特性、耐酸性、耐渗透压能力、耐温度缺氧能力对其进行鉴定。结果表明,缺失株生长速率、耐高温缺氧能力与亲本株相比差异不显著,然而突变株的耐酸性与耐渗透压能力则显著低于亲本株(p<0.01),表明大肠杆菌PPIases sly D基因可能影响双组份调控系统的调节作用。本研究构建的大肠杆菌sly D基因缺失株BL21Δsly D为进一步研究大肠杆菌sly D基因的功能奠定了基础。

关键词：大肠杆菌肽基脯氨酰顺反异构酶生物学特性环境压力

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中国预防兽医学报 2016年第2期38卷 87-91页

作者：王琪汪洋李媛刘素丽邵家日陈莹高丽萍周长平李春艳辛九庆东北农业大学资源与环境学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物支原体病研究室黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是经典的细胞信号通路之一,主要包括JNK、P38、ERK 3条信号途径。为明确丝状支原体丝状亚种(Mmm)的脂质相关蛋白(LAMPs)是通过MAPK信号通路诱导胎牛肺细胞(EBL)IL-1β的分泌,本研究通过荧光定量PCR检测... 详细信息

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是经典的细胞信号通路之一,主要包括JNK、P38、ERK 3条信号途径。为明确丝状支原体丝状亚种(Mmm)的脂质相关蛋白(LAMPs)是通过MAPK信号通路诱导胎牛肺细胞(EBL)IL-1β的分泌,本研究通过荧光定量PCR检测IL-1β的m RNA表达水平,结果显示LAMPs可以诱导EBL细胞分泌IL-1β,并确定Mmm的LAMPs刺激EBL细胞的最佳时间为6 h,最佳剂量为1μg/m L;将JNK、P38及ERK抑制剂分别加入培养的EBL细胞后,IL-1β的m RNA表达水平均受到显著抑制(p<0.05);将p CMV-HA-TLR2转染EBL细胞使其过表达和抗体封闭TLR2两种方式处理,并采用JNK、P38及ERK抑制剂分别处理EBL细胞,经检测过表达TLR2实验组的IL-1βm RNA表达水平上调,然而抗体封闭TLR2实验组的IL-1βm RNA表达水平下调,表明TLR2通过MAPK信号通路对IL-1β的分泌进行调控;采用牛IL-1β的ELISA试剂盒对细胞上清液中IL-1β浓度的检测结果显示,其与IL-1β的m RNA表达水平变化趋势一致。上述结果表明Mmm的LAMPs可以诱导EBL细胞,激活TLR2依赖的MAPK信号通路,从而引起IL-1β的分泌。

关键词：丝状支原体丝状亚种脂质相关蛋白 MAPK信号通路 IL-1β

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2009年～2012年内蒙古地区狂犬病毒分离株遗传变异分析与免疫保护效果研究

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中国预防兽医学报 2016年第6期38卷 458-462页

作者：周微微王金玲祖述龙王雪莲葛金英张立娜步志高东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010010

为了解内蒙古自治区狂犬病毒(RABV)流行株的遗传进化情况,本研究于2009年~2012年,在内蒙古地区分离得到16株RABV,测序后获得16条N基因和G基因序列。序列分析表明N基因核苷酸相似性为86.5%~100%,G基因核苷酸相似性为83.9%~100%。N基因和... 详细信息

为了解内蒙古自治区狂犬病毒(RABV)流行株的遗传进化情况,本研究于2009年~2012年,在内蒙古地区分离得到16株RABV,测序后获得16条N基因和G基因序列。序列分析表明N基因核苷酸相似性为86.5%~100%,G基因核苷酸相似性为83.9%~100%。N基因和G基因核苷酸遗传进化分析显示本次分离到的病毒株均属于基因I型,其中12株G蛋白V^(332)I突变属于亚洲Asian谱系,其他4株G蛋白T^(36)A突变属于Cosmopolitan谱系,为内蒙古主要流行的两个谱系。CTN-1(Asian谱系)和ERA(Cosmopolitan谱系)疫苗免疫BALB/c小鼠对分离株NM4(Asian谱系)和NM8(Cosmopolitan谱系)的攻击均能够提供有效保护。本研究初步证实了目前疫苗能够有效地保护人和动物对RABV的感染。

关键词：狂犬病毒遗传进化分析免疫保护

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鸡毒支原体S6株P25蛋白粘附特性的研究

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中国预防兽医学报 2016年第2期38卷 105-110页

