检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2015年第1期37卷 6-9页

作者：王德丽慈彦鹏崔艳芳樊兆斌刘丽玲田国彬曾显营陈化兰李雁冰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

2013年,从秦皇岛野鸟林鹬体内分离到一株H10N7亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/Wood Sandpiper/Qinhuangdao/660-662/2013(H10N7)[简称WSP/QHD/660-662/2013(H10N7)]。本研究对该分离株的全基因序列进行测定,并对其进行致病性研究。基因组序列分析表明:该病毒的HA蛋白裂解位点为334PELMQGRGL343,属于低致病性AIV的分子特征,其HA基因与A/Duck/Hunan/S11205/2012(H10N3)的相似性达到97.90%,NA基因与A/Domestic Duck/Republic of Georgia/1/2010(H10N7)的相似性达到97.46%,内部基因与H9N2等多亚型AIV的相应基因节段具有较高的相似性,推测该分离株可能为一株多亚型流感病毒的重组株。对动物致病性试验结果显示:该病毒可以感染哺乳动物模型BALB/c小鼠,并且仅能够在鼠的肺脏和鼻甲骨粘膜上皮细胞中复制,表明该病毒分离株对小鼠也呈现低致病性。

关键词：禽流感病毒 H10N7 进化分析致病性

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两株野鸟源H9N2亚型禽流感病毒的进化分析和对小鼠的感染性研究

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中国预防兽医学报 2015年第11期37卷 817-820页

作者：肖丽崔鹏飞张芳关立峥施建忠邓国华陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为了解2015年分离自我国四川省野鸟粪便中的两株H9N2亚型禽流感病毒(AIV)Wild Bird/SC/S1264/2015(H9N2)(WB/SC/264/15)和Wild Bird/SC/S1411/2015(H9N2)(WB/SC/411/15)的生物学特性,本研究对其进行了全基因组序列测定和BALB/c小鼠的感染性试验。序列分析结果显示:两个分离株的HA裂解位点基序均为333PSRSSR↓GL340,符合低致病性AIV(LPAIV)的氨基酸序列特征,HA蛋白受体结合位点处的第226以及228位氨基酸残基分别为谷氨酰胺(Q)和甘氨酸(G),具有结合禽源AIV受体的分子特征。内部基因片段来源复杂,呈现明显的基因多样性。BALB/c小鼠的感染性试验结果显示,这两个分离株只在小鼠的上呼吸道鼻甲中有效复制,小鼠体重变化轻微,未见明显临床症状。

关键词：禽流感病毒 H9N2亚型野鸟进化感染性

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鸡NK细胞相关C型凝集素样编码基因研究进展

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动物医学进展 2015年第6期36卷 134-137页

作者：吴少莲韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

鸡的C型凝集素样基因编码包括鸡自然杀伤(natural killer,NK)细胞受体在内的许多免疫分子。鸡C型凝集素样编码基因分别位于自然杀伤基因复合体(NK gene complex,NKC)和主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)区域,... 详细信息

鸡的C型凝集素样基因编码包括鸡自然杀伤(natural killer,NK)细胞受体在内的许多免疫分子。鸡C型凝集素样编码基因分别位于自然杀伤基因复合体(NK gene complex,NKC)和主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)区域,在NKC区为CD69和CD94/NKG2,在MHC区为相邻的B-NK和B-Lec基因。B-NK是目前唯一已证明表达于NK细胞上的凝集素样受体,其配体尚不清楚,但是已经证明B-NK能够和活化的细胞上的配体结合。论文主要讨论CD69、CD94/NKG、B-NK和BLec 4个基因的系统发育比较和蛋白质结构的研究进展。

关键词：鸡 NK细胞 C型凝集素样受体

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一株自然重组的鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及分析

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中国预防兽医学报 2015年第6期37卷 418-421页

作者：徐倩倩王秋玲张婷婷韩宗玺梁殊林赵妍马得莹刘胜旺东北农业大学动物科技学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽病研究室黑龙江哈尔滨150001

本研究从吉林省德惠市某父母代蛋鸡场发生疑似呼吸道病毒感染的鸡群中分离到一株鸡传染性支气管炎病毒(IBV),命名为ck/CH/LJL/130908。该病毒基因型鉴定为Massachusetts型,与H120疫苗株和Mass 41强毒株S1基因的同源性分别为96.4%和94.4%... 详细信息

本研究从吉林省德惠市某父母代蛋鸡场发生疑似呼吸道病毒感染的鸡群中分离到一株鸡传染性支气管炎病毒(IBV),命名为ck/CH/LJL/130908。该病毒基因型鉴定为Massachusetts型,与H120疫苗株和Mass 41强毒株S1基因的同源性分别为96.4%和94.4%,与H120的亲缘关系更近。但基因组遗传进化分析显示,ck/CH/LJL/130908与Ark病毒遗传关系较近。推测该病毒在起源和进化过程中可能发生了重组。应用Sim Plot软件分析证实了这种推测,表明ck/CH/LJL/130908来源于IBV 4/91、Ark和H120之间的重组。重组位点分别位于基因组ORF1ab的Nsp2、Nsp3、Nsp16和S2编码区。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒全基因序列重组遗传进化分析

