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第十二届中国实验动物科学年会

作者：孟庆文周长良王伟邓瑞坡臧凤霞陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江哈尔滨

目的建立H9N2亚型禽流感病毒感染海兰白鸡的感染模型,了解其对海兰白鸡的致病性,为评价抗流感转基因鸡研究奠定基础.方法将80只4周龄的海兰白鸡随机分为8组,每组10只,其中感染组5只,同居组5只;攻毒剂量为100 ～ 107 EID50/0.4mL,攻毒... 详细信息

目的建立H9N2亚型禽流感病毒感染海兰白鸡的感染模型,了解其对海兰白鸡的致病性,为评价抗流感转基因鸡研究奠定基础.方法将80只4周龄的海兰白鸡随机分为8组,每组10只,其中感染组5只,同居组5只;攻毒剂量为100 ～ 107 EID50/0.4mL,攻毒方式为滴鼻和点眼,感染24h后放入同居组.感染14d内每天进行临床观察,采集咽拭子和泄殖腔拭子用于病毒分离,感染后7、10、14d测定HI抗体滴度.结果 4周龄海兰白鸡感染H9N2流感病毒后未出现明显的临床症状;攻毒剂量为100～ 101 EID50/0.4mL的感染组和同居组均未分离到病毒;攻毒剂量为102～ 103 EID50/0.4mL的感染组排毒期为2～6d,同居组排毒期为4～ 6d;攻毒剂量为104 ～ 107 EID50/0.4mL感染组排毒期为1～ 6d,同居组排毒期为2～8d;攻毒剂量为102～107 EID50/0.4mL感染组和同居组鸡分别于感染后7和10d开始产生抗体,第14d感染组和同居组鸡的平均抗体滴度(log 2)分别为7.8±1.4和6.7±1.1.结论该毒株使4周龄海兰白鸡全部感染的最低攻毒剂量为103 EID50/0.4mL,以106 EID50/0.4mL的攻毒剂量感染鸡,能刺激感染组与同居组鸡产生较高的HI抗体,建立了海兰白鸡的H9N2亚型禽流感病毒感染模型,为H9N2亚型流感病毒的致病机理及表达抗流感基因的转基因鸡研究奠定了基础.

关键词： H9N2 禽流感病毒海兰白鸡感染传播

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东北地区奶牛乳房炎表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌的分子流行病学及耐药性研究

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中国预防兽医学报 2016年第4期38卷 307-311页

作者：董志民张万江刘琪卢中冶王秋东华欣韩吉雨宋丽华刘思国吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古伊利实业集团股份有限公司内蒙古呼和浩特010080 农安县动物卫生监督所吉林长春130200

为调查表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌在东北地区的流行病学情况和耐药性,本研究对来自东北地区3个大型奶牛场采集的330份奶样进行葡萄球菌的分离、鉴定及其耐药表型的检测,并采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分离株的亲缘性分析,对表皮葡萄... 详细信息

为调查表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌在东北地区的流行病学情况和耐药性,本研究对来自东北地区3个大型奶牛场采集的330份奶样进行葡萄球菌的分离、鉴定及其耐药表型的检测,并采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分离株的亲缘性分析,对表皮葡萄球菌进行多位点序列分型(MLST),同时应用PCR扩增分离株中携带的相关耐药基因。研究结果表明,在330份奶样中共分离到表皮葡萄球菌32株(9.7%),腐生葡萄球菌34株(10.3%);PFGE分析共获得9种不同谱型的表皮葡萄球菌和11种不同谱型的腐生葡萄球菌。药敏试验结果显示,两种菌对青霉素(70%)、苯唑西林(60%)和林克霉素(55%)的耐药率较高,主要耐药基因为lnu(B)(40%)、erm(B)(30%)和mec A(25%)。本研究结果揭示了东北地区奶牛乳房炎病原菌表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌的耐药谱和流行情况,为临床合理用药及奶牛乳房炎的防控提供了实验依据。

关键词：表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌分子流行病学多位点序列分型

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副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素对细胞毒性机制的研究

副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素对细胞毒性机制的研究

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中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会

作者：牛惠李艳玲周泷李大鹏张艳禾李刚谢芳王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨 150001

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,***)是引起副猪嗜血杆菌病的病原,该病主要表现为多发性浆膜炎、关节炎及脑膜炎.细胞致死膨胀毒素(Cytolethal distending toxin,CDT)是***的重要毒力园子,由CdtA、CdtB和CdtC3个亚基组成.CDT全毒素... 详细信息

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,***)是引起副猪嗜血杆菌病的病原,该病主要表现为多发性浆膜炎、关节炎及脑膜炎.细胞致死膨胀毒素(Cytolethal distending toxin,CDT)是***的重要毒力园子,由CdtA、CdtB和CdtC3个亚基组成.CDT全毒素能够引起最显著的细胞膨胀、细胞周期阻滞和细胞凋立。p53信号通路抑制剂Pifithrin-α和CDT共同处理PK-15细胞能够明显地抑制其细胞凋立，说明CDT诱导的凋亡是p53依赖的。