作者：高利萍李媛周长平刘素丽邵家日王琪陈莹王显兵辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物支原体病创新团队黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学动物科技学院吉林长春130118 东北农业大学资源与环境学院黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

鸡毒支原体(MG)粘附蛋白是MG定植于宿主细胞表面的关键因子,并在MG致病过程中发挥着重要作用。为筛选并鉴定MG新的粘附蛋白,本研究根据生物信息学软件对MG S6基因组全部序列进行分析,选取了MG的一个假定膜蛋白基因,其大小为675 bp(编码... 详细信息

鸡毒支原体(MG)粘附蛋白是MG定植于宿主细胞表面的关键因子,并在MG致病过程中发挥着重要作用。为筛选并鉴定MG新的粘附蛋白,本研究根据生物信息学软件对MG S6基因组全部序列进行分析,选取了MG的一个假定膜蛋白基因,其大小为675 bp(编码225个氨基酸,分子量约25 ku,将其命名为P25)。通过MG膜蛋白组分的提取及western blot鉴定,结果显示P25分布在MG膜的表面。利用PCR扩增MG p25基因并通过定点突变将其序列中TGA终止密码子突变为TGG(编码色氨酸),通过原核表达其编码的重组P25蛋白(r P25),并以r P25作为免疫原免疫兔子制备高免血清。激光共聚焦显微镜观察显示r P25和MG均对鸡胚成纤维细胞系(DF-1)具有明显的粘附作用,而ELISA和流式细胞仪检测结果则表明r P25和MG对DF-1细胞的粘附为特异性粘附,其中r P25抗血清可以明显抑制r P25和MG对DF-1细胞的粘附作用,从而证明P25为MG的一个粘附相关蛋白。

关键词：鸡毒支原体 DF-1细胞激光共聚焦 ELISA 流式细胞仪

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肠炎沙门菌延伸因子EF-Tu缺失株对环境压力的应答变化

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中国预防兽医学报 2016年第1期38卷 31-34页

作者：刘松艳周薇司微王曼宇张童利刘思国于申业中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院黑龙江大庆163319 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

延伸热不稳定因子(EF-Tu)广泛存在于原核生物中,主要生物功能是在蛋白质合成过程中负责肽链的延伸。为研究肠炎沙门菌EF-Tu的tuf A基因缺失对环境压力的应答变化,本研究利用改进的Red同源重组方法构建肠炎沙门氏菌SM6株的tuf A缺失株,... 详细信息

延伸热不稳定因子(EF-Tu)广泛存在于原核生物中,主要生物功能是在蛋白质合成过程中负责肽链的延伸。为研究肠炎沙门菌EF-Tu的tuf A基因缺失对环境压力的应答变化,本研究利用改进的Red同源重组方法构建肠炎沙门氏菌SM6株的tuf A缺失株,命名为SM6Δtuf A,并鉴定缺失株的形态学变化,分析耐酸性、渗透应力、温度缺氧应力、氧化应力的改变。结果表明缺失株对酸性条件及升温缺氧的耐受与亲本株相似;对渗透压的耐受稍强于亲本株,但差异不显著;对氧化压力的耐受显著弱于亲本株。本研究构建的肠炎沙门氏菌tuf A基因缺失株SM6Δtuf A,为进一步研究EF-Tu在沙门氏菌的生物学和致病机制中的作用奠定了基础。

关键词：延伸因子EF-Tu Red同源重组沙门氏菌生物学特性环境压力

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一株虹鳟嗜冷益生菌Aeromonas popoffii的分离鉴定及体外抗病毒特性研究

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中国预防兽医学报 2016年第1期38卷 40-44页

作者：王宏磊崔红玉卢彤岩徐黎明刘淼王云峰王笑梅东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病创新团队黑龙江哈尔滨150001 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所黑龙江哈尔滨150070 哈尔滨动物生物制品国家工程研究中心有限公司黑龙江哈尔滨150028

为分离鉴定冷水鱼类的益生菌,本研究从健康的冷水鱼虹鳟幼鱼的肠道、胆囊等部位分离得到75株嗜冷耐低温生长菌株,经过耐低温温度梯度筛选及体外抗菌试验初步筛选出一株虹鳟嗜冷益生菌株,经革兰氏染色及API 50 CH生化鉴定、16S r DNA测... 详细信息