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犬副流感病毒HN基因在昆虫细胞中的表达及其间接ELISA检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2015年第8期37卷 615-618页

作者：宋彩玲齐宾宾吕让陈小微曲连东刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为建立检测犬副流感病毒(CPIV)抗体的方法,本研究利用杆状病毒表达系统表达CPIV的HN蛋白,以其为包被抗原,采用方阵法确定包被抗原和血清最佳工作浓度,对各种反应条件进行优化,建立了CPIV血清抗体的间接ELISA检测方法。该方法仅与CPIV阳... 详细信息

为建立检测犬副流感病毒(CPIV)抗体的方法,本研究利用杆状病毒表达系统表达CPIV的HN蛋白,以其为包被抗原,采用方阵法确定包被抗原和血清最佳工作浓度,对各种反应条件进行优化,建立了CPIV血清抗体的间接ELISA检测方法。该方法仅与CPIV阳性血清发生特异性反应,与犬细小病毒(CPV)和犬腺病毒(CAV)的阳性血清无交叉反应;批内和批间变异系数小于10%。利用建立的ELISA方法与血凝抑制试验分别对48份送检犬血清样品进行检测,符合率为92%。本研究为建立快速、准确、简便的犬副流感鉴别诊断试剂盒奠定了基础。

关键词：犬副流感病毒 HN蛋白间接ELISA

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利用假病毒技术筛选H5N1亚型禽流感病毒中和活性单克隆抗体

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中国预防兽医学报 2015年第7期37卷 545-548页

作者：张卓刘明郑世民东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为筛选H5N1禽流感病毒(AIV)血凝素蛋白(HA)特异性中和抗体,本研究构建了表达HA蛋白的重组质粒,利用该重组质粒及缺失表达人免疫缺陷病病毒1型(HIV-1)囊膜蛋白基因的骨架质粒,构建了表面整合有H5亚型AIV HA蛋白的HIV假病毒。利用该假病... 详细信息

为筛选H5N1禽流感病毒(AIV)血凝素蛋白(HA)特异性中和抗体,本研究构建了表达HA蛋白的重组质粒,利用该重组质粒及缺失表达人免疫缺陷病病毒1型(HIV-1)囊膜蛋白基因的骨架质粒,构建了表面整合有H5亚型AIV HA蛋白的HIV假病毒。利用该假病毒系统,筛选得到一株具有中和活性的单克隆抗体(MAb)。经测定,该MAb与纯化的全病毒具有较好的反应性,其对HIV-H5HA假病毒的中和效价为64。中和试验表明该MAb能够有效阻断野生型病毒对鸡胚的感染。本研究结果为开发H5N1 AIV的被动免疫治疗方法奠定了基础,同时对亚单位疫苗的研制也具有一定的意义。

关键词： H5N1禽流感病毒假病毒中和抗体

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伪狂犬病毒人工感染小鼠模型的建立

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中国预防兽医学报 2015年第10期37卷 742-745页

作者：臧素芳黄嘉妮胡守萍张卓张交儿祝瑶何希君中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为建立伪狂犬病毒（PRV）人工感染小鼠的模型，本研究采用PRV强毒株接种猪、羊及小鼠，疫苗株接种小鼠，应用组织病理技术观察PRV人工感染不同动物导致的组织病变。以1×10^2～4．5×10^4TCID50不同梯度剂量PRv强毒株通过滴鼻... 详细信息

为建立伪狂犬病毒（PRV）人工感染小鼠的模型，本研究采用PRV强毒株接种猪、羊及小鼠，疫苗株接种小鼠，应用组织病理技术观察PRV人工感染不同动物导致的组织病变。以1×10^2～4．5×10^4TCID50不同梯度剂量PRv强毒株通过滴鼻或皮下接种途径人工感染小鼠，6×10^4～2．7×10^5TCID50不同剂量疫苗株皮下接种小鼠，统计各人工感染剂量下小鼠存活率。感染PRV动物脑部病理切片经苏木素．伊红（HE）染色观察，结果显示PRV强毒株及疫苗株接种小鼠后与PRV感染猪、羊后出现相似病理变化，均可导致炎性细胞的浸润及大脑实质内小胶质细胞的增殖。免疫组化染色表明PRV可以感染小鼠脑组织。本研究最终采用小鼠作为实验动物，应用PRV疫苗株，采用1×10^5TCID50剂量通过皮下注射接种小鼠，在接种后6d观察病变。该实验模型为进一步研究PRV感染小鼠后的天然免疫机制提供了实验依据。