关键词：副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素细胞毒性分子机制

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湖南省洞庭湖区5株H6N6亚型禽流感毒株HA、NA基因的遗传进化分析

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中国动物检疫 2016年第1期33卷 9-12页

作者：宋跃君谭丹邓国华王昌建朱春霞张朝阳刘道新黄建龙湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙410014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了从分子生物学角度了解H6N6亚型禽流感病毒在湖南省洞庭湖区的变异特点和进化规律,为该地区H6N6亚型禽流感的防控提供一些理论依据,对2012年在洞庭湖区分离的H6N6亚型禽流感毒株的HA、NA基因进行扩增、克隆和测序,并对所得序列进行... 详细信息

为了从分子生物学角度了解H6N6亚型禽流感病毒在湖南省洞庭湖区的变异特点和进化规律,为该地区H6N6亚型禽流感的防控提供一些理论依据,对2012年在洞庭湖区分离的H6N6亚型禽流感毒株的HA、NA基因进行扩增、克隆和测序,并对所得序列进行同源性和遗传进化分析。结果显示,本试验分离到的5株H6N6亚型禽流感毒株HA裂解位点为PQIETR↓GLF,均没有多个连续的碱性氨基酸插入,属于低致病性病毒;5株病毒的HA和NA潜在的糖基化位点有一些差别,这些差别是否会引起其毒力和致病力上的差异还有待研究;从基因遗传进化关系来看,这些毒株与我国汕头、广西分离的毒株同源性较高。

关键词： H6N6亚型禽流感同源性遗传进化

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一株野鸟源H3N8亚型流感病毒分离株的全基因组序列分析

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中国动物检疫 2016年第4期33卷 77-79,93页

作者：兰玲王涛王晶程子兵邓国华陈化兰新疆动物卫生监督所新疆乌鲁木齐830011 塔城市动物疫控中心新疆塔城834300 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本研究对2014年从新疆额敏县分离到的一株野鸟源H3N8亚型流感病毒A/wild bird/Xinjiang/S3525/2014(H3N8)进行了全基因序列和进化分析。序列分析显示,HA裂解位点序列为^(339)PEKQTR-GLFG^(348),为典型的低致病性禽流感病毒特征,NA基因具... 详细信息

本研究对2014年从新疆额敏县分离到的一株野鸟源H3N8亚型流感病毒A/wild bird/Xinjiang/S3525/2014(H3N8)进行了全基因序列和进化分析。序列分析显示,HA裂解位点序列为^(339)PEKQTR-GLFG^(348),为典型的低致病性禽流感病毒特征,NA基因具有6个潜在的糖基化位点,与病毒株A/mallard/Czech Republic/14333-1K/2011(H3N8)核苷酸高度同源(97.7%)。该毒株的内部基因来源较复杂,其PB1、NP基因分别与A/ruddy shell duck/Mongolia/921C2/2009(H7N1)和A/wild duck/Korea/MHC39-26/2011(H7N9)的同源性最高,其余内部基因与H2、H3、H6、H7等亚型禽流感病毒分离株同源性最高,呈现明显的异源性。除PB2基因外,其余基因片段均来源于野鸟源禽流感病毒。

关键词：流感病毒 H3N8亚型基因组分析

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结核分枝杆菌rv0394c基因在耻垢分枝杆菌中的表达及其粘附特性的鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第3期37卷 199-202页

作者：李华芳曹俊刘松艳陈利苹刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

本实验室前期研究鉴定出结核分枝杆菌的rv0394c基因产物具有透明质酸酶的活性,但对于该酶在分枝杆菌致病中的作用尚不清楚。为了鉴定该蛋白对细胞是否具有粘附特性,本研究利用大肠杆菌表达纯化的重组蛋白RV0394c与人肺泡上皮细胞(A549细... 详细信息

本实验室前期研究鉴定出结核分枝杆菌的rv0394c基因产物具有透明质酸酶的活性,但对于该酶在分枝杆菌致病中的作用尚不清楚。为了鉴定该蛋白对细胞是否具有粘附特性,本研究利用大肠杆菌表达纯化的重组蛋白RV0394c与人肺泡上皮细胞(A549细胞)互作,通过激光共聚焦显微镜观察到蛋白对细胞的特异性粘附。为进一步验证该试验结果,将rv0394c基因克隆至大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒p MV262中,将重组质粒电转化于非致病性的耻垢分枝杆菌中进行表达。构建的重组菌与A549细胞进行互作,结果表明重组菌可以粘附于A549细胞表面,而且这种粘附能够被RV0394c重组蛋白所阻断,这些结果表明RV0394c蛋白具有粘附细胞的能力,属于该菌的粘附蛋白之一。RV0394c蛋白粘附特性的鉴定为进一步研究该蛋白在致病性中的作用提供了实验依据。

关键词：结核分枝杆菌 rv0394c基因 pMV262 耻垢分枝杆菌粘附

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牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白表位鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第11期37卷 871-874,898页

作者：周跃辉朱远茂任建乐严昊王雪枝马磊史鸿飞薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)g D蛋白抗原表位,本研究利用p ET-30a原核表达系统表达、纯化了重组g D蛋白,采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,取脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,以重组g D蛋白作为包被抗原,通过间接ELISA筛选出... 详细信息