为分离鉴定冷水鱼类的益生菌,本研究从健康的冷水鱼虹鳟幼鱼的肠道、胆囊等部位分离得到75株嗜冷耐低温生长菌株,经过耐低温温度梯度筛选及体外抗菌试验初步筛选出一株虹鳟嗜冷益生菌株,经革兰氏染色及API 50 CH生化鉴定、16S r DNA测序比对,鉴定为Aeromonas popoffii,将其命名为HL60分离株。通过耐胆酸游离酸试验、耐酸试验、体外抑菌试验和体外对鲤鱼上皮细胞(EPC)增殖影响试验及体外抗病毒(传染性造血器官坏死病病毒)试验,结果表明*** HL60分离株具有良好的益生特性及体外抗病毒活性。本研究分离获得的*** HL60分离株为冷水鱼益生菌株活载体疫苗开发及应用奠定了基础。

关键词：益生菌嗜冷菌抗病毒特性益生特性

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表达抗菌肽cecropin-XJ转基因小鼠模型的鉴定分析

表达抗菌肽cecropin-XJ转基因小鼠模型的鉴定分析

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第十二届中国实验动物科学年会

作者：王伟尹海畅臧凤霞周长良陈洪岩孟庆文中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江哈尔滨150001

目的本研究鉴定分析制备的表达抗菌肽cecropin-XJ转基因小鼠，为利用转基因小鼠模型探讨抗菌肽的生物学功能及其抗菌机制奠定基础。方法在成功获得转基因小鼠的基础上，运用PCR、Southern blot、RT-PCR、Western blot方法对转基因小... 详细信息

目的本研究鉴定分析制备的表达抗菌肽cecropin-XJ转基因小鼠，为利用转基因小鼠模型探讨抗菌肽的生物学功能及其抗菌机制奠定基础。方法在成功获得转基因小鼠的基础上，运用PCR、Southern blot、RT-PCR、Western blot方法对转基因小鼠进行鉴定评价，选取阳性转基因小鼠与野生型(WT)小鼠杂交繁育F1代转基因小鼠。结果经PCR检测证实在转基因小鼠尾、肺、肝、心脏和脾脏均有外源基因的整合;RT-PCR证实抗菌肽基因在小鼠各组织细胞中转录;尾组织中Western blot同样证实了外源基因在转基因小鼠体内表达;共获得21只F0代小鼠，其中有5只小鼠在DNA、RNA以及蛋白水平的检测为阳性。结论本研究建立了转基因动物的检测方法，为进一步在体内评价抗菌肽抑菌活性奠定了基础。

关键词： cecropin-XJ 转基因小鼠模型

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TLR3基因敲除对小鼠免疫功能影响的初步分析

TLR3基因敲除对小鼠免疫功能影响的初步分析

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2016第十四届中国北方实验动物科技年会

作者：姜雪婷王伟李永青庞中兵孙海阳陈洪岩孟庆文中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江哈尔滨 150001

目的：通过对TLR3基因敲除小鼠免疫相关指标分析,研究TLR3基因敲除对小鼠免疫功能影响,为应用敲除小鼠模型研究TLR3在病毒感染引发的天然免疫反应中的作用及病毒致病的分子机制奠定基础. 方法：PCR、测序分析敲除小鼠基因型;利用聚... 详细信息

目的：通过对TLR3基因敲除小鼠免疫相关指标分析,研究TLR3基因敲除对小鼠免疫功能影响,为应用敲除小鼠模型研究TLR3在病毒感染引发的天然免疫反应中的作用及病毒致病的分子机制奠定基础. 方法：PCR、测序分析敲除小鼠基因型;利用聚肌胞苷酸(Poly I：C)处理24h,通过自动血液计数仪测量分析外周血中淋巴细胞、中性粒细胞、单核细胞百分含量;Real-TimePCR检测TLR3信号通路中TRIF、IFN-β、Mx、IL-6和TNF-α相对表达情况;流式细胞术分析外周血中树突状细胞(CD86)、NK细胞(CD49)、淋巴细胞(CD3、CD8)比例变化. 结果：本实验所用TLR3基因敲除小鼠为纯合子(TLR3-/-),测序表明TLR3基因缺失13个碱基;在Poly I：C刺激下,TLR3-/-小鼠较WT小鼠外周血中淋巴细胞百分比显著降低,单核细胞中性粒细胞显著升高,脾脏中TRIF、IFN-β、Mx、IL-6和TNF-α表达量显著降低,外周血中CD86+细胞比例显著降低,CD49+细胞未见显著差异,细胞毒性T淋巴细胞(CD3+CD8+)显著降低. 结论：在Poly I：C刺激条件下,TLR3基因缺失引起其下游信号转导通路变化,影响IFN-β基因表达及炎性因子的释放,从而影响小鼠免疫功能.

关键词：病毒感染免疫功能 TLR3基因敲除干扰素β 炎性因子

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