关键词：伪狂犬病毒人工感染小鼠模型

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肠炎沙门氏菌tu-fA基因缺失株的构建及其生物学特性研究

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中国预防兽医学报 2015年第5期37卷 361-365页

作者：司微于申业陈利苹刘思国李广兴东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

为构建肠炎沙门氏菌(***)tu-fA基因缺失株及鉴定其生物学特性,本实验利用Red重组系统,以pKD3中的FRT-氯霉素抗性(cat^r)基因-FRT序列为模板,利用含有tu-fA基因两端序列的引物,经PCR扩增同源重组DNA片段(tu-fA5'-FRT-cat^r-FRT-tu-fA... 详细信息

为构建肠炎沙门氏菌(***)tu-fA基因缺失株及鉴定其生物学特性,本实验利用Red重组系统,以pKD3中的FRT-氯霉素抗性(cat^r)基因-FRT序列为模板,利用含有tu-fA基因两端序列的引物,经PCR扩增同源重组DNA片段(tu-fA5'-FRT-cat^r-FRT-tu-fA3'),将该DNA片段电转化于含有质粒pKD46的*** SM6株中进行同源重组,通过氯霉素抗性筛选tu-fA基因缺失的SM6株(SM6△tu-f A::cat),再通过导入质粒pCP20于SM6△tu-fA::cat中敲除cat r基因,从而构建了tu-fA基因缺失株SM6△tu-fA。生物学特性鉴定结果表明,基因缺失株具有良好的遗传稳定性;与亲本株相比,细菌形态未发生明显改变,但基因缺失株体外生长速率略低,利用碳源的能力有所增强;缺失株侵袭Caco-2细胞的能力与亲本株相比有所降低,表明tu-f A基因编码的延伸因子(EF-Tu)在调控细菌侵袭细胞的过程中起着一定的作用。本研究通过构建tu-fA基因缺失的***株,为进一步研究tu-fA基因编码的EF-Tu的功能奠定基础。

关键词： Red同源重组系统 tu-fA基因缺失株

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猪瘟病毒衣壳蛋白核仁定位信号鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第2期37卷 93-96页

作者：张鑫刘宁时洪艳徐佳中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省动物卫生监督所黑龙江哈尔滨150069

为鉴定猪瘟病毒(CSFV)衣壳蛋白(C)在细胞中的核仁定位信号(No LS),本研究采用截短表达的方法将含有C基因不同片段的真核表达重组质粒转染猪睾丸细胞(ST)。结果表明,瞬时表达的截短C蛋白的aa51-aa71多肽定位于ST细胞核仁中。而将C蛋白的a... 详细信息

为鉴定猪瘟病毒(CSFV)衣壳蛋白(C)在细胞中的核仁定位信号(No LS),本研究采用截短表达的方法将含有C基因不同片段的真核表达重组质粒转染猪睾丸细胞(ST)。结果表明,瞬时表达的截短C蛋白的aa51-aa71多肽定位于ST细胞核仁中。而将C蛋白的aa51-aa71缺失突变后,C蛋白则丧失了其核仁定位的能力。此外,将C蛋白的51KKK53突变为51AAA53,也同样导致C蛋白丧失核仁定位能力,表明该序列为核仁定位的核心基序。本研究为进一步分析C蛋白在CSFV复制过程中的功能提供了实验依据。

关键词：猪瘟病毒衣壳蛋白核仁定位信号

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猪瘟病毒衣壳蛋白与宿主细胞核仁素蛋白相互作用

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中国预防兽医学报 2015年第6期37卷 430-433页

作者：张鑫时洪艳徐佳中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省动物卫生监督所黑龙江哈尔滨150069

为鉴定猪瘟病毒(CSFV)衣壳蛋白(C)与宿主细胞核仁素(NCL)蛋白的相互作用,本研究将重组质粒p EGFP-CSFV-C转染至猪睾丸细胞(ST)中,采用GST pull-down和免疫共沉淀方法沉淀ST细胞中的NCL蛋白,通过共聚焦显微镜分析C蛋白和NCL蛋白的共定位... 详细信息

为鉴定猪瘟病毒(CSFV)衣壳蛋白(C)与宿主细胞核仁素(NCL)蛋白的相互作用,本研究将重组质粒p EGFP-CSFV-C转染至猪睾丸细胞(ST)中,采用GST pull-down和免疫共沉淀方法沉淀ST细胞中的NCL蛋白,通过共聚焦显微镜分析C蛋白和NCL蛋白的共定位情况。结果表明,CSFV C蛋白与NCL蛋白在核仁中存在共定位现象,并且在体外和转染细胞中均存在相互作用。NCL蛋白被抑制后,CSFV的复制能力下降。本研究为进一步分析C蛋白核转运机制以及在CSFV复制过程中的功能提供了实验依据。

关键词：猪瘟病毒衣壳蛋白核仁素相互作用

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