为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)g D蛋白抗原表位,本研究利用p ET-30a原核表达系统表达、纯化了重组g D蛋白,采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,取脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,以重组g D蛋白作为包被抗原,通过间接ELISA筛选出一株稳定分泌抗g D蛋白的MAb杂交瘤细胞株(1G3)。间接免疫荧光结果表明:MAb与IBRV呈阳性反应,中和试验测定其腹水中和效价为1∶32。利用肽扫描技术原核表达GST融合短肽对MAb 1G3识别的抗原表位进行筛选鉴定,结果表明:该MAb识别的抗原表位为259EESKGYE265。蛋白序列分析表明该抗原表位在IBRV各分离株及牛疱疹病毒5型(Bo HV-5)中均保守。本研究为IBRV的糖蛋白g D的结构和免疫学特性及IBRV致病性的深入研究奠定了基础。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 gD蛋白单克隆抗体表位鉴定

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新疆地区2011～2012年马病毒性动脉炎的血清学调查

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新疆畜牧业 2016年第1期31卷 37-38,33页

作者：阿依吐拉.肉孜赵世华盛卓君美热木古丽居马别克王文阿孜古丽相文华新疆维吾尔自治区动物卫生监督所新疆乌鲁木齐830063 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 奇台县动物疾病控制中心新疆奇台831800

本实验采用法国进口马病毒性动脉炎间接ELISA诊断试剂盒对来自新疆4个地区的435份马血清样品进行检测,结果显示,有2份血清检测为阳性,阳性率为1.26%。其中伊犁种马场、昭苏种马场和哈密伊吾县送检血清均为阴性,巴州和静县检出2份阳性血... 详细信息

本实验采用法国进口马病毒性动脉炎间接ELISA诊断试剂盒对来自新疆4个地区的435份马血清样品进行检测,结果显示,有2份血清检测为阳性,阳性率为1.26%。其中伊犁种马场、昭苏种马场和哈密伊吾县送检血清均为阴性,巴州和静县检出2份阳性血清。目前该病在我国还没有分离到病毒的相关报道,本次流行病学调查研究,对于该病在我国新疆地区的流行现状具有重要的指导意义。

关键词：新疆马病毒性动脉炎血清学调查

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虎源细小病毒的分离鉴定及其VP2基因分析

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中国预防兽医学报 2015年第9期37卷 721-724页

作者：刘永相李秀云刘鑫蒋艳妹郭冬春田进仇铮邹希明曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 北方森林动物园黑龙江哈尔滨150332

为研究虎源细小病毒的分子遗传特征,本研究从东北虎腹泻粪便样品中分离到一株虎源细小病毒(HRB-T2014)。对该分离株的VP2基因进行克隆测序分析,结果表明,HRB-T2014与虎源细小病毒FJ405225和HT-374的相似性最高,达到99.9%,而与犬源细小... 详细信息

为研究虎源细小病毒的分子遗传特征,本研究从东北虎腹泻粪便样品中分离到一株虎源细小病毒(HRB-T2014)。对该分离株的VP2基因进行克隆测序分析,结果表明,HRB-T2014与虎源细小病毒FJ405225和HT-374的相似性最高,达到99.9%,而与犬源细小病毒相似性最低,仅为98.1%。VP2基因核苷酸序列系统发育树分析结果显示,HRB-T2014与虎源中国分离株位于同一进化分支,并与猫和貂细小病毒共处于猫细小病毒分支,而与犬细小病毒处于不同的进化分支。以上结果表明,HRB-T2014与猫源细小病毒具有共同的遗传起源。

关键词：虎细小病毒分离鉴定 VP2基因序列分析

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副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素各亚基处理PK-15细胞的基因表达谱分析

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中国预防兽医学报 2015年第5期37卷 371-374页

为研究副猪嗜血杆菌(***)细胞致死膨胀毒素(CDT)各亚基(Cdt A、Cdt B和Cdt C)的相关生物学功能,本研究采用基因芯片技术对以CDT各亚基处理的PK-15细胞基因表达谱进行检测和分析。通过比较各亚基处理细胞与空白对照细胞基因表达谱的检测... 详细信息

为研究副猪嗜血杆菌(***)细胞致死膨胀毒素(CDT)各亚基(Cdt A、Cdt B和Cdt C)的相关生物学功能,本研究采用基因芯片技术对以CDT各亚基处理的PK-15细胞基因表达谱进行检测和分析。通过比较各亚基处理细胞与空白对照细胞基因表达谱的检测结果显示,Cdt A、Cdt B和Cdt C作用PK-15细胞后,处理细胞中分别有91个基因、126个基因及135个基因出现差异表达变化。根据芯片结果选取变化较显著的基因进行荧光定量RT-PCR验证,结果与基因芯片检测结果基本一致。基因注释(GO)分析表明,这些蛋白分别参与免疫系统调节、生物调控、代谢过程和定位等过程。本研究结果为进一步研究CDT的致病作用机制奠定了基础。

关键词：副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素表达谱基因芯片

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